四川盆周山区野生地果快繁技术研究_邹海龙.pdf

年第 期种植技术 收稿日期：基金项目：成都农业科技职业学院院级重点课题（）；四川省大学生创新创业训练项目（）；国家级大学生创新创业训练项目（）。作者简介：邹海龙（），男，本科，研究方向：现代农业技术。：。为通讯作者。四川盆周山区野生地果快繁技术研究邹海龙，罗琳琳，周润东，唐海鹏，马 杰，韦献雅（成都农业科技职业学院种苗研究所，成都；成都启蛰农业有限公司，成都；西昌学院农业科学学院，四川 西昌）摘 要：以四川盆周山区野生地果为实验材料，进行脱毒快繁研究。结果表明：消毒最佳方法是 酒精消毒 无菌水清洗 次 升汞溶液 无菌水清洗 次，这种消毒方法污染率仅为，褐化率为，成活率为，未污染的茎段颜色正常，没有出现坏死现象。最佳初代增殖培养基是 琼脂 蔗糖 ，萌芽率达到了。且增殖倍数在 ，茎段长势强，芽分蘖能力强，生长正常，为 。最佳壮苗为 .琼脂 蔗糖 ，时其茎段明显增粗且伸长，新芽茁壮，叶片宽大，叶色浓绿，并且组培苗长势正常。最佳生根培养基是 .琼脂 蔗糖 ，生根效果好，根系多且粗长。最佳移栽基质是营养土：椰糠：蛭石：，移栽成活率 以上。关键词：野生地果，快繁，培养基 地果（）又名伏夏果、野地瓜等，为桑科菠萝蜜亚科、榕属无花果亚属，是一种多年生匍匐木质藤本，属于雌雄异株植物。产于我国四川、湖北、广西、贵州、湖南、云南和西藏，国外在印度和中南半岛有分布。地果的茎段为棕褐色，节略有膨大。分枝多，生长快，攀附力也很强，果实呈球形状，直径 ，果实初期呈青色带小点，成熟褐红色带小点，甜度高且果肉呈现颗粒般。营养丰富，是集食用、药用、绿化、观赏于一体等多用途经济作物，其蛋白质中氨基酸种类组成合理，其中 种抗疲劳支链氨基酸（缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸）含量占总氨基酸的 ，且有“水果之王”等多种美誉。全株可药用，果实富含微量元素，具人体健康必需的膳食纤维，膳食纤维可促进肠蠕动，有利于改善消化不良及慢性便秘患者的症状，适合及长期卧床者。茎叶用于风热咳嗽、水肿、经闭、痢疾、带下病；花用于遗精、滑精。根用于清热利湿、黄疸等。目前生产上地果采用扦插和压条繁殖，繁殖周期长，且易感染多种病毒，使地果体内积累多种病毒，从而导致地果产量下降、品质降低，种性退化，般减产。其生长周期长且带病株较多严重制约了野生地果的生产发展，急需脱毒快繁技术进行品种提纯复壮。国内外尚无高抗病毒地果。采用茎段组织培养脱毒地果苗，成为防治病毒，提高地果产量和品质及缩短育苗周期的首选方法。研究通过茎段脱毒的方法，通过处理茎段表面、茎段分生组织剥取、初代增殖培养（基本培养基为 附加不同比例的激素）、壮苗培养等一系列实验操作及培养基配方优化，建立四川盆周山区野生地果快繁体系。该项研究为野生地果的快速繁殖建立快繁技术体系，为实际生产提供了支撑。材料和方法 供试材料及培养条件实验材料为四川盆周山区野生地果，年 月收获，年 月份芽点萌发待用。无菌培养条件为：日温 ，夜温 ，光照时数 ，光照强度 条件下培养。材料预处理 选材预处理应选优良单株作茎段剥离材料。放置在光照培养箱中处理（，光照；黑暗，）周。外植体消毒与茎段剥离方法将当年生且茁壮的野生地果嫩茎剪取的 的放入烧杯中，用自来水清洗 次，后在烧杯口蒙上纱布，加 滴洗洁精，用自来水冲洗 后，放入无菌烧杯中。在超净工作台中用 酒精中浸 ，再用无菌水清洗 次，以保证无酒精残留。用升汞液消毒 ，取出用无菌水冲洗 次，用无菌滤纸吸干材料表面水分。在解剖镜下用手术刀等工具轻、准、快速地剥去幼叶。切取带 个叶原基的生长点。接种于 .琼脂 蔗糖 琼脂培养基上，。每瓶接种 个带芽茎段，每个处理种植技术 年第 期 瓶，重复 次。接种后 观察记录不同消毒处理的污染率、褐化率、成活率。初代增殖培养将组培苗转接于植物生长调节剂设置的 种培养基梯度中且重复 次。每瓶转苗 株，每个处理 瓶，后观察生长情况。琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 壮苗培养将增殖培养的获取的丛生芽，存在数量多芽长约 ，较为弱小，需要进行壮苗培养以提高无菌苗的质量。将增殖的苗，转入壮苗设置的 种培养基中培养，重复 次。在第、观察生长情况。琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 生根培养当壮苗处理后的苗高为 以上时，将其从基部切下，按照生根培养基的 个梯度进行接种，重复 次。每瓶接种 株，每个处理 瓶在 后观察生长情况。琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 琼脂 蔗糖 驯化移栽在温度 、相对湿度 的温室大棚进行驯化，移栽前，将生根的组培苗放入炼苗实验室，放置 后将瓶盖扯开一半，继续锻炼，再将瓶口完全揭开，继续炼苗。移栽时，将苗根部的培养基用自来水洗掉，用 高锰酸钾浸泡消毒 并用清水淋洗；最后移栽到 种不同的基质中，每个处理为 株生根组培苗，后观察 基质配方：椰糠：蛭石：（）；营养土：椰糠：蛭石：；营养土：椰糠：蛭石 ：；营养土：椰糠：蛭石：。统计分析方法实验数据处理使用 、软件进行数据分析。增殖倍数 增殖后芽的总数 接种的外植体个数生 根 率（）生 根 苗 数 培 养 总 苗 数 平均根数 所有根数之和 生根苗数污染率（）接种污染数 接 种总数死亡率（）未污染死亡数 未污染 总数 褐化率（）未污染褐化数 未污染总 数 结果与分析 酒精及升汞消毒时间本研究设计了消毒时间梯度。外植体转入后 观察并记录存活数，由于设置的消毒时间梯度分布较大，升汞的消毒时间较长，因此污染相对较低，但由于褐化率高，导致了死亡率偏高。从表 可以看出，消毒最佳方法是处理：酒精消毒 无菌水清洗 次 升汞溶液 无菌水清洗 次，这种消毒方法污染率仅为 ，褐化率为，成活率为 未污染的茎段颜色正常，没有出现坏死现象。酒精的消毒时间过长容易将外植体整株褐化变色，升汞消毒时间过长容易出现坏死现象，培养 后茎段直接死亡，因此合适的消毒方式不仅看污染率，还要看后期的生长状态。初代增殖培养不同浓度植物生长调节剂组合增殖培养 后，各处理的萌芽率均能正常萌芽，不同的浓度对萌芽的情况差异显著。从表 可以看出处理：琼脂 蔗糖，萌芽率达到了，增殖倍数在 ，茎段长势强，芽分蘖能力强，生长正常，可能是野生地果对 浓度敏感度低，需要较高浓度有利于茎段分蘖，对 浓度非常敏感，容易生长，增殖系数达到了 ，这可能是地果内部激素充足，足够组培苗生长。年第 期种植技术表 不同消毒方式对茎段的影响处理不同消毒方式消毒数量（个）污染率褐化率成活率茎段状态酒精 升汞溶液 污染茎段严重，颜色正常酒精 升汞溶液 污染茎段严重，边缘褐化酒精 升汞溶液 部分污染颜色正常酒精 升汞溶液 部分污染茎段，边缘褐化酒精 升汞溶液 污染少边缘褐化酒精 升汞溶液 污染少边缘褐化，出现坏死表 不同培养基对茎段萌芽的影响处理培养基配方接种茎段（株）平均萌芽率萌芽平均增殖倍数生长状态 琼脂 蔗糖 茎段长势弱，生长缓慢，芽分蘖少 琼脂 蔗糖 茎段长势较强，芽分蘖较多 琼脂 蔗糖 茎段长势强，芽分蘖多但生长后期较慢 琼脂 蔗糖 茎段长势强，芽分蘖能力强，生长正常 壮苗培养增殖培养后的地果苗较弱，进一步将地果苗进行培养，在前人同科品种研究基础上，使用 种不同配方培养基进行壮苗培养，分别记录了、的生长情况。结果发现处理 效果最好：琼脂 蔗糖，茎段明显增粗，且深长，新芽茁壮，叶片宽大，叶色浓绿，并且组培苗长势正常，这可能是添加激素充足，使得组培苗生长茁壮，分蘖和长势正常。表 不同培养基对壮苗的影响处理培养基配方 生长情况 生长情况 生长情况 琼脂 蔗糖 茎无变化茎未增粗，但伸长茎增粗，伸长，叶片细长叶色淡绿 琼脂 蔗糖 茎未增粗，但伸长茎增粗，且伸长，叶片短但宽，叶片淡绿茎增粗，且伸长，叶片宽，叶片绿色，新芽弱小，分蘖少 琼 脂 蔗糖 茎增粗，未伸长茎增粗，且伸长，叶片正常，叶色绿色茎增粗，且伸长，叶片宽大，叶色绿色新芽多，分蘖多 琼 脂 蔗糖 茎增粗，且伸长茎明显增粗，且伸长，新芽正常，叶片宽大，叶色绿色茎明显增粗，且深长，新芽茁壮，叶片宽大，叶色浓绿 生根培养通过壮苗处理的后苗转接到生根的植物生长调节剂的梯度中，进行生根培养，第 的观察后所有处理的组培苗生长趋于正常。结果表明，处理 和 对组培苗的生根率和平均生根数的影响显著，处理 的：琼脂 蔗糖 ，其生根效果好，根系多，根系粗长。使用 的配方中，有明显生根情况，且浓度增加其长势好，生根数量多。但 到达 时生长受到抑制，因此处理 是最好的生根处理。生根阶段使用处理，移栽时候非常容易清洗根部培养基，因根系粗长且较多，增加移栽成活率。最佳移栽基质移栽采用了进口的椰糠、蛭石等混合代替园土为基质，通过大棚驯化温室高密度栽植组培苗，全程通过物联网进行调控温、湿、光、水、肥等，尽最大程度提供最佳的培养条件。试验采用优质低位泥炭土运用到脱毒野生地果种苗的生产中，试验效果良好。以野生地果组培苗为材料，经过栽培基质配制试验，证明在相同栽培条件和管理措施下，不同材料配制栽培基质中，最优栽培基质为“营养土：椰糠：蛭石 ：”，比传统对照采用“蛭石 珍珠岩 ：”的基质，缩短了一半的生长周期，经济效益明显增加。种植技术 年第 期 表 不同培养基对生根培养的影响处理培养基配方平均生根率平均根数生长状态 琼脂 蔗糖 根系细长，生根较少 琼脂 蔗糖 根系较多，但细小 琼脂 蔗糖 根系多，根系粗长 琼脂 蔗糖 根系长势差，根系生长受到抑制表 不同材料配制栽培基质对脱毒野生地果种苗繁育的影响处理基质配方栽种数量（株）种苗叶数（片）茎节（个）成活率生长状态椰糠：蛭石：（）正常，保水性差，营养缺乏营养土：耶糠：蛭石：生长叶片较多萎蔫，根部腐烂、保水性好营养土：耶糠：蛭石：茁壮，长势快，保水性好营养土：耶糠：蛭石：正常，营养缺乏 讨论野地果的快速繁殖可提供技术保障，为生产应用提供支撑。将组培快繁技术运用到四川野生地果品种，应选择合适的培养基、植物生长调节剂及培养条件，用前沿的技术完善该品种的快繁。根据文献报道，能促进地果愈伤组织诱导与分化，但地果在组织培养中对 和 的浓 度配比要求不同，这可能与地果不同地区和培养条件等因素有关。过高的 浓度也会抑制地果分蘖，适宜的较低浓度的 能和 起到协同增益的作用，既能 促进地果分蘖的发生，又能促进地果组培苗生长。李芊夏研究认为，添加 和 的培养基更能促进地果的分蘖。本实验表明，在初代增殖阶段，浓度为 时，浓度为 时，增殖效果最好；浓度为.时，浓度 ，增殖效果差。此外，本实验表明，最佳壮苗培养基为 琼图 不同时期生长情况注：外植体消毒苗；初代增殖苗；壮苗培养；生根苗培养；移栽苗。脂 蔗糖 ，当加 和 后，芽茁壮，分蘖和长势正常，本研究结 果可为四川当地地果优良种苗的快速繁殖 提供技术支撑，同时为四川种质资源保存、组培 扩繁、品种改良、育种等研究奠定基础，促进四川周边地区地果产业持续健康发展。参考文献：石登红，杨秀群，蒋华梅，等 野地瓜主要营养成分分析及安全性评价 西南农业学报，（）：，（）年第 期种植技术刘晓捷 地果茎叶中总黄酮的提取工艺研究 乐山师范学院学报，（）：，（）：中国科学院中国植物志编辑委员会 中国植物志 北京：科学出版社，：唐伟，李佩洪，陈政，等 野生地果的品种调查及栽培品种的筛选 内江科技，（）：杨秀群，石登红，蒋华梅，等 野生植物野地瓜和插秧泡果实的营养成分及利用价值 贵州农业科学，（）：徐蔚，王培，李尚真，等 地果根茎化学成分研究 天然产物研究与开发，（）：李洁玉，谭小蓉，张力强 野地瓜的驯化栽培与开发利用研究 亚太传统医药，（）：，王绪英，向红 地果中黄酮化合物的提取工艺研究 贵州农业科学，（）：刘辰飞，张玉武，韦堂灵，等 野地瓜扦插试验 贵州科学，：，齐春华 植物组织培养技术发展现状及方向 农业科技与装备，（）：，饶宝蓉 杉木苗组织培养外植体的选择及其消毒方法 热带农业科学，（）：杨玉春，魏永祥，王兴东，等 树莓组培苗温室驯化技术 新农业，（）：濮晓珍，尹春英，周晓波，等 铁皮石斛组培苗移栽驯化过程中叶片光合特性、超微结构及根系活力的变化 生态学报，（）：汪长水，张庆美，程习梅，等 辣木组培苗移栽驯化 亚热带植物科学，（）：李芊夏 地果的组织培养及抗旱性研究 哈尔滨：东北农业大学，（上接第 页）研究。因此，开展因地制宜的开展甘薯大棚三膜育苗，有助于提高育苗效率，提升薯苗质量，降低育苗成本。在强化科技支撑上，建议加大对甘薯高效育苗技术进行科研投入与技术攻关，鼓励科研单位与企业进行密切合作，共同开展甘薯种苗生产，创新、优化生产技术，形成高效、快捷的生产技术体系，为四川甘薯高质量发展提供技术支撑。参考文献：马代夫，刘庆昌，张立明，等 中国甘薯 南京：江苏凤凰科学技术出版社，：盛家廉，袁宝忠 甘薯栽培技术 北京：农业出版社，：