长链非编码RNA参与七氟烷诱导的海马神经元凋亡_刘玉明.pdf
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1、第 卷第期 年 月福建医科大学学报 长链非编码 参与七氟烷诱导的海马神经元凋亡刘玉明,赖静兰,姚志雄摘要:目的探讨长链非编码()与七氟烷麻醉副作用的关联。方法采用小鼠模型分析七氟烷对海马锥体的影响,采用生物信息学方法分析 数据库中七氟烷处理的小鼠相关的 表达谱数据,筛选可能与七氟烷麻醉过程相关的 ,并使用 对 进行验证。结果七氟烷处理可导致小鼠海马锥体神经元结构异常,增加细胞凋亡。基因芯片分析显示,在小鼠()中,七氟烷处理后 个 出现差异表达。验证发现,经七氟烷处理后,小鼠海马组织 和 的表达水平提高。结论不适量的七氟烷处理可引起海马锥体神经元结构改变和细胞凋亡,可能参与了该病理性作用。关键词
2、:七氟烷;海马锥体神经元;表达谱芯片;长链非编码;凋亡文献标志码:文章编号:()收稿日期:资助项目:福建省自然科学基金项目()作者单位:福建医科大学 孟超肝胆医院,福州 麻醉科;感染科作者简介:刘玉明,男,主治医师通信作者:姚志雄 :七氟烷首先由 发现,于 年由 合成,年完成三期临床试验,年首先由日本的药监部门批准临床使用。近年来,七氟烷被誉为吸入麻醉的里程碑式药物,在儿童和剖宫产孕妇的全麻诱导及其维持中具有显著优点。与氯胺酮基础麻醉下给予小剂量阿片类药物和催眠镇静药物相比,七氟烷麻醉的优点是诱导期患者较平静,术中血流动力学较平稳,肌肉松弛药用量小,术后苏醒快,且意识完全清醒,但诱导期和恢复期
3、的躁动是需克服的问题。此外,动物实验表明,如果七氟烷的剂量过高,动物会出现神经毒性致短暂的认知障碍。但高剂量七氟烷麻醉副作用的机制仍然未知,探索其机制或作用靶点无疑会对改善七氟烷麻醉效果提供新的思路。长 链 非 编 码 (,)是一类由 聚合酶或 聚合酶转录、长度 个核苷酸的非编码 ,位于细胞核内或细胞质中,其表达具有组织特异性和时空特 异 性。近 年 来,随 着 测 序 技 术 的 发 展,在肿瘤发生发展、神经科学和个体发育等许多生物学领域发挥着重要作用,是人类基因组的重要调控分子。文献 表明,和麻醉药物的效果及副作用有密切关系。可能介导了七氟烷麻醉对神经系统的损伤。近年来,关于 与神经系统联
4、系的研究越来越多,但目前对 的了解还存在很多空白,而且 物种间保守性较低,需要跨物种分析 功能的普适性。因此,本研究通过 软件包分析了七氟烷处理的小鼠海马组织 表达谱芯片数据,并进行验证。对象与方法 动物与试剂 雌性小鼠购于北京维通利华 许可证:(京);品系代码:;周,体质量约 ,无特殊病原菌条件、的光照周期下进行标准饲养,周龄时进行实验。七氟烷(批号:,上海恒瑞医药有限公司);提取试剂盒(,北京全式金 生 物 技 术 股 份 有 限 公 司);反 转 录 试 剂(,大连宝日医生物技术有限公司);染料法 试剂(,北京康润诚业生物科技有限公司)。方法 七氟烷处理 雌性小鼠随机分为组,即对照组和七
5、氟烷组,每组 只。根据文献 ,按体质量换算七氟烷剂量,周龄小鼠应为 ,而新生小鼠的推荐剂量为 ,因此,本实验采用。在气体麻醉室中,七氟烷组小鼠暴露在 七氟烷中(以空气为载体,进气速率 ),如小鼠出现呼吸急促或明显的全身抽搐,立即终止麻醉。对照组小鼠暴露在空气中。温度维持在,处理。染色实验结束后小鼠予安乐死,取海马组织,多聚甲醛固定 。脱水,石第期刘玉明,等:长链非编码 参与七氟烷诱导的海马神经元凋亡蜡包埋切片,厚度。切片经脱蜡、复水,蛋白酶 处理 ,过 氧 化 氢 溶 液 处 理 。反应混合液 孵育。清洗,标记的地高辛 孵育 。显色后苏木精复染。倍光镜下计数海马 区域凋亡的锥体细胞,计算凋亡细
6、胞比例(凋亡细胞数 总细胞数)。尼氏染色七氟烷处理后,小鼠予安乐死,取海马组织多聚甲醛固定,石蜡包埋后切片。切片经脱蜡、复水,焦油紫染色 。蒸馏水清洗,乙醇分色,脱水后封片。显微镜下观察,倍光镜下计数海马 区域尼氏阳性细胞。表达芯片数据分析在 数据库中搜索 相关的表达谱数据,删除实验重复数的数据,最终确定 (小鼠)作为 后 续 分 析 的 数 据。利 用 软 件 和 包获取 数据和注释数据,包 的方 法 进 行 差 异 分 析,错 误 发 现 率(,)方 法 进 行值 校 正。校 正 记为差异显著。提取和 七氟烷处理结束后,七氟烷组只(死亡只)和对照组 只小鼠安乐死,分离海马组织,法提取总,合
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