小孢子淀粉测定.doc

中文文献：
1、花蕾中淀粉及可溶性糖含量的测定：
3,5-二硝基水杨酸法——用体积分数80%乙醇提取可溶性糖，酸水解法将淀粉水解为还原糖。提取或水解的产物与3,5-二硝基水杨酸试剂供热后在520nm波长下测定光密度值，通过计算还原性糖含量来算出可溶性糖及淀粉含量。
2、 乙醇提取硫酸蒽酮法：
称取 50 ～ 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品，置于 15 mL 刻度试管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min ，取出离心（ 3000 rpm ） 5 min ，收集上清液。重复提取两次（各 10 min ）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于 85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL ， 向沉淀中加蒸馏水 3 mL ，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化 15 min 。冷却后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL ，混匀，离心 10 min ，上清液倾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL ，混匀后离心 10 min ，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，离心，合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

英文文献：
1、Sucrose and starch catabolism in the anther of Lilium during its development a comparative study among the anther wall, locular fluid and microsporepollen fractions
分别在花粉的不同发育阶段的不同部分测定淀粉含量。除Xuid室外，用研钵将不同组分在氮气预冷液研磨均匀。对于每个样品，取0.1g粉末放入1.5ml离心管中，并加入1mL的0.1M（？）的磷酸钠盐缓冲液（pH约为7.5），4℃、1000转离心15min。吸取上清液用于测定可溶性糖（见下）；沉淀物用1mL的二甲基亚砜：8N（？）盐酸（4:1）再次悬浮，然后60℃水浴加热30min，并不断搅拌。离心（1200转）15min后，吸取100微升上清液，加入100微升Lugol酸性碘溶液（0.06%（w/v）的钾化碘和0.003%（w/v）碘的005N的盐酸溶液）和1mL的重水。将样品放置室温下约15min后在600nm的吸光度下检测。
另一方面，在花粉发育的各个时期葡萄糖、果糖和蔗糖通过德国造的Scil Diagnostics GmbH, Viernheim装置检测。这样，上清液和Xuid室中所含的可溶性糖便可检测出。淀粉和可溶性糖的单位均为mg/g（花粉鲜重）。
2、Anther starch variations in Lilium during pollen development
新鲜花粉和同花的花芽在室温下用Fontainebleau砂和二甲基亚砜：8N盐酸（8:2）的混合物研磨2分钟，然后60℃加热30分钟并不断搅拌使花粉完全溶解。用30ml蒸馏水冷却后，过滤并将滤液稀释至100ml。吸取100微升的样品用于淀粉含量的检测。在淀粉葡萄糖苷酶的作用下，淀粉水解为葡萄糖。葡萄糖被己糖激酶磷酸化葡糖-6-磷酸，接着在NADP的作用下氧化为葡糖-6-磷酸盐，同时通过葡糖-6-磷酸脱氢酶的作用形成NADPH。NADPH是数量可在340nm吸光度下测得。同时做一个无淀粉葡糖糖苷酶的空白试验。花药发育的每个时期至少检测三次。
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