高效液相色谱荧光法检测海产品中苯并(a)芘及其代谢产物.pdf

!)%$!中国食品卫生杂志 A J Y 7Y 2 M J/-2 GG 2 2 WA _ Y J Y%!&年第%)卷第%期实验技术与方法高效液相色谱荧光法检测海产品中苯并$%芘及其代谢产物刘晓晨!齐琳!孙文平!王希佳!谢真恕!李发胜!刘辉!大连医科大学检验医学院辽宁 大连$!*:$摘$要!目的$建立检测海产品中苯并#芘P c#及其代谢产物&;羟基苯并芘&;2 A P c#的高效液相色谱荧光法A c-;G W#$方法$样品经*)a乙腈提取!涡旋混匀!离心沉淀!分别以甲醇;水1A:)#9)o!)#%9#o!&#为流动相进行色谱分离 P c%&;2 A P c!色谱柱为 4?K=+L7-!9;P W 7!)O Os:*O O!)O#!流速!O 3(O c激发波长%*)?O!发射波长:)?O!检测&;2 A P c激发波长&*)?O!发射波长:)?O&进样量%3$结果$P c在 !b!?B(O 3 浓度范围内线性关系良好!相关系数 9 k 555:&;2 A P c在!#b!#?B(O 3 浓度范围内线性关系良好!相关 系 数 9 k 55%!$P c%&;2 A P c回 收 率 分 别 在 5*9ab!%a%#%*ab 9&a之间&相对标准偏差分别为*a%)%a$k)#&最低检测限分别为 !和%B(NB$结论$该法简便%快速%灵敏度高!可用于海产品中 P c及其代谢产物&;2 A P c的检测$关键词!苯并#芘&;羟基苯并芘&海产品&高效液相色谱荧光法中图分类号!M!)#2*)#2*%)!$文献标识码!/$文章编号!:;9:)*$%!&%;!)%;&M#+#&%(+%,-/#N,$(%3)#(9%+*&#+(/,$%+#%*#(-,9/)0%203#-,&(.#$%D 1%9.0 ,&(+,2(3 0)=%+0-$1,#*.#.#9#+#.+%,-=D E S,4?8 -?7=?C4?1?BD Q D 4X,4?0,=-0,4?B -=A=$E 3 3 4 B 4E.j4 F 3-IE+K E+L W 3?j4 F 3?R 4+0 K L -E?3?!*:,%4/*+(.+&5/6#.+%7#$/?3 L K 3 O 4 K,E F.E+K,4F4 K 4+O K%1L+4?4?F IE 3%1L+4?4.E E F T 0 F4 R 4 3 E 14 F IL,?S 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是一种强致癌性多环芳烃类化合物)!%*通过降雨船舶漏油及废水排放等进入水体再通过食物链在动植物体中发生生物蓄积造成水产品的 P c污染(对于水产 品 中 P c的 含 量欧 盟 指 令!99!(%*Y 规定限量为%B(NB 烟熏水产品为)B(NB)&*(我国 P%#*%!%),食品污染物限量-规定限量为!B(NB):*(有关水$海%产品中苯并$%芘测定方法主要有高效液相色谱荧光法)*气相色谱 质谱法等)#5*(而&;羟基苯并芘)&;A L F+E H L I4?m E$%1L+4?4*简称&;2 A P c 是 P c在动物体内代谢和降解的主要产物已有人提出将尿液中&;2 A P c作为人吸入和皮肤暴露 P c的生物标志物)!*(目前我国颁布的水产行业标准 7(6&:%!高效液相色谱荧光法检测海产品中苯并$%芘及其代谢产物!刘晓晨等!)&$!%9,水产品中苯并$%芘的测定 高效液相色谱法-)!%*检测水产品中 P c的方法存在步骤繁琐操作时间长试剂消耗大对人员要求高等问题(本文在保证提取回收率前提下对前处理方法尽量简化操作相对简便无需氮吹浓缩建立了快速准确地检测海产品中 P c和&;2 A P c的方法(!$材料和方法!$材料!$样品花蚬子购于大连旅顺盐场海鲜市场(!%$仪器与试剂/B c标 准品$59)a美 国7 公司%#&;2 A P c标准品$!O O E 3(-美国国家癌症研究所惠赠%#标准贮备液&准确称取 P c标准品 !B 用 W j72溶解定容于)O 3 容量瓶中配成%B(O 3 的标准贮备液#取&;2 A P c标准品!3 用 W j72稀释定容于)O 3 容量瓶中配成%O E 3(O 3 的标准贮备液(!%$方法!%!$样品前处理花蚬去壳取可食用部分用超纯水中洗净滤纸吸干表面水分绞碎混匀称取试样!B$精确至!B%于!O 3 匀浆器中加入%O 3 超纯水制成组织匀浆液(取上述匀浆液!3 加入%3 乙腈涡旋混合!O?!+(O?离心!O c标准系列溶液浓度为 :%:9!*%:&%:?O E 3(O 3 的&;2 A P c$jk%*9&%B(O E 3%标准系列溶液经换算则相当于浓度为!#&)&*)!#&%!:*:%5%*:&99)9:!#&?B(O 3 的&;2 A P c标准系列溶液(!%&$添加试验按照!%方 法 处 理 后分 别 添 加 P c及&;2 A P c标准品!)&*)?B 做加标回收试验(!%:$色谱条件色谱柱&4?K=+L 7-!9;P W 7$!)O Os:*O O)O%#P c流动相&甲醇;水$1A:)%$9)o!)%激发波长%*)?O 发射波长:)?O#&;2 A P c流动相&甲醇;水$1A:)%$9#o!&%激发波长&*)?O 发射波长:)?O#流速!O 3(O c的萃取溶剂主要有苯环己烷乙腈和丙酮等)5*(苯的沸点低挥发性大易造成二次污染且对人体有害#环己烷提取回收率并不高且操作繁琐#*)a乙腈提取 P c&;2 A P c回收率较高无需净化操作简单故本实验选用之(%$提取条件的选择超声波提取)!%&O?后#涡旋混合延长放置时间)!%&O c&;2 A P c回收率没有增大综合本实验确定!%!的提取方法(%&$流动相的确定流动相中甲醇的比例对目标物质出峰位置有较大影响甲醇比例过小样品各色谱峰分离度较好基线相对平稳但延长了目标物的保留时间分析操作费时#甲醇比例过大出峰较快缩短保留时间但基线漂移较大且与样品中其它杂质峰发生重叠#在 )b%O 3(O c&;2 A P c出峰时间合适柱压不高且峰型较好$见图!%(图!$%$浓度为%B(O 3 苯并$%芘标准品的色谱图G%$7K?F+F S,+E O K E B+OE.P c$%B(O 3%图!$I%$花蚬样品的色谱图G K E B+OE.D C 9 1$,5,$)!/1 9 6,)$)0 O 13 4%:$实验方法评价%:!$线性关系和检出限P c&;2 A P c标准系列溶液按选定的色谱条!):$!中国食品卫生杂志 A J Y 7Y 2 M J/-2 GG 2 2 WA _ Y J Y%!&年第%)卷第%期图%$%$浓度为%O E 3(O 3&;羟基苯并芘标准品的色谱图G%$7K?F+F S,+E O K E B+OE.&;2 A P c$%O E 3(O 3%图%$I%$花蚬样品的色谱图G K E B+OE.D C 9 1$,5,$)!8,9 6,)$)0 O 13 4件进行 A c-分析以保留时间定性以峰面积对浓度绘制工作曲线(结果表明P c在 !b!?B(O 3范围内线性回归方程为 C k!&9!5#%相关系数 9 k 555:#&;2 A P c在!#b!#?B(O 3 范围内线性回归方程为 Ck%5 59!%*相关系数 9k 55%!(以 信 噪 比 7(Jk&求 得 P c&;2 A P c 检出限分别为 !和%B(NB(%:%$回收率及精密度本法 检 测 花 蚬 体 内 P c含 量 为$!*!*p*:%B(NB#&;2 A P c含量为$:)5*p%#%B(NB(用加标后测得的含量扣除本底值计算回收率$见表!%#取一加标样品连续测定&天第一天测)次表!$回收率实验结果$k)%6 I3 4!$M 4 0=3 K 0E.+4 S E R 4+LK 4 0 K$k)%添加量$?B%结果量$?B%回收率$a%平均回收率$a%E BK$a%P c!%!%!5*5*95*9 5#:5#:!%&!%&!9!9&;2 A P c)&*):!):#:#9 5)%&95#%*:#9&:&)99!%:%559!观察峰面积的变化情况计算日内日间相对标准偏差 P c分 别 为&%a*)a#&;2 A P c分 别 为&a)%a(结 果 表 明 本 方 法 回 收 率 精 密 度较好(&$结论采用 A c-;G W法检测海产品中 P c&;2 A P c 样品预处理简单分离效果好灵敏度和准确度均较好可用于海产品中 P c及其代谢产物&;2 A P c的检测(参考文献)!*$+L 0 K 3 M77 3 O?F3 M 4 K 3 U P 4?m E$%1L+4?4;S=K 4?4=+E K E H S K L K&+E 3 4E.E H K R 40 K+4 0 0)*U /113 6 E H S E 3%*%*&:%#;:&9)%*$程元恺U 致癌性多环芳烃)j*U 北京&人民卫生出版社!59)&*$E O O 0 0 K E?$Y%U J E U!99!(%*74 K K H O?K 0 3 U 7K=F?3 L 0%1L+4?4?F IE 3 K 4 0?I E 3 E B 3 0 O 13 4 0 IL=0?B,?S 43 V=K E B+1L(.3=E+4 0 S 4?S 4F4 K 4 S K?F B 0S,+E O K E B+1,L(O 0 0 0 14 S K+E O 4 K+L)*U P=3 3 e E+4?,4 O 7E S%&%:$)%&)*;)*&)*$黄鸾玉黎小正秦振发U 固相萃取(高效液相色谱荧光法测定水产品中苯并芘)*U 分析试验室%5%9$!%&*&;*)#*$3 3 A/IE 3.m 3 G U ;j7 F4 K 4+O K E?E.c/A 0?.O 13 4 0.E 3 3 E T 3 K 0 0 S K K K E B+1,L)*U ,+E O K E B+1,%!#:&:#;:9%)9*$王建华宫萍田良良等U 同位素稀释气相色谱串联质谱法测定海产品中的苯并$%芘的残留量)*U 化学分析计量%!%!$!%&%:;%*)5*$吴敏李政黎翠玉等U 固相萃取;高效液相色谱;荧光检测法联合测定食品中苯并$%芘)*U 食品安全质量检测学报%!%&$%&9%;99)!*$-4+E L 4+/4?F4 3G j 3 U!;,L F+E H L 1L+4?4?F&;,L F+E H L I4?m E$%1L+4?4 0I+N4+0E.4 H 1E 0=+4K Ec/A +E=0 4?R 3 4 H 1E 0=+40 K E?0)*U 7S 3 Y?R +F j A 4+4 F;2+K 3 U/K E H S E N?4 K S0 K=FLK E4 3=S K 4&;,L F+E H L I4?m E$%1L+4?4 K L 1 3=+L4 H S+4 K E?1+E.3 4.E 3 3 E T?B R 4?E=0?Q 4 S K%1L+4?4 K 0)*U /113 6 E H%芘的测 定 高 效 液 相 色 谱 法)7*U北 京&中 国 标 准 出 版社%9