子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响.docx
《子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响.docx(13页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响摘要目的:采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法:对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定,然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养,观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果:与无上皮细胞相比,共培养明显促进了小鼠桑椹胚率,囊胚率,囊胚孵化率和胚胎总细胞数。结论:子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育,对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。关键词子宫内膜上皮细胞;共培养;体外受精;小鼠Effects of Coculture of Mouse Embryo with Endom
2、etrial Epithelial Cells on Early Mouse Embryonic Development Abstract:Objective To observe the effects of coculture of mouse embryo with endometrial epithelial cells on early embryonic development inMouse endometrial epithelial cells were isolated and cultured,then it was cocultured with mouse embry
3、os fertilized in vitro. The percentage of embryo cleavage, blastocyst hatching and total cell number of blastocyst were observed. Results Coculture with endometrial epithelial cells could promote the formation of mouse morula (% and %,) and blastocyst (% and %,), and increase the blastocyst hatched
4、rate (% and %,) and total cell number of blastocyst ( and , ).Conclusion Coculture with endometrial epithelial cells can facilitate the development of early mouse embryo in vitro, which can optimize the condition of embryonic development in vitro.Key word: Endometrial epithelial cells;Coculture;In v
5、itro fertilization;Mouse早期胚胎发育是一个极其复杂的过程,受到多种因素的影响。在生殖医学等多个领域,胚胎体外培养技术已得到很大的提高,胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、提高移植后胚胎着床率1等优势而成为一种有效的胚胎体外培养途径。共培养的方法很多,其中以采用雌性生殖道细胞的效果最佳2,3。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育环境的影响,本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎进行共培养,观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。1材料与方法材料实验动物:15只20 g的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为1
6、2 h,饲养温度为24 26 ,自由采食饮水。试剂:DMEM培养基;胎牛血清;孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素(宁波激素制品厂);兔抗人角蛋白多克隆抗体;生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Zymed公司);实验中其余所用化学药品和试剂购自Sigma公司。方法小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养:根据Wegner等人报道的方法从小鼠子宫组织中分离上皮细胞。调整细胞密度为5105/ml,细胞以 ml/孔接种于24孔培养板中,置入37 、95%湿度、5%CO2培养箱中培养。次日下午每孔更换 ml新鲜培养液,以后隔天换液一次。在接种后第56天,细胞完全生长汇合时,收集细胞进行冷
7、冻保存。细胞的免疫染色:复苏的上皮细胞直接接种于多聚赖氨酸包被的盖玻片上,放入培养箱中培养。待细胞单层形成后取出玻片,预冷的PBS漂洗,4%多聚甲醛室温下固定30 min,3%的H2O2孵育30 min,10%的正常羊血清封闭40 min;加一抗,4 孵育过夜;添加生物素标记羊抗兔的IgG,室温下孵育2 h;添加辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素,室温下孵育2 h;DAB显色,苏木精复染,封片。阴性对照采用PBS代替一抗,其它步骤相同。小鼠体外受精及胚胎培养:昆明小鼠体外受精和卵裂所用培养液分别为HTF和mKSOM,体外受精方法参见王敏康等人的报道。受精后体外培养24 h,均等卵裂为2-细胞者判定
8、为受精卵。冷冻细胞复苏后接种于96孔培养板,体外培养3 d。共培养前用含% BSA的mKSOM培养基润洗细胞两次,加入新鲜mKSOM培养基。在无上皮细胞单层的培养孔中也同样加入新鲜mKSOM培养基作为对照组,培养板置于CO2培养箱预热3 h。受精卵随机放入对照组和实验组的各培养孔中,每孔放入胚胎2030个。置入37 、5%CO2的培养箱中培养,每24小时更换新鲜培养基,每日观察记录胚胎的发育情况。囊胚期胚胎细胞计数:囊胚期的胚胎用含1%多聚甲醛室温下固定5 min,固定好的胚胎移入Hoechst 33342染色液滴中,室温孵育5 min。孵育结束后胚胎转移至50的甘油中,混匀后转移至载玻片上制
9、片,荧光显微镜下对胚胎总细胞数进行计数并拍照。数据处理每组实验重复46次,采用Sigmaplot软件对所有实验数据采用t检验进行统计分析,数据结果以均数标准差表示,为差异有显着性。2结果小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养在倒置显微镜下,胰酶消化后的子宫内膜上皮细胞呈团块状或葡萄状,接种24 h后仍有部分漂浮。3 d后细胞成团生长,排列紧密,单个的上皮细胞呈蝌蚪状,细胞将生长汇合至培养孔面积的80%左右。生长至第4天,细胞完全铺满板底,第56天后,上皮细胞已经失去细胞形态,细胞完全生长汇合为单层。细胞的免疫化学染色为了进一步鉴定细胞单层中上皮细胞的纯度,采用上皮细胞特异的细胞角蛋白抗体对细胞单层进行
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 子宫 内膜 上皮细胞 小鼠 胚胎 培养 早期 发育 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【快乐****生活】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【快乐****生活】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。