免疫标记技术.pptx
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1、免疫标记技术免疫标记技术=抗原抗体反应抗原抗体反应抗原抗体反应抗原抗体反应示踪物标记示踪物标记示踪物标记示踪物标记灵敏性灵敏性灵敏性灵敏性特异性特异性特异性特异性免疫标记技术的主要特点:免疫标记技术的主要特点:高特异性高特异性、高灵敏性高灵敏性免疫技术免疫技术+标记技术标记技术酶酶酶酶荧光素荧光素荧光素荧光素同位素同位素同位素同位素免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术放射物标记技术放射物标记技术放射物标记技术放射物标记技术酶标技术酶标技术酶标技术酶标技术免疫荧光技术免疫荧光技术免疫荧光技术免疫荧光技术其他标记技术其他标记技术其他标记技术其他标记技术酶联免疫吸附技术酶联免疫吸附技术酶
2、联免疫吸附技术酶联免疫吸附技术酶免疫组化技术酶免疫组化技术酶免疫组化技术酶免疫组化技术双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法竞竞竞竞 争争争争 法法法法双抗原夹心法双抗原夹心法双抗原夹心法双抗原夹心法间间间间 接接接接 法法法法双位一点法双位一点法双位一点法双位一点法1.ELISA检测检测HBsAg(小组做小组做)实验内容实验内容3.免疫标记技术免疫标记技术(录像录像)2.尿液尿液HCG检测检测(胶体金法胶体金法)()(小组做小组做)实验目的实验目的1.1.掌握酶联免疫吸附实验的基本原理;掌握酶联免疫吸附实验的基本原理;2.2.了解利用双抗体夹心法测定了解利用双抗体夹心法测定HBsA
3、gHBsAg的方法。的方法。3.了解胶体金法检测了解胶体金法检测HCG的原理、方法。的原理、方法。基本原理基本原理 利用酶催化底物反应的生物放大作用利用酶催化底物反应的生物放大作用利用酶催化底物反应的生物放大作用利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特异提高特异提高特异提高特异性抗原性抗原性抗原性抗原-抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免疫技术。疫技术。疫技术。疫技术。Ag+AbAg+AbE EAgAbAgAbE E+底物底物呈色反应呈色反应一、酶免疫技术一、酶免疫技术EIA固相
4、固相聚苯乙烯聚苯乙烯 AgAgAgAg或或或或AbAbAbAb吸附到固相吸附到固相吸附到固相吸附到固相上的过程上的过程上的过程上的过程,称为称为称为称为包被包被包被包被 (酶免疫测定法酶免疫测定法酶免疫测定法酶免疫测定法)基本特点:基本特点:标记后保留酶和抗原标记后保留酶和抗原(抗体抗体)的活性;的活性;酶促反应专一性,保证特异性;酶促反应专一性,保证特异性;底物反应放大作用,提高敏感性;底物反应放大作用,提高敏感性;酶标试剂保存稳定;酶标试剂保存稳定;操作简便,安全易行。操作简便,安全易行。常用酶及其底物常用酶及其底物常用底物:常用底物:常用底物:常用底物:邻苯二胺邻苯二胺邻苯二胺邻苯二胺(
5、OPD)(OPD):反应显橙黄色,应避光,致癌性。:反应显橙黄色,应避光,致癌性。:反应显橙黄色,应避光,致癌性。:反应显橙黄色,应避光,致癌性。四甲基联苯胺四甲基联苯胺四甲基联苯胺四甲基联苯胺(TMB)(TMB):反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性:反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性:反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性:反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性,但水溶性差。但水溶性差。但水溶性差。但水溶性差。常用底物:常用底物:常用底物:常用底物:对硝基苯磷酸酯对硝基苯磷酸酯对硝基苯磷酸酯对硝基苯磷酸酯(p-NPP)(p-NPP):产物为黄色。:产物为黄色。:产物为黄色。:产物为黄色。APAP灵敏性高于灵
6、敏性高于灵敏性高于灵敏性高于HRPHRP,但不易获得纯品,且稳定性低于,但不易获得纯品,且稳定性低于,但不易获得纯品,且稳定性低于,但不易获得纯品,且稳定性低于HRPHRP、价高,故应用不如、价高,故应用不如、价高,故应用不如、价高,故应用不如HRPHRP普及。普及。普及。普及。1.1.辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)(HRP)2.2.碱性磷酸酶碱性磷酸酶(AP)(AP)酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)ELISAELISA基本的实验过程基本的实验过程双抗体夹心法检测双抗体夹心法检测HBsAgHBsAg HB
7、VHBV感染后的血清学指标感染后的血清学指标:HBsAg,HBsAbHBsAg,HBsAbHBeAg,HBeAbHBeAg,HBeAb HBcAb(IgG,IgM)HBcAb(IgG,IgM)乙肝表面抗原乙肝表面抗原乙肝表面抗原乙肝表面抗原,存在于存在于存在于存在于HBVHBVHBVHBV感染的急性期及慢感染的急性期及慢感染的急性期及慢感染的急性期及慢性期的血清中性期的血清中性期的血清中性期的血清中,为感染为感染为感染为感染指标。指标。指标。指标。实验材料实验材料1.HBV1.HBV诊断试剂盒;诊断试剂盒;2.HBsAg2.HBsAg阳性对照品,阴性对照品,待检品。阳性对照品,阴性对照品,待检
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