Hb的醋酸纤维薄膜电泳.pptx
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1、电泳电泳:指带电胶体粒子或分子在电场的指带电胶体粒子或分子在电场的作用下,作定向移动。作用下,作定向移动。由于各种物质分子由于各种物质分子的等电点不同在同一的等电点不同在同一P环境中所带的电环境中所带的电荷各不相同荷各不相同,再由于分子量、分子结构、形再由于分子量、分子结构、形状大小各有差异,因此在同一电场中泳动状大小各有差异,因此在同一电场中泳动速度也就不一样。一般来说,所带的电荷速度也就不一样。一般来说,所带的电荷多而分子量小、形状越接近球形者,泳动多而分子量小、形状越接近球形者,泳动速度快,反之则慢。速度快,反之则慢。电泳技术的分类:主要归纳为;1)显微电泳显微电泳即在显微镜下观即在显微
2、镜下观察胶体粒子或细胞的移动度,也称细察胶体粒子或细胞的移动度,也称细胞电泳。胞电泳。2)自由电泳自由电泳即悬浮在介质中即悬浮在介质中的细胞和生物大分子,在电场作用下的细胞和生物大分子,在电场作用下自由定向移动。自由定向移动。3)区域电泳区域电泳(区带电泳):即在(区带电泳):即在不同电力条件、支持物上进行直接分不同电力条件、支持物上进行直接分离,鉴定生物物质,促使获得各自电离,鉴定生物物质,促使获得各自电荷差异的生物粒子或分子形成各自区荷差异的生物粒子或分子形成各自区域以帯形停留在载体上。如:滤纸、域以帯形停留在载体上。如:滤纸、淀粉、琼脂、纤维素、聚丙烯酰胺凝淀粉、琼脂、纤维素、聚丙烯酰胺
3、凝胶等,此类胶等,此类 电泳技术分离技巧简便,电泳技术分离技巧简便,运用十分广泛。运用十分广泛。4)免疫电泳免疫电泳:即抗原与抗体在比:即抗原与抗体在比例合适的琼脂糖载体中相结合的一种例合适的琼脂糖载体中相结合的一种电免疫技术,亲和电泳即属此类。电免疫技术,亲和电泳即属此类。根据缓冲液的性质不同可分为:1.1.连续系统:连续系统:电泳缓冲液的离子成分、电泳缓冲液的离子成分、PHPH、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液相同,、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液相同,带电颗粒电泳时仅具有带电颗粒电泳时仅具有电荷效应电荷效应、分子筛分子筛效应效应。2.2.不连续系统:不连续系统:电泳缓冲液离子成分、电泳缓冲
4、液离子成分、pHpH、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液不尽、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液不尽相同,带电颗粒电泳时具有相同,带电颗粒电泳时具有浓缩效应浓缩效应、电电荷效应荷效应、分子筛效应分子筛效应。血红蛋白(血红蛋白(Hb)的组成及分类:的组成及分类:血红蛋白(血红蛋白(Hb):由:由亚铁血亚铁血红素红素、珠蛋白珠蛋白 组成组成 。每个珠蛋白分。每个珠蛋白分子由子由4条多肽链构成条多肽链构成 ,根据其一级结,根据其一级结构的不同可分为构的不同可分为、四种类型。四种类型。正常成人Hb种类:组成 百分含量 pIHbA 22 9598%6.95HbA2 22 23%7.38HbF 22 6.95 实
5、验原理实验原理(Experimental Principles)在pH8.6的环境中,Hb是一种带负电荷的蛋白质(Hb的pI 8.6),在电场中向正极泳动。电泳时,由于各种Hb等电点不同,所带电荷量不同;分子量大小、形状不同,导致各自的泳动速度不同,因而被分离。这种分离可初步鉴定不同的Hb。醋酸纤维素薄膜是由纤维素醋酸纤维素薄膜是由纤维素的羧基进行乙酰化后而制成的,浸湿的羧基进行乙酰化后而制成的,浸湿后有巨大的张力和柔韧性,几乎对所后有巨大的张力和柔韧性,几乎对所有生物活性物质均能通过电泳得到分有生物活性物质均能通过电泳得到分离。离。醋酸纤维素薄膜电泳因设备醋酸纤维素薄膜电泳因设备简单、操作方
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