胃癌组织中LncRNA_T...的表达及其与患者预后的关系_曹砚杰.pdf

东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023，Feb;42(1):92-97 收稿日期2022-10-19修回日期2022-11-26 基金项目河南省高等学校重点科研项目指导性计划(22B320010)作者简介曹砚杰(1982 )，男，江苏南京人，副主任医师。E-mail:caoyanjie1982163 com 通信作者李琨琨E-mail:kisskissly126 com 引文格式曹砚杰，褚菲菲，吴慧丽，等 胃癌组织中 LncNA THO 的表达及其与患者预后的关系J 东南大学学报(医学版)，2023，42(1):92-97 论著 胃癌组织中 LncNA THO 的表达及其与患者预后的关系曹砚杰，褚菲菲，吴慧丽，李琨琨(郑州大学附属郑州中心医院 消化内科，河南 郑州450000)摘要目的:了解胃癌组织睾丸相关高度保守的致癌长链非编码核糖核酸(LncNA THO)的表达水平，并分析其与患者预后的关系。方法:选取 112 例胃癌患者，检测手术患者癌组织、癌旁正常组织以及保守治疗患者癌组织的 LncNA THO 表达。分析癌组织 LncNA THO 表达水平与临床病理特征的关系，采用 Cox回归分析探讨胃癌患者死亡的危险因素，采用 Kaplan-Meier 法进行生存分析。结果:手术患者癌组织 Ln-cNA THO 表达水平高于癌旁正常组织(P 0 05)，保守治疗患者癌组织 LncNA THO 表达水平高于手术患者(P 0 05);期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯患者癌组织 LncNA THO 表达水平均高于 期、肠型、无血管侵犯、无神经侵犯患者(P 0 05);胃癌患者随访期间生存率为 38 68%，死亡率为61.32%，期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯的癌组织 LncNA THO 表达增强均是死亡的危险因素(P 0 05);癌组织 LncNA THO 高表达患者的生存率低于低表达患者(P 0 05)。结论:癌组织 LncNATHO 表达水平升高，且与临床分期、Lauren 分型、血管和神经侵犯均有关，与患者生存率密切相关。关键词胃癌;睾丸相关高度保守的致癌长链非编码核糖核酸;预后 中图分类号735 2 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0092-06doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 013Expression of LncNA THO in gastric cancer and its relationshipwith prognosisCAO Yanjie，CHU Feifei，WU Huili，LI Kunkun(Department of Gastroenterology，Zhengzhou Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Zhengzhou 450000，China)AbstractObjective:To observe the expression of testis-associated highly-conserved oncogenic long non-codingribonucleic acid(LncNA THO)in gastric cancer tissues and to analyze its relationship with patients prognosisMethods:112 patients with gastric cancer were enrolled The expression of LncNA THO was detected in thecancer tissues of surgical patients，adjacent normal tissues，and the cancer tissues of non surgical patients The re-lationships between the expression of LncNA THO and clinicopathological features were analyzed，and Cox re-gression analysis was used to explore the risk factors for death in patients with gastric cancer，then Kaplan-Meier29method was used for survival analysis esults:The expression of LncNA THO in gastric cancer tissues of surgi-cal patients was higher than that in adjacent normal tissues(P 0 05)，which was higher in gastric cancer tissuesof no surgical patients than that of surgical patients(P 0 05)The expressions of LncNA THO in gastric canc-er tissues of patients with stage-，non intestinal type，vascular invasion and nerve invasion were higher thanthose of patients with stage-，intestinal type，no vascular invasion and no nerve invasion(P 0 05)The sur-vival rate was 38 68%and mortality rate was 61 32%Stage-，non intestinal type，vascular invasion，nerveinvasion and LncNA THO expression in gastric cancer were all risk factors for death(P 0 05)The survivalrate of patients with high expression of LncNA THO in cancer tissues was lower than that of low expression(P 0 05)Conclusion:The expression of LncNA THO in gastric cancer tissue increases，which is related to clini-cal stage，Lauren s classification，vascular and nerve invasion，and those all are related to survival rate closely Key wordsgastric cancer;testis-associated highly-conserved oncogenic long non-coding ribonucleic acid;prog-nosis胃癌是指起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，多见于40 70 岁人群。全球范围内，胃癌的发病率在所有恶性肿瘤中排名第三，在消化系统恶性肿瘤中居首位1。我国胃癌发病率为 24 3/10 万，每年新发胃癌患者超过 50 万，是胃癌发病率最高的国家2。全国胃癌患者整体生存率约 23%，平均每 3 分钟便有 1 例胃癌患者死亡，形势严峻3。早期就诊率低、延误手术时机是影响胃癌预后不良的主要原因，人们对胃癌发生和发展的机制认识尚浅、缺乏特异性的胃癌治疗方案也是重要原因。长链非编码核糖核酸(long non-coding ribo-nucleic acid，LncNA)是一类长度超过 200 nt、不编码蛋白的 NA 分子，位于细胞核或细胞质，可通过相变影响蛋白表达4-5。睾丸相关高度保守的致癌长链非编码核糖核酸(testis-associated highly-conserved onco-genic long non-coding ribonucleic acid，LncNA THO)是一种 LncNA，与细胞增殖、迁移有关，在肾癌、喉癌等恶性肿瘤中均高表达6-8。有研究9 显示，LncNATHO 可通过促进性别决定区 Y 框蛋白9(sex determi-ning regionY-box 9，SOX9)表达增加胃癌的恶性潜能，提示 LncNA THO 高表达可能参与胃癌的发生和发展，但是 LncNA THO 表达与胃癌预后的关系尚未可知。基于此，本研究选取 112 例胃癌患者进行临床试验，检测癌组织 LncNA THO 表达，并分析其与临床病理特征及预后的关系，报道如下。1资料与方法1 1一般资料纳入标准:(1)经病理学检查证实为胃癌;(2)均为初诊患者;(3)签署知情同意书。排除标准:(1)其它部位原发性癌症转移至胃部;(2)有抗肿瘤治疗史可能影响本研究结果者;(3)有其它可能影响患者生存期的疾病者，如急性心脑血管病等;(4)有严重器质性疾病者，如肝硬化、肾衰竭等;(5)预期生存时间 3个月者;(6)有精神或认知障碍者;(7)不方便跟踪随访者。参照上述纳排标准，于2017 年3 月 2019 年3 月选取 112 例胃癌患者，其中男 75 例，女 37 例;年龄27 75 岁，平均(60 14 11 36)岁;临床分期:期 2例，期 29 例，期 58 例，期 23 例;Lauren 分型:肠型 69 例，弥漫型 36 例，混合型 5 例，未分型 2 例;肿瘤位置:近端 1/3 26 例，远端 2/3 86 例;血管侵犯 47 例;神经侵犯 38 例。本研究通过郑州大学附属郑州中心医院伦理委员会审批(201702-003)。1 2方法LncNA THO 表达检测:针对需要实施新辅助放化疗配合手术治疗或放化疗、免疫治疗及靶向治疗的患者在开始治疗前采用细针穿刺活检取癌组织;针对实施微创根治术配合淋巴结清扫术的患者取手术切除组织中的癌组织和癌旁正常组织。采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qT-PC)检测上述组织 Ln-cNA THO 表达:液氮研磨、匀浆，Trizol 试剂提取总NA，反转录为互补的脱氧核糖核酸(complementarydeoxyribonucleic acid，cDNA)。LncNA THO 引物上游序列为 5-ATGCGTAAGCTAGAGC-3，下游序列为5-TGGATAGGCTTAGAGAGCT-3;内参磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAP-DH)上游序列为 5-CTGACGCTATAGCGATAGC-3，下游序列为5-GGCTTCTAGAGGCTATAGCTAG-3。引物序列委托上海生工生物工程有限公司合成。配置反应体系:Fast SYB Green Master mix 10 l，cDNA 模板1 l，上下游引物各 0 2 l，加入 ddH2O 至终体积39曹砚杰，等 胃癌组织中 LncNA THO 的表达及其与患者预后的关系20 l。采用德国 oche 公司 Light Cycler 96 型 PC 仪进行扩增，反应程序:90 30 s、95 45 s、74 60 s，共 35 个循环;最后 52 10 min。绘制熔解曲线，计算 2 Ct。治疗方法:对所有患者参照消化道肿瘤诊断与治疗10 治疗，符合手术指征者实施微创根治术配合淋巴结清扫术，不符合手术指征者实施新辅助放化疗配合手术治疗或放化疗、免疫治疗及靶向治疗等。随访方法:对所有患者采用门诊复诊、电话沟通等方式随访，剔除脱落患者(包括失访、非胃癌原因死亡等)，随访时间为 36 个月，记录胃癌患者死亡情况。将死亡患者记为死亡组，将存活患者记为存活组。1 3观察指标(1)手术患者胃癌组织、癌旁正常组织及非手术患者癌组织 LncNA THO 表达;(2)不同临床病理特征患者癌组织 LncNA THO 表达;(3)胃癌患者 3年生存率、死亡率及死亡的危险因素;(4)胃癌 Ln-cNA THO 高表达与低表达患者的生存率，其中将LncNA THO 相对表达量 1 记为高表达，否则记为低表达11。1 4统计学处理采用 SPSS 22 0 统计软件进行统计学检验。计量资料经正态性和方差齐性检验，若符合采用 x s 描述，以配对 t 检验分析单个样本的差异，以独立样本 t检验分析两样本的差异;计数资料采用%描述，以 2检验;采用 Cox 回归分析了解胃癌 3 年死亡的危险因素;采用 Kaplan-Meier 法进行生存分析，并采用 Log-rank 检验。P 0 05 为差异有统计学意义。2结果2 1各组织 LncNA THO 表达统计112 例患者中 3 例失访，2 例死于意外事故，1 例死于脑血管病，均剔除。剩余患者中实施微创根治术配合淋巴结清扫术者共 61 例，癌组织 LncNA THO表达水平为 1 60 0 35，癌旁正常组织为 1 00，前者高于后者(t=13 389，P 0 001);实施保守治疗的患者共45 例，癌组织 LncNA THO 表达水平为1.78 039，高于实施手术者(t=2 493，P=0 014)。LncNA THO表达检测的扩增熔解曲线见图1。图 1LncNA THO 表达检测的扩增熔解曲线图Fig 1Amplified fusion curve of LncNA THO expression detection2 2不同临床病理特征患者癌组织 LncNA THO表达水平比较不同性别、年龄、肿瘤位置患者癌组织 LncNATHO 表达水平差异均无统计学意义(P 0 05);期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯患者癌组织LncNA THO 表达均高于 期、肠型、无血管侵犯、无神经侵犯患者(P 0 05)。见表 1。2 3胃癌患者 3 年生存率、死亡率及死亡影响因素的分析随访结束时有 41 例患者存活，65 例死亡，生存率为 38 68%，死亡率为 61 32%。死亡组与存活组患者性别、年龄、肿瘤位置比较差异均无统计学意义(P 0 05)，死亡组 期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯占比、癌组织 LncNA THO表达水平均高于存活组(P 0 05)。见表 2。期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯、癌组织LncNA THO 表达均与死亡有关(均 P 0 05)，且上述均为死亡的危险因素(均 P 0 05)，见表 3。2 4癌组织 LncNA THO 表达的生存分析癌组织 LncNA THO 高表达患者的生存率低于LncNA THO 低表达患者(2=10 952，P=0 001)，见图 2。49东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)表 1不同临床病理特征患者癌组织 LncNA THO表达水平比较(x s)Tab 1Comparison of LncNA THO expressionsin cancer tissues of patients with different clinicopath-ological characteristics(x s)临床病理特征nLncNA THO 表达t 值P 值性别男711 68 0 36女351 67 0 370 1330 894年龄60 岁571 69 0 3860 岁491 66 0 360 4150 679临床分期 期301 55 0 36 期761 73 0 412 1040 038Lauren 分型肠型651 58 0 37非肠型411 83 0 423 2140 002肿瘤位置近端 1/3251 66 0 34远端 2/3811 68 0 360 2460 806血管侵犯是451 92 0 41否611 50 0 325 923 0 001神经侵犯是362 08 0 44否701 47 0 308 417 0 001表 2死亡组和存活组一般资料比较Tab 2Comparison of general data between deathgroup and survival group一般资料死亡组(n=65)存活组(n=41)2或 t 值P 值性别男45(69 23)26(63 41)女20(30 77)15(36 59)0 3850 535年龄60 岁37(56 92)20(48 78)60 岁28(43 08)21(51 22)0 6710 413临床分期 期11(16 92)19(46 34)期54(83 08)22(53 66)10 7230 001Lauren 分型肠型30(46 15)35(85 37)非肠型35(53 85)6(14 63)16 2980 001肿瘤位置近端 1/315(23 08)10(24 39)远端 2/350(76 92)31(75 61)0 0240 877血管侵犯是43(66 15)2(4 88)否22(33 85)39(95 12)38 6400 001神经侵犯是35(53 85)1(2 44)否30(46 15)40(97 56)29 6240 001LncNA THO表达1 88 0 39 1 36 0 337 0840 001注:括号内为百分比表 3胃癌死亡的危险因素 Cox 回归分析Tab 3Cox regression analysis of risk factors for gastric cancer death危险因素单因素多因素P 值 值95%CIP 值 值95%CI 期0 0122 9182 653 3 1180 0102 9202 775 3 102非肠型0 0073 0462 751 3 2460 0043 0532 736 3 408血管侵犯0 0034 3233 988 4 6690 0014 3403 967 4 540神经侵犯0 0255 4675 012 5 8710 0225 4585 089 5 776癌组织 LncNA THO 表达0 0066 3096 024 6 6590 0046 3125 957 6 61659曹砚杰，等 胃癌组织中 LncNA THO 的表达及其与患者预后的关系图 2胃癌患者 Kaplan-Meier 生存分析图Fig 2Kaplan-Meier survival analysis of patients with gastriccancer3讨论胃癌的发生与不健康饮食、幽门螺杆菌感染、遗传因素等均有关12。基因改变是胃癌发生和发展的根本原因，其中涉及癌基因，抑癌基因，增殖、凋亡与转移相关基因等，且基因改变的形式多，过程繁杂13-15。目前人们对胃癌基因改变的认识并不全面，研究也尚浅，而基因改变可通过调控蛋白表达影响病理生理过程，因此对该方面进行深入探讨对胃癌的防治具有至关重要的作用。本研究中胃癌患者的生存率为 38 68%，死亡率为 61 32%，其中生存率低于郑威强等16 报道的58.70%，死亡率低于 Cao 等17 报道的 75 43%，可能与患者病情、治疗方案及随访时间差异有关，但均可证实胃癌患者远期生存率低，加之目前人们对胃癌分子靶向治疗的研究尚浅，故而应重点探讨参与胃癌发生和发展的分子机制。LncNAs 缺少或无开放阅读编码框，与编码蛋白基因相比此类基因具有更高的组织器官特异性，且物种间的保守序列低。根据目前研究18-19，LncNA 可参与 X 染色体沉默、染色质修饰、基因组印迹、转录激活、转录干扰及核内运输等，从多个层面参与调控细胞分化和个体发育，与癌症密切相关，说明 LncNAs 异常表达在癌症防治中具有重要的研究价值。本研究中手术患者癌组织 LncNA THO 表达高于癌旁正常组织，提示 LncNA THO 高表达可能与胃癌有关;保守治疗患者癌组织 LncNA THO 表达高于手术患者，可能是因为保守治疗患者已无法实施根治术，患者均处于晚期，而手术治疗患者多处于早中期。本研究还发现，期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯患者癌组织 LncNA THO 表达均高于 期、肠型、无血管侵犯、无神经侵犯患者，说明癌组织 LncNA THO 表达与临床分期、Lauren 分型、血管及神经侵犯有关，提示 LncNA THO 可能参与胃癌病情进展。根据既往研究20-21，LncNA THO 可以靶向 mi-153-5p、胰岛素样生长因子 2 结合蛋白 1(IGF2BP1)参与调控细胞的增殖、侵袭与迁移，还可影响其凋亡，这也是癌症发生的基本机制。有研究22 显示，LncNA THO 可通过调控白介素-6(interleukin-6，IL-6)/信号转导和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcrip-tion 3，STAT3)通路促进卵巢癌细胞增殖。另有研究23 指出，在胃癌细胞中 THO 高表达，敲低其表达可降低胃癌细胞干性，证实 THO 高表达与胃癌的恶性程度有关，本研究结果与该报道相符。另外，本研究还发现癌组织 LncNA THO 表达是患者死亡的危险因素，且高表达患者的生存率低于低表达，提示 LncNA THO 高表达可增加胃癌的恶性程度，促进恶性肿瘤细胞增殖和肿瘤生长，进而导致病情迅速进展，增加死亡风险，降低生存率。白海静等24 发现，LncNA THO 可调控 IGF2BP1 的表达，增强恶性肿瘤细胞的增殖活性并促使恶性肿瘤细胞扩散;另有研究25 发现，LncNA 在非小细胞肺癌组织中高表达，且证实与临床分期、分化程度等病理特征均有关，敲低人肺癌细胞株 LncNA THO 表达可抑制细胞增殖并促使其凋亡，与此同时细胞周期蛋白 D1、B淋巴细胞瘤 2 的表达均降低。结合本研究与上述报道，推测 LncNA THO 在胃癌组织中表达越高，癌细胞的增殖活性越强，凋亡越少，因此病情进展越迅速，患者的死亡风险则显著增加。这也提示可将 LncNATHO 作为胃癌治疗的靶点，尝试开发靶向药物以延缓甚至阻断病情进展，提高患者的生存率。此外，本研究还发现 期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯均是胃癌患者死亡的危险因素，与既往报道26-27 结果一致。分析其中原因:期病情复杂严重，疾病控制难度大，远期生存率低;肠型患者分化好，细胞恶性程度低，肿瘤生长相对缓慢，而非肠型患者分化差，恶性潜能高，肿瘤生长相对迅速，因此远期生存率低;血管及神经侵犯均意味着病情重，治疗难度大，故而患者的死亡风险更高。综上，胃癌组织 LncNA THO 表达高，且 期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯患者中癌组织 Ln-cNA THO 表达更高，期、非肠型、血管侵犯、神经侵犯和癌组织 LncNA THO 表达均是患者死亡的危险因素，且癌组织 LncNA THO 表达与生存率有关。如何利用本研究结果对胃癌进行防治仍需要进一步探讨。69东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)参考文献 1SUNG H，FELAY J，SIEGEL L，et al Global cancer statis-tics 2020:globocan estimates of incidence and mortality 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