大肠菌群计数作业指导书.doc
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1、大肠菌群计数(MPN计数法)作业指导书1.0 目的规定大肠菌群计数的方法。2.0 适用范围适用于产品中的大肠杆菌群的计数。3.0 术语3.1 大肠菌群:在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。3.2 MPN最可能数:基于泊松分布的一种间接计数方法。4.0 检验原理MPN 法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。5.0 作业流程图见附录A。6.0 内容及要求6.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其它设备和材料如下:6.1
2、.1 恒温培养箱:3616.1.2 恒温水浴箱:4616.1.3 天平:感量0.1g6.1.4 均质器6.1.5 无菌吸管:1ml(具0.01刻度)、10ml(具0.1刻度)或微量移液器及吸头。6.1.6 无菌锥形瓶:容量500ml6.1.7 无菌试管:16mm160mm、18mm180mm6.1.8 无菌玻璃珠:直径约5mm6.1.9 无菌倒管6.1.10 精密PH试纸6.2 培养基和试剂6.2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)6.2.2 煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)6.2.3 1mol/LNaOH 溶液:称取40g氢氧化钠溶于1000mL无菌蒸馏水中。6.2.4 1mol/L HCl
3、溶液:移取浓盐酸90mL,用无菌蒸馏水稀释至1000mL。6.2.5 75%乙醇溶液6.2.6 无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中,121高压灭菌15min。6.3 操作步骤6.3.1样品稀释a、 固体和半固体样品:称取25g样品置于盛有225ml无菌生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1-2min,制成1:10的样品匀液。b、 液体样品:以无菌吸管吸取25ml样品置于盛有225ml的无菌生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。c、 样品匀液的pH 应在6.5-7.5之间,必要时分别用1mol/LNaOH 或1mol
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