大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化.pptx
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1、大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞的制备与转化的制备与转化 一一.实验目的实验目的 通过本实验,学习大肠杆菌感受态细通过本实验,学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。胞制备和转化的原理与技术方法。二二.实验原理实验原理感受态细胞感受态细胞感受态细胞感受态细胞(Competent cells):(Competent cells):受受受受体体体体细细细细胞胞胞胞经经经经过过过过一一一一些些些些特特特特殊殊殊殊方方方方法法法法处处处处理理理理后后后后,细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜的的的的通通通通透透透透性性性性发发发发生生生生变变变变化化化化,成成成成为为为为能能能能使使使使许许许许多多
2、多多有有有有外外外外源源源源DNADNA的的的的载载载载体体体体分分分分子子子子通通通通过过过过的的的的感感感感受受受受态态态态细细细细胞胞胞胞(competent(competent cell)cell)。转化(转化(转化(转化(transformationtransformation):是是是是将将将将异异异异源源源源DNADNA分分分分子子子子引引引引入入入入受受受受体体体体细细细细胞胞胞胞,使使使使其其其其获获获获得得得得新的遗传性状的一种技术方法。新的遗传性状的一种技术方法。新的遗传性状的一种技术方法。新的遗传性状的一种技术方法。进入细胞的进入细胞的进入细胞的进入细胞的DNADNA分
3、子通过复制表达,才能实分子通过复制表达,才能实分子通过复制表达,才能实分子通过复制表达,才能实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。性状。性状。性状。大肠杆菌转化的方法:大肠杆菌转化的方法:大肠杆菌转化的方法:大肠杆菌转化的方法:1.化学法:使用化学试剂(如化学法:使用化学试剂(如化学法:使用化学试剂(如化学法:使用化学试剂(如CaClCaCl2 2)制备)制备)制备)制备的感受态细胞,通过热击处理将载体的感受态细胞,通过热击处理将载体的感受态细胞,通过热击处理将载体
4、的感受态细胞,通过热击处理将载体DNADNA分子导入受体细胞;分子导入受体细胞;分子导入受体细胞;分子导入受体细胞;2.电转化法:通过高压脉冲的作用将载体电转化法:通过高压脉冲的作用将载体电转化法:通过高压脉冲的作用将载体电转化法:通过高压脉冲的作用将载体DNADNA分子导入受体细胞。分子导入受体细胞。分子导入受体细胞。分子导入受体细胞。转化子的筛选:转化子的筛选:利用导入的利用导入的利用导入的利用导入的DNADNA上的选择性标记,区分转化子上的选择性标记,区分转化子上的选择性标记,区分转化子上的选择性标记,区分转化子与非转化子。与非转化子。与非转化子。与非转化子。选择性标记主要有两类:选择性
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