HPV型别检测-PowerPoint-92003-幻灯片.pptx

HPV检测在宫颈癌检测在宫颈癌诊治中的应用诊治中的应用胡飞红在2003年，香港天后级艺人，梅艳芳梅艳芳身患癌症，在她刚刚过完40岁生日后离开人世宫颈癌与HPV关系豪森，德国人，2008年10月诺贝尔奖获得者研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系 HPV型别与宫颈病变型别与宫颈病变HPV病毒通过皮肤病毒通过皮肤表面的微小创口侵表面的微小创口侵入入更多的更多的HPV病毒侵入到病毒侵入到创口周围组织并进入上创口周围组织并进入上皮细胞皮细胞病毒复制HPV检测在宫颈癌诊治中的临床意义CIN治疗后，治疗后，宫颈癌手术宫颈癌手术后的随访后的随访协助诊断早协助诊断早期宫颈癌和期宫颈癌和癌前病变：癌前病变：筛查宫筛查宫颈癌高颈癌高发人群：发人群：科学研究指科学研究指导（疫苗（疫苗）常用HPV检测方法的分析1.细胞学检查2.组织学检查3感染组织中HPV蛋白的检测；3 HPV感染的血清学检查5.HPV5.HPV基因基因组检测.1.细胞学检查传统巴氏涂片（传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术液基薄层细胞学技术(TCT)2.组织学检查（组织学检查（肉眼观察。阴道镜观察。组织检查）3.3.感染组织中感染组织中HPVHPV蛋白的检测蛋白的检测4.HPV HPV感染的血清学检查感染的血清学检查检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。HPV基因检测5.HPV HPV基因组检测基因组检测 1.1.基于基于PCRPCR靶向扩增靶向扩增 2.2.基于基于PCRPCR产物分析产物分析,杂交分析杂交分析用型特异PCR引物-设计成能特定扩增单个HPV基因型。一个PCR反应仅能检测一种型别依据不同HPV亚型用共同保守序列的特点合成通用引物，对HPV广谱扩增E，E特异引物阳性率远高于用L1区通用引物型特异PCR普通PCR的基础上增添了荧光探针，常用通用引物，仅多定量功能。目前两通用探针可检测40多种型别。通用引物PCR实时荧光定量PCR1。基于PCR靶向扩增对PCR产物的一对引物间序列进行测序实现HPV型别，避免了杂交固有的交叉反应。特别对少见型和新型别作用大，但多重感染影响测序准确度，病毒载量少者易被忽略。（1）直接测序法选择合适的限制性核酸内切酶，据特定酶切电泳条带模式判断型别。可检测具体型别，但对特异性要求高，非特异性性条带可致酶切后分型不准确。（2）限制性片段长度多态性分析2.基于基于PCR产物产物分析分析（1）杂交捕获法杂交捕交捕获(hybridcapturesystem，HCS)实验是美国是美国Digene 公司新公司新发展的一种展的一种检测HPV DNA 的技的技术，其原理是利用，其原理是利用对抗抗体捕体捕获信号的放大和化学信号的放大和化学发光信号的光信号的检测。敏感性好，重复性高，不存在交叉敏感性好，重复性高，不存在交叉杂交交问题。（2）反向杂交法有有线性平行性平行杂交，点交，点杂交，反向交，反向线性性杂交。交。常用于常用于HPV型型别分布的分布的统计研究中。研究中。（3）以聚笨乙稀磁铁珠为载体的多重HPV分型方法杂交交载体是磁珠，通用引物行广体是磁珠，通用引物行广谱扩增，加入增，加入变性性剂，产物物解解为单链，与磁珠上型，与磁珠上型别特异性探特异性探针杂交反交反应。2.基于PCR产物杂交分析（4）基因芯片技术杂交捕获法杂交捕获一代（HC-)试验可检测9 种高危型HPV,包括1、18、31、33、35、45、51、52 和5。所用的反应载体是试管；杂交捕获二代试验(HC)原来的试管法改为9 孔平板法，能同时检测13 种高危型HPV(1、18、31、33、35、39、45、51、52、5、58、59 和8)。杂交捕获法杂交捕获法捕获杂交法捕获杂交法（通过对病毒DNA解链,杂交捕获,光信号放大获取结果）基本实验步骤如下：1.样本DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链;2.DNA 单链与RNA 探针结合为RNADNA 杂交体;3.特异性抗体将RNADNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上;4.结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNADNA 杂交体结合,使信号放大;5.碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNADNA 杂交体的含量。HCII唯一通过FDA批准可在临床使用的HPV技术DNA裂解 RNA-DNA杂交 抗体捕获 化学发光 计算机判读新发展的一项诊断技术，在HPV分型中用寡核苷酸原位合成法，原理是将疾病的特征性基因片段或致病病原体片段固定芯片上，制成诊断芯片，提取患者样本中核酸行标记作探针，利用探针与芯片杂交，扫描杂交结果，判断基因型分型是否被感染，可诊断HPV潜在感染，行早期预防基因芯片技术HPV基因芯片检测基因芯片检测敏感性高、特异性敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠果准确可靠检测灵敏度是灵敏度是PCR方方 法的法的100 倍倍针对性性强：对样品中的品中的HPV-DNA 直接直接进行行检测。检出出HPV 的潜伏期感染，克服了血清学及免疫的潜伏期感染，克服了血清学及免疫组化化检测法法对潜伏感染会潜伏感染会产生漏生漏检的缺点（的缺点（实现对疾病的早期快速疾病的早期快速诊断断）操作操作简单：通：通过1次次杂交交检测不不仅可以判断待可以判断待检样品中是否存在品中是否存在HPV 感染，而且可以感染，而且可以鉴定出定出是哪种型是哪种型别的的HPV 感染感染同同时检测多种多种HPV 型型别，对多重多重HPV.感染的判断感染的判断一目了然，克服了其他一目了然，克服了其他HPV.检测方法方法难以判断混合以判断混合感染或操作感染或操作烦琐的缺点的缺点。总结。总之，目前的HPV分型检测技术主要基于聚合酶链反应。HPV特定型别在宫颈疾病发展中的重要作用，考虑到HPV型谱的多样性和多重性HPV联合感染的高发率，准确的HPV检测显得尤为重要。不断寻求更准确，快速有效的检测技术。注：如何对待HPV感染？1.HPV 1.HPV 感染较为常见感染较为常见2.2.多数多数 HPV HPV 可以被清除可以被清除,“,“一过性一过性”感染不致宫颈病感染不致宫颈病变变 3.3.少数持续性感染会引发宫颈病变少数持续性感染会引发宫颈病变 4.HPV4.HPV致致CINICINI、CINIICINII、CINIIICINIII到浸润癌需要相当长的到浸润癌需要相当长的时间，一般是时间，一般是810810年年5.5.致宫颈癌的是高危型致宫颈癌的是高危型HPVHPV.HPV(+).HPV(+)只说明是一种感染，并非是一种疾病只说明是一种感染，并非是一种疾病 .没有没有HPVHPV感染可以不得宫颈癌感染可以不得宫颈癌 ,因此避免因此避免HPVHPV感染可感染可以避免发生宫颈癌以避免发生宫颈癌 8.8.目前治疗目前治疗 HPV HPV 感染的方针是感染的方针是“治病不治毒治病不治毒”,对于对于HPV HPV 感染的检查与治疗的轻视和过分恐惧都不适宜感染的检查与治疗的轻视和过分恐惧都不适宜谢谢！谢谢！