大肠杆菌检测.pptx

PPT模板下载： text Your text Your text 概述概述 大大肠肠杆杆菌菌是是人人和和动动物物肠肠道道中中最最著著名名的的一一种种细细菌菌，主主要要寄寄生生于于大大肠肠内内，约约占占肠肠道道菌菌中中的的1%，是是一一种种两两端端钝钝圆圆、能能运运动动、无无芽芽孢孢的的革革兰兰氏氏阴阴性性短短杆杆菌菌。大大肠肠杆杆菌菌能能合合成成维维生生素素B和和K，正正常常栖栖居居条条件件下下不不会会致致病病；若若进进入入胆胆囊囊、膀膀胱胱等等处处可可引引起起炎炎症症。在在水水和和食食品品中中检检出出，可可认认为为是是被被粪粪便便污污染染的的指指标标。大大肠肠菌菌群群数数常常作作为为饮饮水水、食食物物或或药药物物的的卫卫生生学学标标准准。大大肠肠杆杆菌菌是是国国际际上上公公认认的的卫卫生生监监测测指指示示茵茵，因因此此大大肠肠杆杆菌菌的的检检测测技技术术显显得得十十分分重重要要，相相应应出出现现了了大大量量的的大大肠肠杆杆菌菌的的各各种种检检测测方方法法。我我将将介介绍绍一一些些常常用用的的大大肠肠杆杆菌菌检检测测的的传传统统方方法法以以及及最最近近出出现现的的新新的的检检测测方方法法，为为以以后后大大肠肠杆杆菌菌检检测测提提供供一一些参考。些参考。传统检测方法 检测新技术多管发酵法多管发酵法滤膜法滤膜法平板计数法平板计数法气相色谱与液相色谱法气相色谱与液相色谱法ATP生物发光技术生物发光技术PCR检测技术检测技术生物传感器检测技术生物传感器检测技术免疫磁珠技术免疫磁珠技术IMS基因芯片技术基因芯片技术自动化仪器自动化仪器Your text Your text Your text 检测原理检测原理 多多管管发发酵酵法法是是一一种种检检测测食食品品及及水水体体中中大大肠肠杆杆菌菌的的传传统统方方法法。这这种种方方法法是是将将样样品品接接种种于于LST肉肉汤汤中中在在371的的条条件件下下培培养养242h，之之后后对对产产气气样样品品进进行行复复发发酵酵；复复发发酵酵是是将将初初发发酵酵中中产产气气样样品品接接种种于于EC肉肉汤汤中中，44.50.2条条件件下下培培养养242h，若若产产气气则则进进行行平平板板分分离离培培养养。多多管管发发酵酵法法对对试试验验条条件件要要求求不不高高，成成本本低低，但但是是检检测测时时间间较较长长，容容易易受受其其他他条条件件干干扰扰，进进而而影响到测定结果的精确度。影响到测定结果的精确度。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 滤滤膜膜法法适适用用于于水水质质监监测测，是是首首先先于于滤滤器器内内加加入入10mL无无菌菌稀稀释释水水，接接着着将将适适量量充充分分混混匀匀的的待待检检食食品品的的水水溶溶液液加加入入滤滤器器中中，进进行行抽抽滤滤，快快滤滤完完前前加加少少许许无无菌菌稀稀释释水水以以冲冲洗洗滤滤器器内内壁壁，使使水水溶溶液液内内的的细细菌菌全全部部集集中中于于滤滤膜膜上上；用用灭灭菌菌镊镊子子夹夹取取滤滤膜膜边边缘缘部部分分，移移放放在在M-FC培培养养基基上上,滤滤膜膜截截留留细细菌菌面面向向上上，滤滤膜膜与与培培养养基基完完全全紧紧贴贴不不能能有有气气泡泡，将将培培养养皿皿紧紧密密盖盖好好后后，置置于于能能准准确确恒恒温温于于44.50.5的的恒恒温温培培养养箱箱中中,经经242h培培养养，粪粪大大肠肠菌菌群群呈呈蓝色或蓝绿色蓝色或蓝绿色,计数此类菌落数目。计数此类菌落数目。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 平平板板计计数数法法首首先先选选取取较较适适宜宜的的连连续续稀稀释释梯梯度度样样品品匀匀液液，将将冷冷却却至至450.5的的结结晶晶紫紫中中性性红红胆胆盐盐琼琼脂脂（VRBA）倾倾注注于于平平皿皿内内，混混匀匀并并凝凝固固后后加加入入34mL的的VRBA-MUG覆覆盖盖平平板板表表层层，361下下培培养养1824h，之之后后在在紫紫外外灯灯下下计计数数。该该方方法法是是将将样样本本做做一一定定比比例例的的稀稀释释，其其中中的的微微生生物物被被稀稀释释后后分分散散成成单单个个细细胞胞，然然后后在在一一定定的的条条件件下下进进行行培培养养一一直直到到生生长长成成能能用用肉肉眼眼观观察察的的菌菌落落，最最后后通通过过样样本本数数量量和和稀稀释释度度来来计计算算出出单单位位样样本本中中的的菌菌数数。本本方方法法适适用用于于除除贝贝类类产品外的食品中大肠杆菌检测。产品外的食品中大肠杆菌检测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 气气相相色色谱谱法法主主要要是是将将大大肠肠杆杆菌菌经经过过一一系系列列衍衍生生化化的的前前处处理理后后，为为接接下下来来的的分分析析研研究究提提供供尽尽可可能能多多的的化化学学组组分分。大大肠肠杆杆菌菌的的污污染染程程度度可可以以用用顶顶空空气气相相色色谱谱法法来来分分析析，其其原原理理是是利利用用食食品品密密封封系系统统顶顶部部的的微微生生物物代代谢谢产产物物CO2对对微微生生物物进进行行分分析析。这这种种方方法法对对食食品品质质量量安安全全检检测测有有重重大大意意义义。与与上上述述传传统统技技术术相相比比，此此种种方方法法具具有有检检测测速速度度快快、灵灵敏敏度度高高的的优优点点。高高效效液液相相色色谱谱法法（HPLC）主主要要是是根根据据离离子子配配对对反反相相层层析析的的原原理理来来分分析析核核酸酸。HPLC主主要要是是针针对对DNA片片段段分分离离。长长链链DNA所所携携带带的的磷磷酸酸基基团团比比较较多多，因因此此会会有有更更多多 的的TEAA与与之之相相融融合合，其其在在柱柱内内停停留留的的时时间间增增加加。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 ATP生生物物发发光光技技术术是是近近些些年年来来发发展展较较快快的的微微生生物物快快速速检检测测方方法法。ATP是是活活细细胞胞中中最最普普遍遍的的能能量量代代谢谢产产物物，为为细细胞胞提提供供各各种种生生理理活活动动所所需需的的能能量量，而而且且其其在在生生物物体体内内含含量量维维持持在在一一定定的的范范围围内内。ATP含含量量检检测测的的一一种种方方法法是是荧荧光光光光度度法法，生生物物发发光光是是活活细细胞胞在在荧荧光光素素酶酶催催化化下下发发出出的的荧荧光光。与与传传统统检检测测方方法法相相比比，不不同同之之处处在在于于几几分分钟钟内内便便可可获获得得检检测测结结果果，而而且且荧荧光光光光度度计计是是便便携携式式的的，使使用用非非常常方方便便，适适用用于于现现场场检检测测，这这种种技技术术可可以以用用于于检检测测微微小小的的污污染染物物水水平平以以及及食食品品加加工工设设备备及及其其表表面面的的清清洁洁程程度度的的检检测。测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 PCR检检测测技技术术是是在在1971年年首首先先被被Kleppe等等提提出出，1985年年才才作作为为一一种种检检测测方方法法获获得得认认可可。PCR检检测测技技术术是是一一种种聚聚合合酶酶链链反反应应，其其采采用用变变性性退退火火延延伸伸三三个个步步骤骤使使DNA基基因因能能够够在在体体外外实实现现解解旋旋解解链链，类类似似于于一一种种体体外外增增加加、复复制制形形式式。史史云云等等建建立立了了用用于于肉肉及及肉肉制制品品中中大大肠肠杆杆菌菌的的两两重重PCR检检测测方方法法，但但该该方方法法需需要要较较长长的的时时间间的的样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。样品纯化处理，且对操作人员的专业知识的要求也较高。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 生生物物传传感感器器主主要要是是以以生生物物化化学学传传感感技技术术为为基基础础，用用抗抗体体、酶酶、细细胞胞等等作作为为识识别别元元件件，并并与与信信号号转转换换器器和和电电子子测测量量仪仪联联合合构构成成的的一一种种分分析析工工具具。目目前前已已经经成成熟熟的的商商品品化化的的传传感感器器有有免免疫疫传传感感器器、酶酶传传感感器器、DNA杂杂交交传传感感器器、微微生生物物传传感感器器、分分子子印印迹迹传传感感器器等等。生生物物传传感感器器具具有有诸诸多多优优点点，如如高高灵灵敏敏度度、高高选选择择性性、较较好好的的稳稳定定性性、低低成成本、且能在复杂的体系中快速在线监测。本、且能在复杂的体系中快速在线监测。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 免免疫疫磁磁珠珠技技术术是是一一种种大大肠肠杆杆菌菌的的分分离离技技术术。其其原原理理是是以以磁磁珠珠为为抗抗体体载载体体，磁磁珠珠和和大大肠肠杆杆菌菌结结合合，通通过过磁磁力力来来实实现现力力学学移移动动进进而而将将大大肠肠杆杆菌菌进进行行分分离离。与与其其他他的的细细菌菌分分离离方方法法相相比比，免免疫疫磁磁珠珠技技术术在在很很大大程程度度上上提提高高了了样样本本中中病病原原性性副副溶溶血血性性弧弧菌菌的的检检测测效效率率。免免疫疫磁磁珠珠技技术术可可以以快快速速地地在在不不同同菌菌种种的的样样本本中中处处理理不不同同的的微微生生物物，该该方方法法可以大幅度地提升检测效率。可以大幅度地提升检测效率。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 自自动动免免疫疫测测定定分分析析仪仪诞诞生生于于20世世纪纪70年年代代。随随着着科科技技的的发发展展，自自动动免免疫疫测测定定分分析析仪仪在在各各领领域域的的应应用用也也越越来来越越多多，该该仪仪器器使使用用简简单单，无无太太多多操操作作干干扰扰，既既省省时时省省力力，又又大大大大提提高高了了检检测测的的精精确确度度和和灵灵敏敏度度。这这种种自自动动酶酶标标免免疫疫测测试试系系统统目目前前在在国国内内外外是是酶酶免免疫疫自自动动化化系系统统中中应应用用最最为为广广泛泛的的一一种种。但但是是由由于于与与其其配配套套的的试试剂剂昂昂贵贵，从从而而限限制了其在基层实验室的使用。制了其在基层实验室的使用。Your text Your text Your text Your text 检测原理检测原理 基基因因芯芯片片技技术术(gene chip)是是20世世纪纪90年年代代兴兴起起的的生生物物技技术术，也也叫叫DNA微微阵阵列列(DNA microarray)。采采用用原原位位合合成成(insitu synthesis)或或显显微微打打印印方方法法，将将数数以以万万计计的的DNA探探针针固固化化在在支支持持物物表表面面，产产生生二二维维DNA探探针针阵阵列列，接接着着与与标标记记的的样样品品进进行行杂杂交交，通通过过检检测测杂杂交交信信号号来来实实现现对对生生物物样样品品快快速速、并并行行、高高效效地地检检测测，由由于于它它常常用用硅硅芯芯片片作作为为固固相相支支持持物物，而而且且制制备备中中运运用用了了计计算算机机芯芯片片的的制制备备技技术术，所所以以称称为为基基因因芯芯片片技技术术。基基因因芯芯片片可可以以对对食食品品中中的的致致病病菌菌实实行行高高通通量量和和平平行行检检测测，一一次次实实验验就就可可以以得得出出全全部部检检测测结结果果。另另外外整整个个检检测测在在很很短短时时间间内内即即可可得得出出检测结果，且敏感性高，特异性强。检测结果，且敏感性高，特异性强。Your text Your text Your text Your text 讨论与展望讨论与展望 近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的近年来，世界各国针对水环境和食品中大肠杆菌的快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均快速检测技术展开了大量研究，在已知的检测方法中均有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展，有自己的优势与不足。随着科学和生物生化技术的发展，食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度，食品中大肠杆菌的检测计数也将趋于提高精度与速度，不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品生不断改进与完善才能切实解决食品安全问题，为人品生活提供保障。活提供保障。Your text Your text Your text Your text 参考文献参考文献1 4种食品中大肠杆菌检测方法评价.周宏霞.2关于食品中大肠杆菌检测方法的研究.姚勇.3食源性大肠杆菌快速检测技术研究进展.董妍.4水中细菌总数与大肠杆菌检测方法的比较研究.黄友芳.5GB4789.38-2012 食品微生物学检测 大肠埃希氏菌计数6HJ/T 347-2007 水质 粪大肠菌群的测定7快速检测大肠菌群数的研究.徐尔尼.Thank you!