一种调理肠胃的犬用复合益生菌食品制备及应用试验_王诚.pdf

第 1 期第 53 卷工业微生物作者简介：王诚（1980.11），男，汉，山东泰安人，本科，中级畜牧师，研究方向：动物营养与饲料。E-mail：。一种调理肠胃的犬用复合益生菌食品制备及应用试验王诚1，董桂红2，何荣彦2，范秋苹2，董晓桐2，郭慧君3，刘建柱31.山东健源生物科技有限公司，山东 泰安 271000；2.山东宠言生物科技有限公司，山东 泰安 271000；3.山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 271000摘要：文章旨在研究一种调理肠胃的复合益生菌宠物食品，以期为宠物食品技术领域提供新发明；通过自制益生菌添加剂，并配合特定的中药提取物儿茶素，通过最佳配比相互之间的协同发生作用，从而使得宠物肠道中的有益微生物实现增殖，对肠道中的有害菌起到抑制效果，最终改善宠物肠道中微生物的种群结构和数量，降低了宠物的腹泻率，有效地调节了宠物的肠胃，具有广阔的应用前景。关键词：复合益生菌；宠物食品；肠胃调理；制备方法doi：10.3969/j.issn.1001-6678.2023.01.027目前，家养宠物长期食用的狗粮、猫粮等均为加工食品，宠物长期摄入各种食品添加剂，会引发宠物的胃肠道疾病；同时由于抗生素的广泛使用，机体耐药性和药物残留造成宠物肠道的正常菌群失调，给宠物的健康带来了危害1。益生菌制剂是一种天然的活性微生物制剂，具有无毒、无抗药性、无残留、无副作用的特点。益生菌能够以活菌形式在动物消化道中通过竞争性抑制病原菌，从而增强动物机体的免疫力，并且直接参与动物肠道微生态的平衡，从而维护肠道的正常功能2。1材料与方法1.1材料玉米芯、氢氧化钠溶液、酒精、贝莱斯芽孢杆菌菌粉、罗伊氏乳杆菌菌粉、海氏肠球菌菌粉、双歧杆菌菌粉、鼠李糖杆菌、牛肉粉、去离子水、桔梗、远志、知母、乙醚、正丁醇、牛磺酸、维生素 C、螯合钙粉、儿茶素,自封袋、一次性手套、冰袋、无菌棉签、无菌EP、冰箱、无菌 PBS，无菌生理盐水，MRS 琼脂培养基，革兰氏染色试剂盒，大肠杆菌、沙门氏菌，恒温培养箱，所有菌粉及菌种均由健源生物提供。1.2方法1.2.1制备方法自制益生菌添加剂：称取玉米芯放入粉碎机中粉碎后过筛（0.282mm，50 目），得到玉米芯粉末，将得到的玉米芯粉末和质量分数为 15%的氢氧化钠溶液按料液质量比 115 混合后装入反应釜中，加热升温至 8090，保温搅拌，反应 150160 min，得到反应物。将上述得到的反应物和质量分数为 70%的酒精等体积混合后，静置沉淀 1214 h，沉淀结束后过滤分离得到滤渣，将得到的滤渣放入烘箱，在 7080 下干燥 12 h，得到自制益生菌载体。按质量分数计，选取 59 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、1620 份罗伊氏乳杆菌菌粉、711 份海氏肠球菌菌粉、1014 份双歧杆菌菌粉、913 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌后得到混合物，即为自制益生菌添加剂。中药提取粉末的制备：按质量比 323 称取桔梗、远志和知母放入粉碎机中粉碎，过筛（0.282mm，50目）得到混合中药粉末，将混合中药粉末、去离子水、乙醚按质量比为 153 混合后加热升温至 8090，搅拌反应 3040 min 后静置分层并去除上层乙醚层，将下层水层和正丁醇按体积比 11 混合后，在 9095 下搅拌反应 12 h，得到反应产物，再将反应产物减压蒸干得到中药提取粉末。第 53 卷第 1 期2023 年 2 月工业微生物Industrial MicrobiologyVol.53 No.1Feb.202386-第 1 期第 53 卷检测项目腹泻只数/只喂养5 d 后喂养10 d 后喂养15 d 后喂养30 d 后喂养45 d 后喂养60 d 后实验组 1241813851实验组 2231710730实验组 322158520实验组 423169630实验组 5241710841对照组252218202116王诚等：一种调理肠胃的犬用复合益生菌食品制备及应用试验表 1调理肠胃效果检测结果一种调理肠胃的复合益生菌宠物食品的制备：按质量分数计，称取 1014 份牛磺酸、2832 份自制益生菌添加剂、1317 份中药提取粉末、812 份儿茶素、12 份维生素 C、37 份螯合钙粉装入搅拌器中，搅拌混合后即得调理肠胃的复合益生菌宠物食品。1.2.2实验设计根据添加不同益生菌比例自制益生菌添加剂，并分为 5 个实验组，如下：实验组 1：5 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、16 份罗伊氏乳杆菌菌粉、7 份海氏肠球菌菌粉、10 份双歧杆菌菌粉、9 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述的自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌得到混合物。实验组 2：6 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、17 份罗伊氏乳杆菌菌粉、8 份海氏肠球菌菌粉、11 份双歧杆菌菌粉、10 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述的自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌得到混合物。实验组 3：7 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、18 份罗伊氏乳杆菌菌粉、9 份海氏肠球菌菌粉、12 份双歧杆菌菌粉、11 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述的自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌得到混合物。实验组 4：8 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、19 份罗伊氏乳杆菌菌粉、10 份海氏肠球菌菌粉、13 份双歧杆菌菌粉、12 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述的自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌得到混合物。实验组 5：9 份贝莱斯芽孢杆菌菌粉、20 份罗伊氏乳杆菌菌粉、11 份海氏肠球菌菌粉、14 份双歧杆菌菌粉、13 份鼠李糖杆菌菌粉混合得到复合益生菌粉，将复合益生菌粉和上述的自制益生菌载体、牛肉粉以及去离子水按质量比 1125 混合搅拌得到混合物。5 个实验组将用于接下来的调理肠胃效果检测和宠物肠胃微生物种类检测实验。1.2.3调理肠胃效果检测从宠物医院挑选 50 只中度腹泻的宠物犬，并平均分成 2 组，每组 25 只，一组作为对照组，一组作为实验组（实验组 1、2、3、4、5 各 5 只），其中实验组的宠物犬，每天向宠物饲料中按每千克饲料添加 10g本研究的调理肠胃的复合益生菌宠物食品，得到调理饲料，并对实验组的宠物犬进行喂养，对照组则正常喂养普通饲料，投喂量和实验组相同，分别观察喂养 5 d、10 d、15 d、30 d、45 d 和 60 d 后宠物的腹泻率，腹泻率越低，就说明调理肠胃的效果越好。1.2.4宠物肠胃微生物种类检测分别收集喂养 60 d 后实验组和对照组的宠物粪便，用斜面培养基在 37 下培养 1824 h，并同时进行普通细菌培养和厌氧菌培养，观察培养基中的菌落并用游标卡尺测量不同菌落的直径，并检测菌落种类，以此来判断肠胃中的各种菌类及其含量。2结果与分析2.1调理肠胃效果由表 1 的检测数据可以看出，本研究实验组15 中宠物狗腹泻的只数在喂养本研究食品后显著降低，而作为对照组的宠物狗腹泻只数却没有明显的改变，由此可以看出本研究调理肠胃的复合益生菌宠物食品的确具有调理宠物肠道功能的效果，而且在本研究实验组 15 中，其中实验组 13 中腹泻宠物狗的只数逐步减少，而从实验组 4 开始，腹泻只数又开始增加，这是因为本研究的自制益生菌添加剂中各种益生菌的质量配比有最佳比例。2.2宠物肠胃微生物种类检测由表 2 中检测数据可以看出，本研究实验组15 中有益菌的菌落直径明显高于对照组中有益菌的菌落直径，而实验组中的菌落直径却显著低于对照组中有害菌的菌落直径，由此可以看出，本研究87-第 1 期第 53 卷工业微生物检测项目实验组 1实验组 2实验组 3实验组 4实验组 5对照组贝莱斯芽孢杆菌菌落直径 mm16172019180罗伊氏乳杆菌菌落直径mm12141615130海氏肠球菌菌落直径mm10121514130双歧杆菌菌落直径 mm12131615135鼠李糖杆菌菌落直径mm89111071沙门氏菌菌落直径 mm3211212大肠杆菌菌落直径 mm2112213AbstractThe purpose of this study is to study a compound probiotic pet food for conditioning intestines and stomach,its preparationmethod and application effect,and to provide a new invention for the pet food technology field;In this study,through the self-madeprobiotic additives,specific Chinese herbal extract catechin,and the synergistic effect of the best ratio,the beneficial microorganismsin the pets intestinal tract can be multiplied,while the harmful bacteria in the intestinal tract can be inhibited,ultimately improvingthe population structure and quantity of microorganisms in the pets intestinal tract,reducing the diarrhea rate,and effectivelyregulating the pets gastrointestinal tract.It has broad application prospects.Key wordscompound probiotics;pet food;gastrointestinal conditioning;preparation method的调理肠胃的复合益生菌宠物食品可以显著地提高宠物狗肠道益生菌的种类和数量，并且对有害菌的种类和数量具有抑制效果。表 2宠物肠胃微生物种类和含量检测结果3讨论在宠物饲养的过程中，添加益生菌可以改善肠道功能，提高宿主的免疫力，提高生长性能3。本研究通过碱提玉米芯中的低聚木糖，通过醇沉将反应物中的低聚木糖沉淀析出，再通过过滤截留得到玉米芯纤维和玉米芯低聚木糖的混合粉末，此混合粉末中富含纤维和低聚木糖，本身比表面积大，可以容纳大量益生菌，成为其负载载体，以保证益生菌种的存活率；此外，纤维本身为多羟基结构，吸水性强，能够吸收腹泻宠物肠道中的水分，这使得粪便体积增大且更容易排出，更重要的是其中的低聚木糖能有效地抑制肠胃中的有害菌大肠杆菌的存活。本研究的原料中还添加了儿茶素，儿茶素作为一种膳食多酚物质，可以有效地影响肠道中微生物的种群，其中儿茶素可以抑制肠道中的大肠杆菌等有害菌群的 DNA 转移酶，从而抑制有害菌群的增殖代谢，改善了宠物肠道中微生物的种群分布。4结论在调理肠胃效果的检测实验中，实验组 13 中腹泻宠物狗的只数逐步减少，而从实验组 4 开始，腹泻只数却又开始增加，证实了本研究调理肠胃的复合益生菌宠物食品的确具有调理宠物肠道功能的效果，并且实验组 3 是自制益生菌添加剂的最佳比例。在宠物肠胃微生物种类检测实验中，实验组15 中有益菌的菌落直径明显高于对照组中有益菌的菌落直径，而实验组中有害菌的菌落直径却显著低于对照组中有害菌的菌落直径，证实了本研究调理肠胃的复合益生菌宠物食品可以显著提高宠物犬肠道益生菌的种类和数量。参考文献1 李慧敏.抗腹泻乳酸菌的筛选及其在预防断奶幼兔腹泻上的应用 D.南阳:南阳师范学院,2022.2 施腾鑫,蒋德意,郗洪生.动物微生态制剂在宠物领域的应用现状及研究进展 J.微生物学通报,2014,41(12):2510-2515.3 邹朋,汪棋,周元浩,等.益生菌在宠物中的应用 J.中国饲料,2021(01):10-14.Preparation and Application of A Compound Probiotic Food for Dogs to CoordinatingIntestines and StomachWANG Cheng1，DONG Guihong2，HE Rongyan2，FAN Qiuping2，DONG Xiaotong2，GUO Huijun3，LIU Jianzhu31.Shandong Jianyuan Biotechnology Co.,Ltd.Taian 271000；2.Shandong Chongyan Biotechnology Co.,Ltd.Taian 271000；3.College of Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong Agricultural University,Taian 27100088-