PCR反应原理.pptx
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1、n1985年年 美国美国PE-cetus公司人类遗传研究室公司人类遗传研究室的的Kary mullis发明了具有划时代意义的发明了具有划时代意义的PCR技术技术 n1988年年 美国美国PE-cetus公司推出世界上第一公司推出世界上第一台台PCR热循环仪,从而使热循环仪,从而使PCR反应自动化反应自动化 n1993年年 Kary Mullis因发明因发明PCR技术获得诺技术获得诺贝尔化学奖贝尔化学奖 n1995年年 定量定量PCR仪诞生,使定量研究仪诞生,使定量研究DNA靶序列成为现实靶序列成为现实 PCRPCR技术的诞生与发展技术的诞生与发展Kary Mullis第1页/共15页PCRPC
2、R反应原理和反应过程反应原理和反应过程(一)(一)PCR基本组成:基本组成:u模板DNAu引物u4种脱氧核糖核苷酸uDNA聚合酶u其他(Mg2+、化学物质等)(二)(二)DNA的体外复制的步骤:的体外复制的步骤:1、变性、变性(90-96)2、退火、退火(25-65)3、延伸、延伸(70-75)每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。第2页/共15页、变性(、变性(denaturationdenaturation)双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。第3页/共15页2、复性、复性(renaturation)(退火,(退火,annealing)系统温度降低,引物与系统
3、温度降低,引物与DNA模板结模板结 合,形成局部双链。合,形成局部双链。影响复性速度的因素:DNA浓度 DNA片段的大小 DNA片段复杂性 合适的复性温度 适当的离子强度第4页/共15页3、延伸(、延伸(extension)在Taq酶(在72左右,活性最佳)作用下,以dNTP为原料,从5端3端延伸,合成与模板互补的DNA链。第5页/共15页常用的荧光定量常用的荧光定量PCR方法方法SYBR Green I Taqman水解探针水解探针第6页/共15页SYBR Green I结合到双链结合到双链DNA的小沟部位的小沟部位只有与双链只有与双链DNA结合后才发荧光结合后才发荧光SYBR 与与dsDN
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