HIV检测及临床意义.pptx

HIV HIV检测及临床意义检测及临床意义中国每年新发现的HIV/AIDS病例数（19852002）HIV的检测HIV感染可通过两种途径检测1.1.直接检测病毒或其组成部分直接检测病毒或其组成部分2.2.检测人体检测人体HIV免疫反应免疫反应HIV特异性抗体特异性抗体从从感感染染到到血血清清抗抗体体阳阳转转有有一一段段窗窗口口期期，平平均均为为1-31-3个个月，有一小部分月，有一小部分HIVHIV感染者出现延迟反应感染者出现延迟反应HIV感染后抗原和抗体的变化及其与疾病关系HIVHIV感感染染人人体体后后出出现现一一过过性性病病毒毒血血症症，6-86-8周周后后血血清清抗抗体体阳阳转转，病病毒毒滴滴度度降降低低，在在随随后后的的5-85-8年年无无症症状状带带毒毒期期里里HIVHIV抗抗体体一一直直存存在在，但但病病毒毒难难查查到到。进进入入AIDSAIDS期后血浆中病毒再次出现。期后血浆中病毒再次出现。故故诊诊断断HIVHIV感感染染多多数数时时间间用用抗抗体体检检测测诊诊断断，极极早早期期（窗口期）用抗原检测。（窗口期）用抗原检测。HIV抗体诊断 目目前前临临床床上上实实际际应应用用的的是是测测定定特特异异性性HIV抗抗体体，包包括括初初筛筛和和确认确认实验。实验。一、检测试剂一、检测试剂l筛查试剂必须是筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。量优良、在有效期内的试剂。l目前常用的筛查试剂有目前常用的筛查试剂有酶联免疫酶联免疫、颗粒凝集颗粒凝集和和其它其它快速诊断试剂快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。应采用酶联免疫试剂。l自采自供血的单位必须进行自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。血液筛查。2、确认试剂必须确认试剂必须经国家药品监督经国家药品监督管理局注册批准。确认试剂包括免疫管理局注册批准。确认试剂包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验试剂。目前以免疫印迹试剂最为试验试剂。目前以免疫印迹试剂最为常用。常用。1.ELISA方法：方法：目目前前最最常常用用的的初初筛筛实实验验，自自19851985年年首首次次检检测测HIV-1HIV-1抗抗体体的的试试剂剂盒盒供供市市以以来来，已已从从第第一一代代的的全全病病毒毒抗抗原原间间接接法法发发展展到到第第四四代代的的以以重重组组的的多多肽肽抗抗原原及及抗抗P24P24抗抗体体包包被被的双夹心法，使窗口期缩短了的双夹心法，使窗口期缩短了2-32-3周。周。四代艾滋病酶联免疫试剂比较solidphasespecificdetection ofconjugate第一代第一代病毒裂解液病毒裂解液HIV-1IgG 抗体抗体HIV-1-IgG抗体抗体第二代第二代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2IgG 抗体抗体HIV-1/-2 IgG抗体抗体第三代第三代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-OIgM/IgG 抗体抗体HIV-1/-2/-O病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-O第四代第四代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 AbIgM/IgG 抗体抗体HIV-1/-2/-Op24 抗原抗原病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 抗体抗体检测结果的报告和处理检测结果的报告和处理阴性反应出具阴性反应出具阴性反应出具阴性反应出具HIVHIV抗体阴性报告，抗体阴性报告，抗体阴性报告，抗体阴性报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除性流感样症状等情况，为排除性流感样症状等情况，为排除性流感样症状等情况，为排除“窗口期窗口期窗口期窗口期”的可能，可的可能，可的可能，可的可能，可以进行以进行以进行以进行HIV-1 P24HIV-1 P24抗原或抗原或抗原或抗原或HIVHIV核酸检测，或核酸检测，或核酸检测，或核酸检测，或2 23 3个月以个月以个月以个月以后后后后再做抗体检测再做抗体检测再做抗体检测再做抗体检测。筛查实验呈阳性发现反应，可出具筛查实验呈阳性发现反应，可出具筛查实验呈阳性发现反应，可出具筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIVHIV抗体待复查抗体待复查抗体待复查抗体待复查”的报告，的报告，的报告，的报告，不能出阳性报告不能出阳性报告不能出阳性报告不能出阳性报告。样本样本样本样本初筛检测初筛检测初筛检测初筛检测一阴一阳一阴一阳一阴一阳一阴一阳均阳性反应均阳性反应均阳性反应均阳性反应阴性报告阴性报告阴性报告阴性报告送确认送确认送确认送确认重复检测重复检测重复检测重复检测阴性报告阴性报告阴性报告阴性报告均阴性反应均阴性反应均阴性反应均阴性反应阳性反应阳性反应阳性反应阳性反应原有试剂另一原有试剂另一原有试剂另一原有试剂另一种原理初筛试剂种原理初筛试剂种原理初筛试剂种原理初筛试剂选用初筛试剂选用初筛试剂选用初筛试剂选用初筛试剂阴性反应阴性反应阴性反应阴性反应HIV抗体初筛检测流程图抗体初筛检测流程图快速诊断试剂：快速诊断试剂：采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理快速、不需特殊仪器快速、不需特殊仪器敏感度、特异度低于敏感度、特异度低于ELISAELISA，且价格贵，且价格贵适用于血站覆盖不到的边远地区适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查城市大医院急诊手术前检查快速诊断阳性结果还需经快速诊断阳性结果还需经ELISAELISA方法验证方法验证HIV抗体确认抗体确认常用的确认实验方法是常用的确认实验方法是免疫印迹法（免疫印迹法（WB）。免疫印迹试剂有免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型混合型和和单一型单一型。一般先用一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测混合型试剂进行检测蛋白印迹实验（蛋白印迹实验（WB）广泛使用的确认实验广泛使用的确认实验用用聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳将将纯纯化化的的HIVHIV蛋蛋白白抗抗原原分分开开后后转转移移到到硝硝酸酸纤纤维维膜膜上上。标标本本中中存存在在的的HIVHIV抗抗体体与与条条带带上上的的抗抗原原结结合合，再再加加入入酶酶偶偶联联的的抗抗人人IgGIgG抗抗体体和和底底物物，在在抗抗原原抗抗体结合的部位会出现有色条带体结合的部位会出现有色条带其可检测标本中针对其可检测标本中针对HIVHIV不同抗原不同抗原的抗体，故被用做确认试剂。的抗体，故被用做确认试剂。不同的研究机构有不同的判定标准不同的研究机构有不同的判定标准HIV抗体确认检测流程图抗体确认检测流程图免疫印迹法免疫印迹法(HIV1/2(HIV1/2混合型混合型)HIV-1HIV-1阳性反应阳性反应可疑反应可疑反应出现出现HIV-2HIV-2指带指带HIV-1HIV-1阳性报告阳性报告可疑反应可疑反应阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应报告报告HIV-2HIV-2血清学阳性反血清学阳性反应报告必要时测核酸应报告必要时测核酸阴性报告阴性报告免疫印迹法（免疫印迹法（HIV-2HIV-2）每每3 3个月随访一次，共个月随访一次，共2 2次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性阴性反应阴性反应阴性报告阴性报告 P24抗原测定抗原测定（一）适用范围（一）适用范围HIV-1HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。抗体不确定或窗口期的辅助诊断。抗体不确定或窗口期的辅助诊断。抗体不确定或窗口期的辅助诊断。HIV-1HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。第四代第四代第四代第四代HIV-1HIV-1抗原抗原抗原抗原/抗体抗体抗体抗体ELISAELISA试剂检测呈试剂检测呈试剂检测呈试剂检测呈阳性反应，阳性反应，阳性反应，阳性反应，但但但但HIV-1HIV-1抗体确认阴性者的诊抗体确认阴性者的诊抗体确认阴性者的诊抗体确认阴性者的诊断。断。断。断。监测病程进展和抗病毒治疗效果。监测病程进展和抗病毒治疗效果。监测病程进展和抗病毒治疗效果。监测病程进展和抗病毒治疗效果。（三）结果报告和解释1、HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认。2、HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊。3、HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。HIV核酸检测 PCR对与缩短窗口期病毒抗体试验PCR缩短HCV82天23天72HBV59天34天41HIV22天11天501 1、辅助诊断、辅助诊断m某某些些非非典典型型的的抗抗体体反反应应，特特别别是是不不确确定定反反应应时时，RNARNA的的测测定可提供非常有用的证据。定可提供非常有用的证据。m单单纯纯使使用用RNARNA测测定定不不能能完完全全确确定定感感染染与与否否，但但当当RNARNA测测定定出出现现较较高高拷拷贝贝数数的的阳阳性性结结果果时时（10001000）提提示示感感染染发发生生的的可能性非常大。可能性非常大。m使使用用此此指指标标应应综综合合其其他他检检测测数数据据和和样样品品背背景景情情况况进进行行综综合分析与判断。合分析与判断。2 2、窗口期辅助诊断、窗口期辅助诊断m在在窗窗口口期期抗抗原原峰峰出出现现前前后后通通常常出出现现一一个个病病毒毒载载量量的的高高峰峰，通通常常此此高高峰峰高高于于发发病病时时的的血血浆浆病病毒毒水水平平，早早期期病病毒毒RNARNA测测定具有特殊的意义。定具有特殊的意义。m目目前前国国际际上上正正在在尝尝试试使使用用这这种种检检测测对对采采供供血血样样品品进进行行多多个个样品混合后的样品混合后的RNARNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。检测以降低窗口期传播的残余危险度。3 3、病程监控、病程监控m由由于于HIVHIV感感染染发发生生后后病病毒毒载载量量的的变变化化具具有有一一定定规规律律，并并且且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。m通通常常在在感感染染后后无无症症状状期期内内发发生生的的临临床床症症状状很很难难与与AIDSAIDS发发病病时时的的症症状状区区别别，病病毒毒载载量量测测定定可可以以帮帮助助医医生生判判断断一一个个刚刚发发生的症状是否与生的症状是否与HIVHIV感染有关。感染有关。4、指导治疗方案及疗效测定m并并非非在在任任何何情情况况下下感感染染者者都都应应该该进进行行抗抗病病毒毒治治疗疗，这这不不但但是是经经济济上上的的原原因因，更更重重要要的的是是在在于于抗抗病病毒毒药药物物的的副副作作用用和和疗疗效效。通通常常在在病病毒毒载载量量达达到到一一定定水水平平后后（如如35000-5000035000-50000拷贝拷贝/毫升）才具有良好的效果。毫升）才具有良好的效果。m只只有有通通过过治治疗疗后后病病毒毒水水平平的的检检测测才才能能确确定定治治疗疗是是否否有有效效，通通常常治治疗疗后后病病毒毒水水平平降降低低50%50%才才被被认认为为临临床床有有效。效。艾滋病免疫指标的检测艾滋病免疫指标的检测v随随着着政政府府加加速速对对国国产产抗抗艾艾滋滋病病药药物物上上市市的的批批准准，我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。v艾艾滋滋病病临临床床治治疗疗中中各各种种免免疫疫指指标标(CD4+、CD8+T细细胞胞 等等)对对于于确确定定感感染染状状态态、预预测测发发病、评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。病、评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。CD4 T淋巴细胞淋巴细胞：（流式细胞术）（流式细胞术）CD4 CD4 T T细细胞胞是是HIVHIV的的主主要要靶靶细细胞胞,感感染染后后随随着着病病程程进进展展，CD4 CD4 T T细细胞胞不不断断下下降降 500/500/mmmm3 3有临床诊断意义有临床诊断意义 200/200/mmmm3 3AIDSAIDS病程进展，病程进展，AIDSAIDS诊断和疗效观察的指标诊断和疗效观察的指标HIVHIV感感染染几几周周内内，出出现现类类流流感感症症状状，也也称称为为血血清清阳阳转转期期，CD4CD4细细胞胞的的数数量量降降低低。随随之之出出现现的的免免疫疫应应答答可可以以控控制制急急性性症症状状，恢恢复复CD4CD4细细胞胞的的数数量量，但但并并不不能能清清除除病病毒毒。随随着着CD4CD4细细胞胞不不断断下下降降，当当降降至至500/ul500/ul左左右右时时，开开始始出出现现机机会会性性感感染染或或其其它它疾疾病病，进进入入症症状状期期。当当CD4CD4低低于于200/ul200/ul时时，即即进进入入艾艾滋病期。滋病期。CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴细胞小于淋巴细胞小于淋巴细胞小于淋巴细胞小于350/ul350/ul350/ul350/ul（结合病毒载量，确定治疗时机）（结合病毒载量，确定治疗时机）（结合病毒载量，确定治疗时机）（结合病毒载量，确定治疗时机）有有有有效效效效治疗治疗治疗治疗8 8 8 8周后周后周后周后CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T淋巴淋巴淋巴淋巴细胞数量增加细胞数量增加细胞数量增加细胞数量增加50/ul50/ul50/ul50/ulHAARTHAART无效无效无效无效CD4+TCD4+TCD4+TCD4+T细胞数量下降细胞数量下降细胞数量下降细胞数量下降CD4+TCD4+T淋淋巴巴细细胞胞介介导导的的免免疫疫功能逐渐丧失功能逐渐丧失CTLCTL丧丧失失必必要要的的体体内内环环境境，功能下降功能下降HIVHIVHIVHIV感染感染感染感染 谢谢