免疫试验1.pptx
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1、免疫实验课安排免疫实验课安排2012.3.26-5.14 6次课次课 24学时学时实验内容:实验内容:1.凝集反应与沉淀反应(凝集反应与沉淀反应(116)2.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验(小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验(211)3.酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA直接法)(直接法)(214)4.人外周血单核细胞分离试验(人外周血单核细胞分离试验(116)5.小鼠腹腔巨噬细胞分离与免疫细胞化学试验小鼠腹腔巨噬细胞分离与免疫细胞化学试验(211)6.实验设计与考试(实验设计与考试(211)免疫学检测技术的分类免疫学检测技术的分类 抗原抗体反应抗原抗体反应 凝集反应(试管凝集试验)凝集反应(试管凝
2、集试验)凝集反应(试管凝集试验)凝集反应(试管凝集试验)沉淀反应(双向免疫扩散试验)沉淀反应(双向免疫扩散试验)沉淀反应(双向免疫扩散试验)沉淀反应(双向免疫扩散试验)酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验(ELISAELISA)淋巴细胞检测技术淋巴细胞检测技术 外周血单个核细胞分离试验外周血单个核细胞分离试验外周血单个核细胞分离试验外周血单个核细胞分离试验 小鼠腹腔巨噬细胞分离及小鼠腹腔巨噬细胞分离及小鼠腹腔巨噬细胞分离及小鼠腹腔巨噬细胞分离及 免疫细胞化学染色试验免疫细胞化学染色试验免疫细胞化学染色试验免疫细胞化学染色试验 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验小鼠腹腔巨
3、噬细胞吞噬试验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验 补体依赖细胞毒试验(补体依赖细胞毒试验(补体依赖细胞毒试验(补体依赖细胞毒试验(CDCCDC)细胞因子检测技术细胞因子检测技术 免疫学常用分子生物学技术免疫学常用分子生物学技术 实验报告书写的原则实验报告书写的原则实验题目:实验题目:单核细胞分离单核细胞分离 实验时间:实验时间:2012.3.28实验目的:实验目的:分离人类外周血单核细胞分离人类外周血单核细胞实验原理:实验原理:由于不同细胞的密度不同,因此可利用密度梯度由于不同细胞的密度不同,因此可利用密度梯度 离心法将不同比重的细胞分开。离心法将不同比重的细胞分开。实验材料:实
4、验材料:试管、抗凝血试管、抗凝血实验步骤与结果:实验步骤与结果:肉眼可见灰白层,肉眼可见灰白层,1ml血收获血收获xx细胞。细胞。结果分析:结果分析:本次分离细胞较正常人单个核细胞数少,可能原本次分离细胞较正常人单个核细胞数少,可能原 因一是实验误差所致,二是该患者为白细胞减少因一是实验误差所致,二是该患者为白细胞减少 症。症。实验设计的原则实验设计的原则研究的题目:研究的题目:确定研究题目是开展研究工作的首确定研究题目是开展研究工作的首要任务。要任务。研究摘要:研究摘要:研究背景,要开展的主要研究(可以研究背景,要开展的主要研究(可以叙述利用什么样的方法开展研究),研究意义叙述利用什么样的方
5、法开展研究),研究意义(本次研究的预期成果及其推动科学进步的作用)。(本次研究的预期成果及其推动科学进步的作用)。研究内容:研究内容:叙述主要开展的工作。叙述主要开展的工作。研究方案:研究方案:利用什么样的手段去解决研究内容提利用什么样的手段去解决研究内容提到的相关工作。到的相关工作。研究的特色与创新之处:研究的特色与创新之处:主要科学贡献。主要科学贡献。题目:题目:XX细胞因子细胞因子诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究摘要:摘要:肺癌是最常见的肿瘤之一。肺癌是最常见的肿瘤之一。XX与多种肿瘤的发生发展与多种肿瘤的发生发展有关,但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本
6、研究采用人肺癌有关,但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本研究采用人肺癌细胞,利用流式细胞术分析细胞,利用流式细胞术分析XX诱导人肺癌细胞凋亡作用,通诱导人肺癌细胞凋亡作用,通过分析过分析Caspase3,8,12等确定等确定XX诱导肿瘤细胞凋亡机制。本诱导肿瘤细胞凋亡机制。本研究不仅可以进一步揭示研究不仅可以进一步揭示XX抗肿瘤作用机制,也为寻找新的抗肿瘤作用机制,也为寻找新的肺癌治疗方法提供研究基础。肺癌治疗方法提供研究基础。研究内容:研究内容:1)XX在人肺癌肿瘤细胞的表达分析,确定在人肺癌肿瘤细胞的表达分析,确定XX表表达与达与肺肿瘤的关系。肺肿瘤的关系。2)检测患者血清)检测患者血清XX水
7、平,确定其辅助水平,确定其辅助诊断肺癌的价值诊断肺癌的价值 研究方案:研究方案:1)采用肿瘤组织切片,通过免疫细胞化学染色观)采用肿瘤组织切片,通过免疫细胞化学染色观察察XX在人肺癌组织中的表达情况。在人肺癌组织中的表达情况。2)采用)采用ELISA法检测血清法检测血清XX水平。水平。研究的特色与创新之处:研究的特色与创新之处:本研究阐述了本研究阐述了XX与肺癌的关系,并与肺癌的关系,并提出提出XX可作为肺癌的血清学诊断标志物,研究发现可作为肺癌的血清学诊断标志物,研究发现XX可以诱可以诱导肺癌细胞凋亡,并阐述了其作用机制。导肺癌细胞凋亡,并阐述了其作用机制。实验设计考试实验设计考试肿瘤患者存
8、在多种免疫异常,请设计一个肿瘤患者存在多种免疫异常,请设计一个实验分析肿瘤患者体内巨噬细胞功能。实验分析肿瘤患者体内巨噬细胞功能。主要包括主要包括 1)题目)题目 2)研究内容)研究内容 3)研究方案)研究方案 4)预期结果)预期结果2010级五年制本科生免疫学实验课主讲:倪维华主讲:倪维华Email:试管凝集试管凝集测定血型抗体效价测定血型抗体效价双向免疫扩散双向免疫扩散实验内容抗原抗体反应分类凝集反应凝集反应琼脂沉淀反应琼脂沉淀反应中和反应中和反应补体结合反应补体结合反应环状法环状法絮状法絮状法沉淀反应沉淀反应单向免疫扩散、单向免疫扩散、双向免疫扩散双向免疫扩散对流免疫电泳、火箭电泳对流免
9、疫电泳、火箭电泳免疫电泳免疫电泳反应分类反应分类实验原理实验原理:在试管中,在试管中,颗粒性抗原颗粒性抗原与与相应相应抗体抗体在有适量电解在有适量电解质存在时,直接结合可形成肉眼可见的质存在时,直接结合可形成肉眼可见的凝集块凝集块。试管凝集试管凝集测定血型抗体效价测定血型抗体效价实验目的利用凝集试验判断抗体的效价利用凝集试验判断抗体的效价效价:效价:也称滴度,它的表示法与抗体的稀也称滴度,它的表示法与抗体的稀释倍数有关,一般以该抗体能与其对应的释倍数有关,一般以该抗体能与其对应的抗原发生可见反应的抗原发生可见反应的最高稀释度最高稀释度来表示。来表示。实验材料实验材料名称名称量量/组组生理盐水生
10、理盐水20ml20ml0.5%0.5%压积血(压积血(RBCRBC)8ml8ml抗体抗体1ml1ml1ml1ml刻度吸管刻度吸管2 2支支1ml 1ml 加样器加样器1 1支支1ml 1ml 加样器头加样器头若干若干小试管小试管2828支支 (7(7支支/人人)试管架试管架1 1个个3737孵箱孵箱1 1个个/室室记号笔记号笔1 1只只实验以个人为单位,物品四个人一组实验以个人为单位,物品四个人一组实验步骤实验步骤1.1.抗体倍比稀释。抗体倍比稀释。抗体倍比稀释。抗体倍比稀释。2.2.稀释好的试管中各加入红细胞稀释好的试管中各加入红细胞稀释好的试管中各加入红细胞稀释好的试管中各加入红细胞0.5
11、ml0.5ml0.5ml0.5ml。3.3.加样后摇动试管,使红细胞与血清充分混合。加样后摇动试管,使红细胞与血清充分混合。加样后摇动试管,使红细胞与血清充分混合。加样后摇动试管,使红细胞与血清充分混合。4.4.37 37 37 37 孵育孵育孵育孵育90mins90mins90mins90mins后进行结果观察。后进行结果观察。后进行结果观察。后进行结果观察。试管号试管号试管号试管号1 12 23 34 45 56 67 7抗体抗体抗体抗体(血清血清血清血清)0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml-抗原抗原抗原
12、抗原(红细胞红细胞红细胞红细胞)0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml血清稀释度血清稀释度血清稀释度血清稀释度1/1201/1201/2401/2401/4801/4801/9601/9601/19201/19201/38401/3840-抗体抗体(血清血清)倍比稀释方法倍比稀释方法1.1.取七只抗体稀释管,编号。取七只抗体稀释管,编号。2.2.每只管中先加入生理盐水每只管中先加入生理盐水0.5ml0.5ml。3.3.取取0.5ml0.5ml血清加入第一管中,混匀后取出血清加入第一管中,混匀后
13、取出0.5ml0.5ml加入第二管,依此类推。加入第二管,依此类推。4.4.第第7 7管为阴性对照,不加抗体(血清)。管为阴性对照,不加抗体(血清)。0.5ml 生理盐水生理盐水1/60 1/120 1/240 1/480 1/960 1/1920 -1/30血清血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.51 2 3 4 5 6 7 操作前清点好实验物品、器材。操作前清点好实验物品、器材。吸抗体与红细胞的加样器头不能混用。吸抗体与红细胞的加样器头不能混用。观察结果时不要摇动试管。观察结果时不要摇动试管。注注 意意 事事 项项凝集程度判定:凝集程度判定:凝集程度判定:凝集程度判定:4 4
14、 4 4:红细胞全部凝集,上清澄清,晃动时凝集物成片状分散:红细胞全部凝集,上清澄清,晃动时凝集物成片状分散:红细胞全部凝集,上清澄清,晃动时凝集物成片状分散:红细胞全部凝集,上清澄清,晃动时凝集物成片状分散 3 3 3 3:红细胞绝大部分凝集,上清较澄清:红细胞绝大部分凝集,上清较澄清:红细胞绝大部分凝集,上清较澄清:红细胞绝大部分凝集,上清较澄清 2 2 2 2,红细胞半数凝集,上清略澄清,红细胞半数凝集,上清略澄清,红细胞半数凝集,上清略澄清,红细胞半数凝集,上清略澄清,红细胞少数凝集,肉眼可见小凝块,红细胞少数凝集,肉眼可见小凝块,红细胞少数凝集,肉眼可见小凝块,红细胞少数凝集,肉眼可
15、见小凝块,红细胞极少数凝集,显微镜下可见凝集,红细胞极少数凝集,显微镜下可见凝集,红细胞极少数凝集,显微镜下可见凝集,红细胞极少数凝集,显微镜下可见凝集:无凝集,红细胞在管底成界限清楚的小圆点:无凝集,红细胞在管底成界限清楚的小圆点:无凝集,红细胞在管底成界限清楚的小圆点:无凝集,红细胞在管底成界限清楚的小圆点 阴性对照:第阴性对照:第阴性对照:第阴性对照:第7 7 7 7管(无抗体)为阴性对照管(无抗体)为阴性对照管(无抗体)为阴性对照管(无抗体)为阴性对照血型抗体效价的判定:血型抗体效价的判定:血型抗体效价的判定:血型抗体效价的判定:肉眼可见凝集()时血清的最高稀释度为血型抗体的效价肉眼可
16、见凝集()时血清的最高稀释度为血型抗体的效价肉眼可见凝集()时血清的最高稀释度为血型抗体的效价肉眼可见凝集()时血清的最高稀释度为血型抗体的效价结果判定方法结果判定方法预期实验结果预期实验结果双向免疫扩散实验双向免疫扩散实验双向免疫扩散双向免疫扩散的应用 抗体效价的判定抗体效价的判定 检测体液中各种蛋白成分检测体液中各种蛋白成分实 验 材 料试剂:试剂:试剂:试剂:1.5%1.5%1.5%1.5%琼脂琼脂琼脂琼脂 300ml/room300ml/room300ml/room300ml/room抗抗抗抗OVAOVAOVAOVA抗体抗体抗体抗体 1 1 1 1份份份份/组组组组BSA 1BSA 1
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