依达拉奉右莰醇抑制TLR4...通路减轻大鼠液压冲击脑损伤_张山.pdf
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1、脑与神经疾病杂志年第卷第期,():,():(收稿日期:)?论著依达拉奉右莰醇抑制通路减轻大鼠液压冲击脑损伤张山徐伟韩亚非董雨李忆蒙申向竹唐会昌杨德真梁群【摘要】目的探讨依达拉奉右莰醇()对大鼠液压冲击脑损伤的影响及机制。方法取 只大鼠随机分为假手术组、模型组、组和脂多糖(,激活剂)组,每组只;采用液压冲击法制备脑损伤大鼠模型。组腹腔注射()给予?依达拉奉?右莰醇,:组给予?依达拉奉?右莰醇,假手术组和模型组给予生理盐水,均次(连续。通过评分评价大鼠神经功能缺损状况,干湿重法检测脑组织含量(),苏木精伊红染色法、染色法观察脑组织病理变化和神经元凋亡状况,法检测炎症因子水平,检测样受体()核因子(
2、)通路相关蛋白表达。结果治疗后,组大鼠评分和均明显低于模型组();模型组脑组织呈现结构疏松、神经元间隙增大、空泡变性、炎细胞浸润等病理变化及大量神经元凋亡,组脑组织病理学变化及神经元凋亡状况较模型组明显改善、凋亡指数明显降低();组脑组织肿瘤坏死因子(、白细胞介素()水平和表达量及、表达比值较模型组均明显降低()。能够明显逆转对液压冲击脑损伤大鼠上述各指标的调控作用()。结论可抑制液压冲击脑损伤大鼠炎症反应、减轻脑损伤,其作用机制可能与抑制通路活化有关。【关键词】依达拉奉右莰醇;脑损伤;神经功能;通路;炎症中图分类号:文献标识码:文章标号:(),:(),(),;?();?;,(),(),基金项
3、目:河北省医学科学研究课题()作者单位:河北,邯 郸 市中心医院 神 经 外四科脑与神经疾病杂志年第卷第期 ,()(),(,),();(),(),()(),;创伤性脑损伤(,)包括机械冲击所致的初始损伤和后续一系列生化反应所引发的继发性脑损 伤两个阶段,病理学研究发现,早期即出现炎症因子大量分泌和脑组织炎性浸润,是导致继发性脑损伤的重要原因。核因子(,)可促进炎症因子分泌而加重机体炎症损伤,而其表达与活化受 样受体(;如(;?明,)调控。依达拉奉右茨醇(,)是按:配比组成的复方制剂,目前临床上主要用于急性缺血性脑卒中(,)的治疗。有文献报道通过下调炎性信号通路能够减轻缺血再灌注大鼠的焦虑抑郁样
4、行为。本研究旨在探讨对大鼠液压冲击脑损伤的影响及相关机制,以期为临床治疗提供新的参考。材料与方法实验动物只级大鼠河北伊维沃生物科技有限公司,(冀),雄性,龄,体质量()。清 洁控制环境、相对湿度()饲养,自由饮水进食。实验方案经邯郸市中心医院伦理委员会审核批准()。主要药物、试剂与实验仪器注射液(:依达拉奉:右莰 醇)购自南京先 声 药业有限公司;脂多糖(,)购自美国公司;苏木精伊红、染色试剂盒和、的法检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所;裂解 液、蛋白浓度 检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司;、抗体购自英国公司;、(抗体和增强型化学发光液(,)购自北足博奧森生物技术有限公司。型颅脑液压
5、打击仪(美国公司);型多功能酶标仪(美国公司);型组织包埋机、凝胶成像系统(美国公司);型切片机(德国公司);型数码显微成像系统(日本尼康公司);型电泳仪、型转膜仪(美国公司)。动物分组、造模与给药将实验用大鼠按随机数字表法分为组:假手术组(只)、模型组(只)、:组(以只)、组(只)。参照孙国柱等报道的方法复制液压冲击脑损伤大鼠模型:麻醉后沿头部正中切开皮肤、剥离骨膜,以颅骨矢状缝右、冠状缝后交叉点 为中心开直径骨窗,然后通过颅脑液压打击仪(设置冲击强度为)制备中度液压冲击脑损伤大鼠模型;假手术组按上述方法开颅骨骨窗,但不进行液压冲击。造模完成后,组腹腔注射()给予?依达拉奉?右襃醇(根据人临
6、床剂量与大鼠剂量换算公式计算所得),组给予?依达拉奉?右茨醇?,假手术组和模型组给予生理盐水,均次连续。神经功 能缺失评分和脑含水量(,)测定各组随机取只大鼠,依标准行神经功能缺失评分,评分越高说明神经功能缺失状况越严重问。处死大鼠后迅速开颅取脑,称重记为。,置于烘烤箱烘干至恒重记为()(。脑与神经疾病杂志年第卷第期脑组织病理变化和神经元凋亡状况观察在各组剩余大鼠中分别 随机取只大鼠,麻醉后颈椎脱白处死,开颅取脑组织,经中性甲醛固定、脱水处理后制备石蜡切片,部分切片按苏木精伊红染色试剂盒操作说明进行染色处理,封片后通过数码显微成像系统观察脑组织病理变化;剩余切片按试剂盒说明行染色,封片后通过数
7、码显微成像系统观察神经元凋亡状况,每张切片取个视野,视野内细胞数目由两位实验人员独立计数后取平均值,计算凋亡细胞占细胞总数的比例即为调亡指数(,)。脑组织、(水平检测取各组剩余的只大鼠,麻醉后颈椎脱臼处死,剥取脑组织并去除小脑、脑干、嗅球后,剪碎后加人放射免疫沉淀法(,)裂解缓冲液冰上静置后匀浆,?离心取上清,依照试剂盒操作说明处理后,通过酶标仪测定、(水平。脑组织、表达检测取脑组织匀 浆液,?离心取总蛋白,通过法检测总蛋白浓度,各组等量上样、电泳(浓缩胶、,分离胶、)分离蛋白、转膜(、)、脱脂奶粉室温封闭,洗膜后加入目标蛋白和内参()抗稀释液孵育,洗膜后加入二抗稀释液室温孵育,显影后通过条带
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