高效液相色谱常见故障的判定及解决方法.doc

故障
可能原因
解决方法
(一) 保留时间变化
1 柱温变化
柱恒温，必要时需配置恒温箱
2 等度与梯度间未能充分平衡
至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3 缓冲液容量不够
用>25mmol/L的缓冲液
4 柱污染
每天冲洗柱
5 柱内条件变化
稳定进样条件，调节流动相
6 柱快达到寿命
采用保护柱
(二) 保留时间缩短
1 流速增加
检查泵，重新设定流速
2 样品超载
降低样品量
3 键合相流失
流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
4 流动相组成变化
防止流动相蒸发或沉淀
5 温度增加
柱恒温
(三) 保留时间延长
1 流速下降
管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡
2 硅胶柱上活性点变化
用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱
3 键合相流失
同前(二)3
4 流动相组成变化
同前(二)4
5 温度降低
同前(二)5
(四) 出现肩峰或分叉
1 样品体积过大
用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%
2 样品溶剂过强
采用较弱的样品溶剂
3 柱塌陷或形成短路通道
更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件
4 柱内烧结不锈钢失效
更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品
5 进样器损坏
更换进样器转子
(五) 鬼峰
1.进样阀残余峰
每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物
处理样品
3.柱未平衡
重新平衡柱，用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)
每天新配，用抗氧化剂
5.水污染(反相)
通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水
(六) 基线噪声
1 气泡(尖锐峰)
流动相脱气，加柱后背压
2 污染(随机噪声)
清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂
3 检测器灯连续噪声
更换氘灯
4 电干扰(偶然噪声)
采用稳压电源，检查干扰的来源(如水浴等)
5 检测器中有气泡
流动相脱气，加柱后背压
(七) 峰拖尾
1 柱超载
降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相
2 峰干扰
清洁样品,调整流动相
3 硅羟基作用
加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度，降低流动相PH值，钝化样品
4 同前(四)4
同前(四)4
5 同前(四)3
同前(四)3
6 死体积或柱外体积过大
连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管
7 柱效下降
用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱
(八) 峰展宽
1 进样体积过大
同(四)1
2 在进样阀中造成峰扩展
进样前后排出气泡以降低扩散
3 数据系统采样速率太慢
设定速率应使每峰大于10点
4 检测器时间常数过大
设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
5 流动相粘度过高
增加柱温，采用低粘度流动相
6 检测池体积过大
用小体积池，卸下热交换器
7 保留时间过长
等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8 柱外体积过大
将连接管径和连接管长度降至最小
9 样品过载
进小浓度小体积样品