免疫学技术29.pptx

CONFIDENTIALRev.05/07/02免疫学技术免疫学技术免疫学技术免疫学技术 【应用于免疫分析应用于免疫分析应用于免疫分析应用于免疫分析】小组成员小组成员：吴一帆：吴一帆 姚佳祺姚佳祺 项卫敏项卫敏CONFIDENTIALRev.05/07/022免疫学测定的中心问题免疫学测定的中心问题免疫学测定的中心问题免疫学测定的中心问题作作为为免免疫疫反反应应，抗抗原原抗抗体体的的选选择择是是整整个个免疫分析特异性和总体表现的关键免疫分析特异性和总体表现的关键l如如何何选选择择好好一一个个抗抗体体去去检检测测一一个个被被检检物物质质，而而不不与与非非常常相相似似结结构构的的其其它它物物质质有有交交叉叉反反应应，或或漏漏掉掉须反应的物质，这是分析设计的重中之重须反应的物质，这是分析设计的重中之重l抗体的量必须恰当，过多会引起复合物的溶解抗体的量必须恰当，过多会引起复合物的溶解CONFIDENTIALRev.05/07/023关于抗体的亲合力关于抗体的亲合力关于抗体的亲合力关于抗体的亲合力抗体除了要求纯度外（单价特异性）还必须要求抗体除了要求纯度外（单价特异性）还必须要求亲合力，亲合力，效价指抗体的量，亲合力指抗体的质效价指抗体的量，亲合力指抗体的质在非竞争免疫反应的模式中抗体亲和力比标记物在非竞争免疫反应的模式中抗体亲和力比标记物的最低检测极限更能影响分析的灵敏度的最低检测极限更能影响分析的灵敏度在竞争法免疫反应的模式中抗体亲和力直接关系在竞争法免疫反应的模式中抗体亲和力直接关系到竞争的结果到竞争的结果对于样品中的干扰物质对于样品中的干扰物质,亲合力影响分析的抗干亲合力影响分析的抗干扰的能力扰的能力CONFIDENTIALRev.05/07/024免疫分析的工作定义免疫分析的工作定义免疫分析的工作定义免疫分析的工作定义免疫分析免疫分析(Immunoassay)是一种测试方式是一种测试方式,使用特使用特殊的抗体与被检测物质的结合殊的抗体与被检测物质的结合,此被检测物质不能通此被检测物质不能通过简单的化学方法所容易检测到的过简单的化学方法所容易检测到的.通常在检测系统中会使用到一种叫通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（标记物（labeling）的的物质物质,常标记在抗体上常标记在抗体上通常会有一个通常会有一个分离（分离（separation）的过程在最后读取信的过程在最后读取信号前号前总是需要去仔细关注一下分析的总是需要去仔细关注一下分析的模式（模式（format）CONFIDENTIALRev.05/07/025Access Access 的技术的技术的技术的技术免疫分析免疫分析-“what”检测技术检测技术 化学发光化学发光 分离技术分离技术 磁性颗粒磁性颗粒 分析模式分析模式 灵活灵活-“how”分析模式分析模式分析模式分析模式检测技术检测技术检测技术检测技术分离技术分离技术分离技术分离技术CONFIDENTIALRev.05/07/026检测技术检测技术检测技术检测技术免疫分析免疫分析检测技术检测技术(Detection)有许多可用的方法有许多可用的方法 应用一些应用一些“标记物标记物”所产生的一些能量进行测定所产生的一些能量进行测定标记物可以或可以不被激活而产生能量标记物可以或可以不被激活而产生能量通过一些相应的检测器对标记物产生的能量进行测通过一些相应的检测器对标记物产生的能量进行测定定分离技术分离技术 分析模式分析模式 CONFIDENTIALRev.05/07/027放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析放射免疫分析(Radioimmunoassay)(Radioimmunoassay)优势优势优秀的灵敏度优秀的灵敏度较宽的检测线性范围较宽的检测线性范围局限性局限性标记物的半衰期短标记物的半衰期短试剂效期短试剂效期短检测结果的重现性差检测结果的重现性差每次检测都要做标准曲线每次检测都要做标准曲线分析的反应时间长，半天分析的反应时间长，半天2天天发射性污染有害发射性污染有害很难实现自动化检测很难实现自动化检测CONFIDENTIALRev.05/07/028分离技术分离技术分离技术分离技术免疫分析免疫分析检测技术检测技术分离技术分离技术(Separation)有很多方式有很多方式典型的是典型的是,特异性结合的分析物被保留而未结合物特异性结合的分析物被保留而未结合物质和无用的反应物被清除质和无用的反应物被清除 分析模式分析模式 CONFIDENTIALRev.05/07/029技术的创新技术的创新技术的创新技术的创新微粒子包被微粒子包被珠包被珠包被微孔包被微孔包被管包被管包被CONFIDENTIALRev.05/07/0210磁颗粒包被技术磁颗粒包被技术磁颗粒包被技术磁颗粒包被技术磁颗粒抗体包被技术磁颗粒抗体包被技术磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系磁颗粒均匀的悬浮于整个反应体系分析物在磁颗粒表面捕获分析物在磁颗粒表面捕获磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒在磁场中被清洗磁颗粒重新悬浮十分容易磁颗粒重新悬浮十分容易优势优势快速的反应动力学快速的反应动力学较少的样品量较少的样品量提高检测的灵敏度提高检测的灵敏度极好的批内重显性极好的批内重显性可以探针取放，实现自动化可以探针取放，实现自动化CONFIDENTIALRev.05/07/0211分析模式分析模式分析模式分析模式免疫分析免疫分析检测技术检测技术分离技术分离技术 分析模式分析模式-有很多种方式有很多种方式可定义为分析的可定义为分析的“处方处方”设定一个最优化的模式设定一个最优化的模式(可变量可变量)去最优化项目的去最优化项目的临床应用临床应用 CONFIDENTIALRev.05/07/0212分析模式分析模式分析模式分析模式可变量可变量夹心法夹心法(Sandwich)vs.竞争法竞争法(competitive)标记物的放置标记物的放置同步同步(Simultaneous)vs.分步分步(sequential)试剂试剂/样品加入的顺序样品加入的顺序孵育的次数孵育的次数(步骤步骤)清洗分离的次数清洗分离的次数(步骤步骤)试剂试剂/样品的体积样品的体积/浓度浓度孵育的时间孵育的时间孵育的温度孵育的温度CONFIDENTIALRev.05/07/0213Access Access 的分析模式的分析模式的分析模式的分析模式基本分析模式基本分析模式夹心法夹心法(Sandwich)竞争结合竞争结合(Competitive binding)试剂的加入，孵育和清洗试剂的加入，孵育和清洗 同步同步(Simultaneous)(1步步,1次清洗次清洗)分步分步(Sequential)(2步步,2次清洗次清洗)“Piggyback”(2步步,1次清洗次清洗)CONFIDENTIALRev.05/07/0214夹心法分析模式夹心法分析模式夹心法分析模式夹心法分析模式捕捉抗体捕捉抗体(Capture antibody)和标记抗体和标记抗体(labeled antibody)每个不同的抗体可以针对不同的抗原决定簇，每个不同的抗体可以针对不同的抗原决定簇，或二个在同一个抗原决定簇或二个在同一个抗原决定簇分析更特异因为二个抗体同时反应分析更特异因为二个抗体同时反应适合于检测大分子物质适合于检测大分子物质b bhCG TSHIgEProlactinFSH LH Ferritin HBsAgCONFIDENTIALRev.05/07/0215竞争法分析模式竞争法分析模式竞争法分析模式竞争法分析模式只有捕捉抗体只有捕捉抗体主要针对小分子物质检测主要针对小分子物质检测 没有足够表面积的分析物去符合没有足够表面积的分析物去符合“夹心法夹心法”要求要求T3 FT3 B12 Digoxin ProgesteroneT4 FT4 Folate Cortisol EstradiolCONFIDENTIALRev.05/07/0216分析模式的选择分析模式的选择分析模式的选择分析模式的选择需考虑的因素需考虑的因素分析物的特征分析物的特征体积（竞争法还是夹心法）体积（竞争法还是夹心法）浓度（一步法，二步法，反应时间等）浓度（一步法，二步法，反应时间等）潜在的潜在的“钩状效应钩状效应”（hook effect）-假阴假阴性性解决的方法可以使用解决的方法可以使用2步法模式步法模式样品量和试剂量的平衡样品量和试剂量的平衡抗干扰能力抗干扰能力仪器的能力局限性仪器的能力局限性预处理的要求预处理的要求CONFIDENTIALRev.05/07/0217案例案例案例案例:hLH:hLH 抗原位点图抗原位点图抗原位点图抗原位点图BetaBetaAlphaAlphaB-D 1hTSHhCGB-D 2hCGA-D 1hCGhFSHhTSHB-D 3A-D 3A-D 2hCGhFSHhTSHCONFIDENTIALRev.05/07/0218抗体的选择抗体的选择抗体的选择抗体的选择等分子等分子(Equimolar)vs.非等分子非等分子(non-equimolar)分析分析依赖于特异性抗体的选择依赖于特异性抗体的选择结合模式结合模式-一些位点被隐藏一些位点被隐藏游离模式游离模式-所有位点都暴露所有位点都暴露PSAACTPSACONFIDENTIALRev.05/07/0219嗜异性抗体嗜异性抗体嗜异性抗体嗜异性抗体(Heterophile Antibody)(Heterophile Antibody)病人样品中可能自然产生一些针对动物免疫病人样品中可能自然产生一些针对动物免疫球蛋白的抗体球蛋白的抗体(通常是鼠或羊通常是鼠或羊)来源于暴露于这些动物或接受过动物血清的治疗来源于暴露于这些动物或接受过动物血清的治疗分析的干扰分析的干扰可以在双单克隆夹心法分析模式中引起假阳性可以在双单克隆夹心法分析模式中引起假阳性可以在单克隆可以在单克隆/多克隆分析模式中出现假阴性多克隆分析模式中出现假阴性CONFIDENTIALRev.05/07/0220免疫分析设计及优化免疫分析设计及优化免疫分析设计及优化免疫分析设计及优化开发免疫分析试剂盒的过程就是选择并优化各种实验条件，达到预期结果并能准确反应临床真实情况的过程达到预期结果并能准确反应临床真实情况的过程抗原抗原/抗体抗体分析模式分析模式分离技术分离技术检测技术检测技术总体分析表现总体分析表现CONFIDENTIALRev.05/07/0221心肌钙蛋白和心脏疾病心肌钙蛋白和心脏疾病心肌钙蛋白和心脏疾病心肌钙蛋白和心脏疾病cTnI的水平已用于AMI的诊断,但随着诊断检测技术的提高cTnI可对病人的短期和长期的心血管事件的风险进行预期CONFIDENTIALRev.05/07/0222免疫分析的未来免疫分析的未来免疫分析的未来免疫分析的未来过去过去症状的处理症状的处理没有标准的准则没有标准的准则现在现在标准化的诊断和治疗标准化的诊断和治疗的步骤的步骤减少操作的可变性减少操作的可变性 和和不依从性不依从性着重单个个体着重单个个体明天明天人群疾病的花费和因人群疾病的花费和因果关系果关系确认一些医学措施所确认一些医学措施所带来的益处带来的益处风险评估风险评估教育项目预防发病率教育项目预防发病率展望展望控制发病率控制发病率(控制控制你因某病而死亡你因某病而死亡)紧急监护紧急监护疾病管理疾病管理人群健康管理人群健康管理更有效合理更有效合理更有效合理更有效合理的管理的管理的管理的管理疾病的有效管理已成为卫生保健系统机制改变的基石，疾病的有效管理已成为卫生保健系统机制改变的基石，同样的将推动所有的决定和因此而产生的行动。同样的将推动所有的决定和因此而产生的行动。CONFIDENTIALRev.05/07/0223Access 2Access 2 免疫分析系统免疫分析系统免疫分析系统免疫分析系统产品试图产品试图产品试图产品试图产品试图产品试图CONFIDENTIALRev.05/07/0224产品产品产品产品图图CONFIDENTIALRev.05/07/0225谢谢谢谢谢谢谢谢CONFIDENTIALRev.05/07/02WkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaIB0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdLaE2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNc4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5Dw&t!pYmVjRgOdL9I