HPLCfinal高效液相色谱分析.pptx

高高效效液液相相色色谱谱是是在在气气相相色色谱谱和和经经典典色色谱谱的的基基础础上上发发展展起起来来的的。现现代代液液相相色色谱谱和和经经典典液相色谱没有本质的区别。液相色谱没有本质的区别。不不同同点点仅仅是是现现代代液液相相色色谱谱比比经经典典液液相相色色谱谱有较高的有较高的效率效率 和实现了和实现了自动化自动化 操作。操作。高高效效液液相相色色谱谱法法是是继继气气相相色色谱谱之之后后，0年年代代初初期发展起来的一种以期发展起来的一种以液体液体做流动相的新色谱技术。做流动相的新色谱技术。一、概述一、概述HPLC的特点的特点 特点：高压、高速、高效、高灵敏度特点：高压、高速、高效、高灵敏度 高沸点、热不稳定的有机及生化试样的高效分离分高沸点、热不稳定的有机及生化试样的高效分离分析方法。析方法。二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 高高效效液液相相色色谱谱法法的的基基本本概概念念及及理理论论基基础础，如如保保留留值值、分分配配系系数数、分分配配比比、分分离离度度、塔塔板板理理论论、速速率率理理论论等等与与气气相相色色谱谱法法是是一一致致的的。而两者的而两者的主要区别可归结于流动相的不同主要区别可归结于流动相的不同。高高效效液液相相色色谱谱的的流流动动相相为为液液体体，而而气气相相色谱的流动相为色谱的流动相为气体气体。液液体体的的扩扩散散系系数数只只有有气气体体的的万万分分之之一一至至十十万万分分之之一一；液液体体的的粘粘度度比比气气体体大大一一百百倍倍，而而密密度度为为气气体体的的一一千千倍倍。这这些些差别将对色谱过程产生影响。差别将对色谱过程产生影响。参数参数气体气体液体液体扩散系扩散系Dm/cm2s-1密度密度/gcm-3粘度粘度/g(cms)-110-110-310-410-5110-21.涡流扩散项涡流扩散项He与气相色谱相同。与气相色谱相同。2.纵向（分子）扩散项纵向（分子）扩散项 Hd式中：式中：Cd为一常数；为一常数；Dm为分子在流动相中的扩散系数。为分子在流动相中的扩散系数。高效液相色谱中的速率方程式高效液相色谱中的速率方程式 由由于于分分子子在在液液体体中中的的扩扩散散系系数数比比气气体体中中小小45个个数数量量级级，因因此此在在液液相相色色谱谱中中，当当流流动动相相的的线线速速度度大大于于0.5 cm/s时时，纵纵向向扩扩散散项项对对色色谱谱峰峰的的扩扩展展的的影影响响可可以以忽忽略略。而而气气相相色色谱谱中中这这一项却是重要的。一项却是重要的。3.3.传质阻力项传质阻力项（1 1）固定相传质阻力）固定相传质阻力：发生在液发生在液-液分配色谱中。液分配色谱中。式中：式中：Cs是与容量因子有关的常数；是与容量因子有关的常数；Ds是试样分子在固定液内的扩散系数；是试样分子在固定液内的扩散系数；df是固定液膜的厚度。是固定液膜的厚度。固定相传质：固定相传质：试样分子从流动相进入到固定液内试样分子从流动相进入到固定液内进行质量交换的传质过程进行质量交换的传质过程（2 2）流动相传质阻力）流动相传质阻力a.流动的流动项中的传质阻力项流动的流动项中的传质阻力项 Hm式式中中：Cm是是一一个个与与容容量量因因子子有有关关的的常常数数，其其值值取取决决于于柱柱直直径径、形形状状和和填填充充的的填填料料结结构构。当当柱柱填填料料规规则则排排列列并并紧紧密密填充时，填充时，Cm降低。降低。dp为固定相粒度；为固定相粒度；Dm是试样分子在流动相中的扩散系数是试样分子在流动相中的扩散系数。b.滞留的流动项中的传质阻力项滞留的流动项中的传质阻力项 Hsm式中式中Csm是一与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数及容是一与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数及容量因子有关的常数。量因子有关的常数。高效液相色谱中的速率方程式为：高效液相色谱中的速率方程式为：简写为：简写为：与与气气相相色色谱谱的的速速率率方方程程式式一一致致，其其主主要要区区别别在在于于纵纵向向(分分子子)扩扩散散项项可可以以忽忽略略不不计计，影影响响柱柱效的主要因素是效的主要因素是传质项传质项。GC的的H-u曲曲线线是是一一条条抛抛物物线线，有有一一个个最最低低点点（最最佳佳流流速速）；HPLC的的H-u曲曲线线是是一一条条斜斜率率不不大大的的直直线线，这这表表示示分分子子扩扩散散项项对对H基基本本上上没没有有影影响响，这这也也说说明明HPLC分分离离可可以以在在高高的的流流动动相相流速下而不至于使柱效损失太多，从而可以实现快速分离。流速下而不至于使柱效损失太多，从而可以实现快速分离。在在高高效效液液相相色色谱谱中中,液液体体的的扩扩散散系系数数仅仅为为气气体体的的万万分分之之一一，则速率方程中的分子扩散项则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即：较小，可以忽略不计，即：H=A+C u 故液相色谱故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同。曲线与气相色谱的形状不同。液液体体的的粘粘度度比比气气体体大大一一百百倍倍，密密度度为为气气体体的的一一千千倍倍，故故降降低低传质阻力是提高柱效主要途径。传质阻力是提高柱效主要途径。讨论讨论影响分离的因素与提高柱效的途径影响分离的因素与提高柱效的途径 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。1.固定相粒度固定相粒度2.2.流速流速 流流速速大大于于0.5 cm/s时时,Hu曲曲线线是是一一段段斜斜率率不不大大的的直直线线。降降低低流流速速，柱柱效效提提高高不不是很大是很大。3.3.固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。常高的工作，一般很少自行制备。固定相与流动相均为液体（互不相溶）；固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相间的分配；基本原理：组分在固定相和流动相间的分配；流流动动相相：对对于于亲亲水水性性固固定定液液，采采用用疏疏水水性性流流动动相相，即即流流动动相相的的极极性性小小于于固固定定液液的的极极性性（正正相相 normal phase），反反之之，流流动动相相的的极极性性大大于于固固定定液液的的极极性性（反反相相 reverse phase）。正正相与反相的出峰顺序相反；相与反相的出峰顺序相反；固定相：固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化化学学键键合合固固定定相相：（将将各各种种不不同同基基团团通通过过化化学学反反应应键键合合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。柱（反相柱）。HPLC的主要类型及其分离原理的主要类型及其分离原理一、一、液液-液分配色谱液分配色谱 固固定定相相：为为固固体体吸吸附附剂剂，如如硅硅胶胶、氧氧化化铝铝等等，较较常常使使用用的是的是510m的硅胶吸附剂；的硅胶吸附剂；流动相：流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适适用用于于分分离离相相对对分分子子质质量量中中等等的的油油溶溶性性试试样样，对对具具有有官官能能团的化合物和异构体有较高选择性；团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；非线形等温吸附常引起峰的拖尾；二、二、液液-固吸附色谱固吸附色谱 固定相：固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流流动动相相：阴阴离离子子离离子子交交换换树树脂脂作作固固定定相相，采采用用酸酸性性水水溶溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基基本本原原理理：组组分分在在固固定定相相上上发发生生反反复复的的离离子子交交换换反反应应；组组分分与与离离子子交交换换剂剂之之间间亲亲和和力力的的大大小小与与离离子子半半径径、电电荷荷、存存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：阳离子交换：RSO3H +M+=RSO3 M +H+阴离子交换：阴离子交换：RNR4OH +X-=RNR4 X+OH-应用：应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。三、三、离子交换色谱离子交换色谱 原原理理：将将一一种种（或或多多种种）与与溶溶质质离离子子电电荷荷相相反反的的离离子子（对对离离子子或或反反离离子子）加加到到流流动动相相中中使使其其与与溶溶质质离离子子结结合合形形成成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；阴阴离离子子分分离离：常常采采用用烷烷基基铵铵类类，如如氢氢氧氧化化四四丁丁基基铵铵或或氢氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；氧化十六烷基三甲铵作为对离子；阳阳离离子子分分离离：常常采采用用烷烷基基磺磺酸酸类类，如如己己烷烷磺磺酸酸钠钠作作为为对对离子；离子；反反相相离离子子对对色色谱谱：非非极极性性的的疏疏水水固固定定相相(C-18柱柱)，含含有有对对离离子子Y+的的甲甲醇醇-水水或或乙乙腈腈-水水作作为为流流动动相相，试试样样离离子子X-进进入入流动相后，生成疏水性离子对流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后；在两相间分配。后；在两相间分配。四、四、离子对色谱离子对色谱 离离子子色色谱谱是是在在20世世纪纪0年年代代中中期期发发展展起起来来的的一一种种技技术术，其其与与离离子子交交换换色色谱谱的的区区别别是是其其采采用用了了特特制制的的、具具有有极极低低交交换换容容量量的的离离子子交交换换树树脂脂作作为为柱柱填填料料，并并采采用用淋淋洗洗液液抑抑制制技技术术和和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。五、五、离子色谱离子色谱 离离子子交交换换原原理理，与与传传统统离离子子交交换的不同点：换的不同点：采采用用交交换换容容量量非非常常低低的的特特制制离离子子交换树脂为固定相；交换树脂为固定相；细细颗颗粒粒柱柱填填料料，高高柱柱效效；采采用用高高压输液泵；压输液泵；低低浓浓度度淋淋洗洗液液或或本本底底电电导导抑抑制制（在在分分离离柱柱后后，采采用用抑抑制制柱柱来消除淋洗液的高本底电导）；来消除淋洗液的高本底电导）；可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物；可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物；各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。1.离子色谱法原理离子色谱法原理（1 1）分析速度快）分析速度快 可可在在数数分分钟钟内内完完成成一一个个试试样样的分析；的分析；（2 2）分离能力高）分离能力高 在在适适宜宜的的条条件件下下，可可使使常常见见的的各各种种阴阴离离子子混混合合物物分分离离；例例：使使用用双双柱柱法法，在在十十几几分分钟钟内内，可可使使七七种种阴离子完全分离。阴离子完全分离。（3）分离混合阴离子的最有效方法）分离混合阴离子的最有效方法（4）耐腐蚀，仪器流路采用全塑件，玻璃柱）耐腐蚀，仪器流路采用全塑件，玻璃柱2.离子色谱具有以下优点离子色谱具有以下优点 固定相固定相：凝胶凝胶(具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分布)；原原理理：按按分分子子大大小小分分离离。小小分分子子可可以以扩扩散散到到凝凝胶胶空空隙隙，由由其其中中通通过过，出出峰峰最最慢慢；中中等等分分子子只只能能通通过过部部分分凝凝胶胶空空隙隙，中中速速通通过过；而而大大分分子子被被排排斥斥在在外外，出出峰峰最最快快；溶溶剂剂分分子子小小，故在最后出峰。故在最后出峰。可可对对相相对对分分子子质质量量在在100-105范围内的化合物按质量分离范围内的化合物按质量分离 六、六、排阻色谱色谱排阻色谱色谱（1）全多孔型担体）全多孔型担体 由由氧氧化化硅硅、氧氧化化铝铝、硅硅藻藻土土等等制制成成的的多多孔孔球球体体；早早期期采采用用100m的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见；现采用现采用10m以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；（2）表面多孔型担体）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体）（薄壳型微珠担体）3040m的的玻玻璃璃微微球球(实实心心)，表表面面附附着着一一层层厚厚度度为为12m的多孔硅胶。的多孔硅胶。表面积小，柱容量低；表面积小，柱容量低；液相色谱固定相液相色谱固定相 1.1.液液-液分配及离子对分离固定相液分配及离子对分离固定相（3）化学键合固定相）化学键合固定相 化化学学键键合合固固定定相相:用用化化学学反反应应的的方方法法通通过过化化学学键键把把有有机机分分 子结合到担体表面，是目前应用最广、性能最佳的固定相；子结合到担体表面，是目前应用最广、性能最佳的固定相；a.硅氧碳键型：硅氧碳键型：SiOC b.硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：SiOSi C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；c.硅碳键型：硅碳键型：SiC d.硅氮键型：硅氮键型：SiN（1）传质快传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快；（2）寿寿命命长长，化化学学键键合合，无无固固定定液液流流失失，耐耐流流动动相相冲冲击击；耐耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定；水、耐光、耐有机溶剂，稳定；（3）选择性好选择性好，可键合不同官能团，提高选择性；，可键合不同官能团，提高选择性；（4）有利于梯度洗脱有利于梯度洗脱；存在着存在着双重分离机制双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理键合基团的覆盖率决定分离机理)高覆盖率：分配为主；高覆盖率：分配为主；低覆盖率：吸附为主；低覆盖率：吸附为主；化学键合固定相的特点化学键合固定相的特点 种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等；种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等；结构类型：全多孔型和薄壳型；结构类型：全多孔型和薄壳型；粒度：粒度：510 m；2.2.液液-固吸附分离固定相固吸附分离固定相 结构类别：结构类别：（1）薄壳型离子交换树脂）薄壳型离子交换树脂 薄薄壳壳玻玻璃璃珠珠为为担担体体，表表面涂约面涂约1%的离子交换树脂；的离子交换树脂；（2）离子交换键合固定相）离子交换键合固定相 薄薄壳壳键键合合型型；微微粒粒硅硅胶胶键合型（键合离子交换基团）键合型（键合离子交换基团）树脂类别：树脂类别：（1）阳阳离离子子交交换换树树脂脂（强强酸酸性、弱酸性）性、弱酸性）（2）阴阴离离子子交交换换树树脂脂（强强碱碱性、弱碱性）性、弱碱性）3.3.离子交换色谱分离固定相离子交换色谱分离固定相（1）软质凝胶）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构；葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构；水为流动相。适用于常压排阻分离。水为流动相。适用于常压排阻分离。（2）半硬质凝胶）半硬质凝胶 苯乙烯苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶；二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶；非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂（3）硬质凝胶）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等；多孔硅胶、多孔玻珠等；化化学学稳稳定定性性、热热稳稳定定性性好好、机机械械强强度度大大，流流动动相相性性质质影影响响小，可在较高流速下使用。小，可在较高流速下使用。可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。4.4.空间排阻分离固定相空间排阻分离固定相 1.1.流动相特性流动相特性 （1）液液相相色色谱谱的的流流动动相相又又称称为为：淋淋洗洗液液，洗洗脱脱剂剂。流流动动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；（2）亲亲水水性性固固定定液液常常采采用用疏疏水水性性流流动动相相，即即流流动动相相的的极极性性小小于于固固定定相相的的极极性性，称称为为正正相相液液液液色色谱谱法法，极极性性柱柱也也称称正正相柱。相柱。（3）若若流流动动相相的的极极性性大大于于固固定定液液的的极极性性，则则称称为为反反相相液液液液色色谱谱，非非极极性性柱柱也也称称为为反反相相柱柱。组组分分在在两两种种类类型型分分离离柱柱上上的出峰顺序相反。的出峰顺序相反。液相色谱的流动相液相色谱的流动相 按流动相组成分按流动相组成分：单组分和多组分；：单组分和多组分；按极性分按极性分：极性、弱极性、非极性；：极性、弱极性、非极性；按使用方式分按使用方式分：固定组成淋洗和：固定组成淋洗和梯度淋洗梯度淋洗。常用溶剂：常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙 醇、乙腈、水。醇、乙腈、水。采采用用二二元元或或多多元元组组合合溶溶剂剂作作为为流流动动相相可可以以灵灵活活调调节节流流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。2.2.流动相类别流动相类别 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采采用用正正相相液液-液液分分配配分分离离时时：首首先先选选择择中中等等极极性性溶溶剂剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也也可可在在低低极极性性溶溶剂剂中中，逐逐渐渐增增加加其其中中的的极极性性溶溶剂剂，使使保留时间缩短。保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：常用溶剂的极性顺序：水水(最最大大)甲甲酰酰胺胺 乙乙腈腈 甲甲醇醇 乙乙醇醇 丙丙醇醇 丙丙酮酮 二二氧氧六六环环 四四氢氢呋呋喃喃 甲甲乙乙酮酮 正正丁丁醇醇 乙乙酸酸乙乙酯酯 乙乙醚醚 异异丙丙醚醚 二二氯氯甲甲烷烷氯氯仿仿溴溴乙乙烷烷苯苯四四氯氯化化碳碳二二硫硫化化碳碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)3.3.流动相选择流动相选择（1）尽尽量量使使用用高高纯纯度度试试剂剂作作流流动动相相，防防止止微微量量杂杂质质长长期期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。（2）避避免免流流动动相相与与固固定定相相发发生生作作用用而而使使柱柱效效下下降降或或损损坏坏柱柱子子。如如使使固固定定液液溶溶解解流流失失；酸酸性性溶溶剂剂破破坏坏氧氧化化铝铝固固定定相等。相等。（3）试试样样在在流流动动相相中中应应有有适适宜宜的的溶溶解解度度，防防止止产产生生沉沉淀淀并在柱中沉积。并在柱中沉积。（4）流流动动相相同同时时还还应应满满足足检检测测器器的的要要求求。当当使使用用紫紫外外检检测器时，流动相不应有紫外吸收。测器时，流动相不应有紫外吸收。4.4.选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题液相色谱仪器液相色谱仪器高效液相色谱仪高效液相色谱仪1.1.流程流程(1)高压输液泵高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150350105 Pa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（10m），液液体体的的流流动动相相高高速速通通过过时时，将将产产生生很很高高的的压压力力，因因此此高高压压、高高速是高效液相色谱的特点之一。速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2.2.主要部件主要部件(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度（低压梯度）外梯度（低压梯度）:常压下将两种不同极性的常压下将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后用高压度混合室，混合后用高压泵送入色谱柱。泵送入色谱柱。内梯度（高压梯度）内梯度（高压梯度）:利利用用两两台台高高压压输输液液泵泵增增压压后后，将将两两种种不不同同极极性性的的溶溶剂剂按按一一定定的的比比例例送送入入梯梯度度混混合合室室，混混合合后后进进入入色色谱谱柱。柱。(3)进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置通常使用耐高压的六通阀进样装置 柱柱体体为为直直型型不不锈锈钢钢管管，内内径径1 mm，柱柱长长540 cm。发发展展趋趋势势是是减减小小填填料料粒粒度度和和柱柱径径以以提提高高柱效。柱效。(4)高效分离柱高效分离柱 a.紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：灵敏度高；灵敏度高；线形范围高；线形范围高；流通池可做的很小（流通池可做的很小（1mm 10mm，容积，容积 8L）；）；对流动相的流速和温度变化不敏感；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。(5)液相色谱检测器液相色谱检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器:紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；1024个个二二极极管管阵阵列列，各各检检测测特特定定波波长长，计计算算机机快快速速处处理理，三三维立体谱图维立体谱图 高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对多多环环芳芳烃烃，维维生生素素B、黄黄曲曲霉霉素素、卟卟啉啉类类化化合合物物、农农药药、药药物物、氨氨基基酸酸、甾甾类类化合物等有响应；化合物等有响应；b.荧光检测器荧光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；可可连连续续检检测测参参比比池池和和样样品品池池中中流流动动相相之之间间的的折折光光指指数数差差值。差值与浓度呈正比；值。差值与浓度呈正比；通通用用型型检检测测器器（每每种种物物质质具具有有不不同同的的折折光光指数）；指数）；灵灵敏敏度度低低、对对温温度度敏敏感感、不不能能用用于于梯梯度度洗洗脱；脱；偏偏转转式式、反反射射式式和和干涉型三种；干涉型三种；c.示差折光检测器示差折光检测器d.电导检测器电导检测器电导检测器（用于离子色谱），是根据物质在某电导检测器（用于离子色谱），是根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质的含量。质的含量。化学抑制型离子色谱：两电极电导检测器化学抑制型离子色谱：两电极电导检测器单柱型离子色谱：单柱型离子色谱：五电极电导检测器五电极电导检测器HPLC 分离类型选择分离类型选择环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析液固色谱法液固色谱法 固定相：薄壳型硅胶固定相：薄壳型硅胶(3 50 m)流动相：正己烷流动相：正己烷 流流 速：速：1.5 mL/min 色谱柱：色谱柱：50cm 2.5mm(内径内径)检测器：差示折光检测器检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。残留量进行分析。HPLC的应用的应用