崔生辉、高飞等对食品检测即用型液体培养基的评价研究.pdf
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1、第 7 卷 第 7 期 食 品 安 全 质 量 检 测 学 报 Vol.7 No.7 2016 年 7 月 Journal of Food Safety and Quality Jul.,2016 基金项目:北京市科技计划项目(D161100002116003)Fund:Supported by the Beijing Municipal Science and Technology Project(D161100002116003)*通讯作者:崔生辉,研究员,主要研究方向为食源性病原菌鉴定与追踪技术、食源性病原菌耐药机制分析。E-mail:*Corresponding author:CUI
2、Sheng-Hui,Research Fellow,National Institutes for Food and Drug Control,No.2,Tiantan West,Doncheng District,Beijing 100050,China.E-mail: 食品检测即用型液体培养基产品的评价研究 高 飞,骆海朋,任 秀,陈怡文,刘 娜,余 文,谢冠东,崔生辉*(中国食品药品检定研究院,北京 100050)摘摘 要要:目的目的 对即用型缓冲蛋白胨水、3%氯化钠碱性蛋白胨水、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤培养基进行质量评价。方法方法 使用即用型培养基和新鲜配制的培养基对已完成生化确认的
3、10 株沙门氏菌、5 株阪崎肠杆菌、15株副溶血性弧菌、15株肠杆菌科细菌共45株目标菌及5株干扰菌进行检测,确定菌株的灵敏度和特异性;平行培养 0、6 和 24 h 后对比即用型培养基增菌效果与新鲜配制的培养基是否存在差异。结果结果 使用即用型培养基与新鲜配制的培养基对全部目标菌与干扰菌的 6 h、24 h 细菌生长的检验结果未见显著差异(全部单因素方法分析结果均为 P0.05)。结论结论 被测试目标菌及干扰菌在即用型培养基中的生长结果可满足 GB 4789.28-2013对非选择性及选择性增菌培养基的质量要求。关键词关键词:即用型培养基;灵敏度;特异性 Research and evalu
4、ation on the ready-to-use culture medium in food detection GAO Fei,LUO Hai-Peng,REN Xiu,CHEN Yi-Wen,LIU Na,YU Wen,XIE Guan-Dong,CUI Sheng-Hui*(National Institues for Food and Drug Control,Beijing 100050,China)ABSTRACT:Objective To conduct quality assessment of ready-to-use buffered peptone water,3%s
5、odium chloride alkaline peptone water and lauryl sulfate tryptone(LST)broth.Method Using ready-to-use culture medium and freshly prepared culture medium,the sensibility and specificity of 45 strains of target bacteria which had completed the biochemical confirmation,including 10 strains of Salmonell
6、a,5 strains of Enterobacter sakazakii,15 strains of Vibrio parahaemolyticus and 15 strains of enterobacteriaceae bacteria,and 5 strains of interfering bacteria were detected and confirmed.After parallel cultivation for 0,6 and 24 h,ready-to-use culture medium and freshly prepared culture medium were
7、 contrasted to find whether there was a significant difference.Results There were no significant difference between ready-to-use culture medium and freshly prepared culture medium through cultivation of target bacteria and interfering bacteria for 6 h and 24 h,and P values were all greater than 0.05
8、.Conclusion In ready-to-use culture medium,the growth rates of target bacteria and interfering bacteria can satisfy the requirements of GB 4789.28-2013 for nonselective and selective enrichment medium.KEY WORDS:ready-to-use culture medium;sensibility;specificity 1 引 言 目前,全球范围内食品安全问题的社会关注度日益增高,WHO报告表
9、明,全球每年约有180万人死于食源性疾病1。在我国,微生物污染所导致的食品问题是人们关注的热点2,根据 2014 年国家卫生和计划生育委员会办公厅关于第 7 期 高 飞,等:食品检测即用型液体培养基产品的评价研究 2771 2014 年全国食物中毒事件情况的通报显示,微生物性食物中毒事件数量及中毒人数最多,分别占食物中毒事件总数和中毒总人数的 42.5%和 67.7%3。食品行业中,原材料的种植、加工、包装、存储、运输及销售等多个环节均存在微生物污染的可能性4,防控范围大、管控难度大5。因此,食品微生物检测是预防食品中物生物污染的重要手段和必要因素6,如何准确快速地完成检测具有重要意义7。食品
10、快速检测是指包括前处理在内,可以在短时间内取得检测结果的检测8。食品检测中所使用的传统配置型培养基需称量后高温灭菌使用9,而即用型培养基具备操作简单、便于现场检测的特点10,在食品快速检测领域应用前景广泛。本研究通过进行即用型培养基与配制型培养基的平行测试,对即用型缓冲蛋白胨水、即用型 3%氯化钠碱性蛋白胨水、即用型月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤培养基进行质量评价研究。同时,探讨即用型培养基应用于食品快速检测的优点及存在的问题。2 材料与方法 2.1 菌株来源 目标菌株共 45 株,包括沙门氏菌 10 株、阪崎肠杆菌5 株、副溶血性弧菌 15 株、肠杆菌科细菌 15 株;非目标菌株共 5 株,包括粪
11、肠球菌、单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及表皮葡萄球菌,均由中国食品药品检定研究院提供。2.2 仪器与试剂 传统配置型培养基,购自北京陆桥公司;即用型培养基,购自北京君立康公司。MLS-3780 型 高 压 灭 菌 器(日 本 SANYO 公 司);DIGTAL400cc拍击式均质器(美国Interscience公司);EDDY JET1全自动微生物螺旋加样系统(西班牙FIASH AND GO公司)。2.3 实验方法 2.3.1 缓冲蛋白胨水培养基 取沙门氏菌、阪崎肠杆菌及其他细菌的新鲜 TSA 平板培养物,用无菌生理盐水调成 1.0 MCF 菌悬液,并对菌悬液进行 10 倍系列稀
12、释,取浓度约为 1.0102 CFU/mL 的菌悬液 1 mL 加入 225 mL BPW 中作为待测液,置于 36 培养,分别于 0、6 和 24 h 后取 1 mL 培养物进行活菌计数。2.3.2 3%氯化钠碱性蛋白胨水培养基 取副溶血性弧菌和其他非目的菌新鲜 TSA 平板培养物,用无菌生理盐水调成 1.0 MCF 菌悬液,并对菌悬液进行 10 倍系列稀释,取浓度约为 1.0102 CFU/mL 的菌悬液0.5 mL 加入 10 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水中作为待测液,置于 36 培养,分别于 0、6 和 24 h 后取 1 mL 培养物进行活菌计数。2.3.3 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤
13、培养基(lauryl sulfate tryptone water,LST)取肠杆菌和其他非目的菌新鲜 TSA 平板培养物,用无菌生理盐水调成1.0 MCF菌悬液,并对菌悬液进行10倍系列稀释,取浓度约为 1.0102 CFU/mL 的菌悬液 0.5 mL 加入 10 mL 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤中作为待测液,置于 36 培养,分别于 0、6 和 24 h 后取 1 mL 培养物进行活菌计数。2.4 统计分析方法 通过与新鲜配制培养基平行检测对比,结合 GB 4789.28-2013食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求11判断即用型培养菌的增菌效果,用 SPSS 16.
14、0 软件中单因素方差检验程序对培养后细菌浓度差异进行统计学分析。3 结 果 3.1 缓冲蛋白胨水培养基评价结果 对批号 JLKD4A150511、JLKD4A150319 和新鲜配制的缓冲蛋白胨水进行了微生物生长测试。在新鲜配制和 2 个批次即用型缓冲蛋白胨水培养基中,15 株沙门氏菌、5 株阪崎肠杆菌和 5 株其他细菌均呈现良好生长,经单因素方差分析显示,25 株细菌经 6 h 和 24 h 增菌后经不同批次培养基培养后比较,细菌浓度未见显著差异(P0.05)。详细结果见表 1。表 1 不同批次缓冲蛋白胨水中微生物生长结果 Table 1 Microbial growth results o
15、f different batches of buffered peptone water 缓冲蛋白胨水批次 菌株 菌株数量 浓度对数平均值(lgCFU/mL)6 h 24 h 沙门氏菌 10 1.910.11 8.290.10 新配制 阪崎肠杆菌 5 1.780.14 8.400.14 非目标细菌 5 2.970.13 8.200.19 沙门氏菌 10 1.840.09 8.370.12 JLKD4A150511 阪崎肠杆菌 5 1.860.11 8.440.09 非目标细菌 5 2.830.16 8.230.20 沙门氏菌 10 1.850.09 8.350.10 JLKD4A150319
16、 阪崎肠杆菌 5 1.870.14 8.410.13 非目标细菌 5 2.830.14 8.220.17 2772 食品安全质量检测学报 第 7 卷 3.2 3%氯化钠碱性蛋白胨水评价结果 对 批 号JLKG21A150402、JLKG21A150526、JLKG21A15040618 和新鲜配制的 3%氯化钠碱性蛋白胨水进行了微生物生长测试,在新鲜配制和3批次即用型3%氯化钠碱性蛋白胨水培养基中,15 株副溶血弧菌均呈现良好生长,经单因素方差分析显示,经 6 h 和 24 h增菌后,不同批次培养基间比较,副溶血弧菌浓度未见显著差异(P0.05);而非目的菌在4种培养基中经6 h与 24 h增
17、菌后均未见明显生长。结果见表 2。3.3 月桂基硫酸盐胰蛋白胨水培养基评价 对批号JLKG3A150321、JLKG3A150608、JLKG3A150617和新鲜配制的 3%氯化钠碱性蛋白胨水进行了微生物生长测试,结果见表 3。在新鲜配制和三批次即用型月桂基硫酸盐胰蛋白胨水培养基中,15 株肠杆菌科细菌均呈现良好生长,经单因素方差分析显示,经 6 h和 24 h增菌后,不同批次培养基间比较,肠杆菌科细菌浓度未见显著差异(P0.05)。表 2 不同批次 3%氯化钠碱性蛋白胨水中微生物生长结果 Table 2 Microbial growth results of different batch
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