DNA细胞周期检测.pptx
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1、Key lab of Medical College of Su Zhou University基本原理概述正常人静止体细胞有46条染色体,相当于7.10-12 pg DNA/细胞核,我们称之为二倍体细胞,而正常增殖细胞则存在不同的DNA含量。在细胞周期(G0,G1,S,G2,M)的各个时期,DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化:在G1期,细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体;Key lab of Medical College of Su Zhou University进入S期后,DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1和G2期之间;当DNA复制结束成为4倍体时,
2、细胞进入G2期,G2期细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期,因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期;一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个子细胞,这两个子细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1,S,G2/M期。Key lab of Medical College of Su Zhou University通过核酸染料标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%,S%及G2/M/%,了解细胞的增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖
3、状态的指标。正常细胞具有较恒定的DNA含量,而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来,这一指数对于肿瘤的早期诊断,交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。Key lab of Medical College of Su Zhou University流式DNA周期示意图GG00/G1/G1静止期及合成前期静止期及合成前期S S合成期合成期 GG22/M/M合成后期及分合成后期及分裂期裂期Key lab of Medical College of Su Zhou University样本制备来源于血液、骨髓、体液、灌洗液、
4、外科手术活检、细针穿刺物等的细胞都可用来做DNA分析。新鲜的、冰冻或固定保存的、或常规固定/包埋用于组织检查的样本均可。通常最好的结果来自新鲜或冰冻的标本。用组织切片的好处是可以通过观察常规染色来选择感兴趣的区域,缺点是不能再用抗体染色来鉴别肿瘤细胞和正常基质细胞。Key lab of Medical College of Su Zhou University实体标本的单细胞制备机械法:用剪刀、刀片剪切组织或金属网研磨获取完整的细胞。但该法获取的细胞数量少。化学药品处理法:利用EDTA或Sodium citrate结合Ca2+或Mg2+等阳离子,破坏细胞间的连接或用Triton X-100、N
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