HPLC测定多穗柯中二氢查耳酮含量研究.pdf

FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食 品 科 技2010年 第35卷 第6期收稿日期：2009-08-11*通讯作者基金项目：科技部国家科技基础条件平台项目(2005DKA30430)；怀化市重大专项(200704A)；怀化学院科研项目。作者简介：李胜华(1978)，男，硕士，主要从事生物活性成分的检测与分离工作。Detemination of dihydrocharcone from Lithocarpus polystarch RehdLI Sheng-hua,WU Xian-jin*,NIU You-ya(Department of Life Science,Huaihua Teacher College,Huaihua 418008)Abstract:Objective:To compare the contents of dihydrocharcone in Lithocarpus polystarch Rehd duringdifferent manufacture process,different gathering time,different storing time and different leaf years.The studymay provide information for the utilization of the Lithocarpus polystarch.Method:The concentration ofdihydrocharcone was determined by the HPLC method.Result:The dihydrocharcone content was the highest inAugust by gathering in different seasons.the content was 5.43%.In different store time,the content of the freshleaves was highest,up to 5.38%.the dihydrocharcone content was lower when the raw material was storedlonger and descended average 7.2%annually.The contents of fresh leaves were the highest while the biennialone the lowest.The contents of dihydrocharcone was almost unchanged during different manufacture process.Conclusion:Lithocarpus polystarch can be used as the resource which is rich in dihydrocharcone.Key words:Lithocarpus polystarch Rehd;dihydrocharcone;HPLCHPLC 测定多穗柯中二氢查耳酮含量研究李胜华，伍贤进*，牛友芽(怀化学院生命科学系，怀化418008)摘要：目的：比较不同加工过程，不同时期新生叶和不同叶龄叶中二氢查耳酮的含量，为多穗柯的综合利用提供参考。方法：采用高效液相法进行二氢查耳酮含量测定。结果：8月份采收叶中的二氢查耳酮含量最高，含量达到5.43%，12份仅有4.33%；而不同的储藏时间集叶中以嫩叶含量最高，含量达到5.38%，储藏时间越长，二氢查耳酮含量越低，平均每年下降7.2%；在不同叶龄中以嫩叶中二氢查耳酮含量最高，生长时间越长，二氢查耳酮含量越低，加工过程对二氢查耳酮的含量影响不大。结论：多穗柯的叶可以作为二氢查耳酮的新型甜味剂的来源植物加以利用。关键词：多穗柯；二氢查耳酮；HPLC中图分类号：TS 255.7文献标志码：A文章编号：1005-9989(2010)06-0281-03二氢查耳酮是一类具有苯并色原酮母核结构且分子量较小的化合物，在植物中分布广泛，目前已从菊科、蔷薇科、杜鹃花科、山矾科、百合科等植物中分离得到，但含量较低1。二氢查耳酮是一类非常重要的活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、抗菌以及雌激素样作用2。多穗柯(Lithocarpus polystarch)又名甜茶，是一种药、食两用，兼有茶、糖、药3种功能的植物，食品安全与检测281FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食 品 科 技2010年 第35卷 第6期是一种适应性较强的速生树种。据 全国中草药汇编、中药大辞典 等记载多穗柯能治湿热痢疾，皮肤瘙痒，痈疽恶疮3。民间已有上千年的历史，特别是在降血糖、降血脂及降血压方面有独特的疗效，初步推断其抗氧化成分中含有黄酮类物质4，多穗柯中总黄酮含量达到10%5。多穗柯产地群众自古有采其嫩叶作“甜茶”饮用的习惯，其香气浓郁，色泽鲜艳，回味甘甜持久，是因为其中富含1种天然甜素二氢查耳酮，这种甜味剂在多穗柯叶中含量极高，很有实际利用价值。本文比较了不同加工步骤，不同时期新生叶和不同叶龄叶中二氢查耳酮的含量，为多穗柯的综合利用提供参考。1实验材料1.1材料多穗柯采自怀化芷江野生甜茶厂基地。1.2仪器与试剂AL204电子天平，RE-210旋 转 蒸 发 仪 器，LC-20AT高效液相色谱仪。甲醇：色谱纯，上海试剂二厂；二氢查耳酮：Sigma公司。2方法和结果2.1标准曲线的测定2.1.1色谱条件色谱柱为Nova-pak-C18，流动相：1%的磷酸二氢钠溶液甲醇=4555，流速为1mL/min，柱温为25，检测波长为286 nm。在该色谱条件下待测组分可达有效分离，见图1、图2。2.1.2标准曲线及线性关系考察精确称取标准品二氢查耳酮10 mg，用甲醇溶解并且定容至50mL，准确量取对照品溶液0、1、2、3、4、5、6L注入液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，其线性回归方程及相关系数为：Y=2.29610-8X-0.00376，r=0.9998，在0.0020.008 mg/mL的范围内呈良好的线性关系。2.1.3稳定性实验取样品溶液，间隔2 h测定1次，共测定24 h，结果二氢查耳酮的峰面积RSD为0.5%(n=10)，表明供试溶液室温下保存24 h基本稳定。2.1.4精密度实验精确量取二氢查耳酮对照品溶液20 L，连续测定6次，测定二氢查耳酮峰面积的RSD为0.72%。2.1.5重复性实验称取供试样品5份，按照“样品溶液的制备”项操作，测得二氢查耳酮的含量平均为8.6%，RSD为0.95%。2.1.6回收率实验取多穗柯的甲醇提取液(二氢查耳酮的含量为40.2 g/mL)2 mL，置于25 mL的容量瓶中，共6份，再分别加入二氢查耳酮对照品溶液(50.3 g/mL)0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，用60%的甲醇稀释至刻度，在上述的色谱条件下测定峰面积，计算回收率。结果表明，二氢查耳酮的平均回收率为99.42%，RSD=0.97%(n=6)。2.2样品二氢查耳酮的含量测定2.2.1不同采收时间的多穗柯叶中二氢查耳酮含量的测定分别采收3、4、6、8、9、10月份的嫩叶，烘干粉碎过100目筛，按照样品液的制备方法制取样品液，按照标准曲线制备下的色谱条件进行二氢查耳酮含量的测定。结果见表1。由表1可知：多穗柯叶中二氢查耳酮的含量在营养生长阶段(3月份到8月中旬)一直上升，8月份达到最高值，约为5.43%，后期生长过程中二氢查耳酮的含量一直降低，12月份的含量约为4.33%。图1二氢查耳酮标准品的HPLC图101520053002001000mV19.27916.41810.31114.8808.7407.2196.3215.1944.1382.9943.58711.804图2多穗柯提取液的HPLC图0.02.55.07.510.012.515.020151050mV表1不同采收时期对二氢查耳酮的影响采集时间二氢查耳酮含量/%3月4.864月5.046月5.378月5.439月4.8612月4.33食品安全与检测282FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食 品 科 技2010年 第35卷 第6期2.2.2不同储藏时间的多穗柯叶中二氢查耳酮含量的测定取同一批次的多穗柯叶分别自然储藏0、1、6、12、18、24个月，样品叶烘干粉碎过100目筛，按照样品液的制备方法制取样品液，按照标准曲线制备下的色谱条件进行二氢查耳酮含量的测定。结果见表2。由表2可知：多穗柯鲜叶中二氢查耳酮含量最高达5.38%，随着存放时间的延长，二氢查耳酮含量逐渐降低，存放一个月为5.16%，存放两年的多穗柯叶中二氢查耳酮降至3.76%。2.2.3不同叶龄的多穗柯叶中二氢查耳酮含量的测定分别采收生长1、3、6、9、12、24个月的多穗柯叶，烘干粉碎过100目筛，按照样品液的制备方法制取样品液，按照标准曲线制备下的色谱条件进行二氢查耳酮含量的测定。结果见表3。由表3可知：多穗柯嫩叶中二氢查耳酮含量较一年生和两年生老叶中的含量都高，而且随着生长时间的延长，二氢查耳酮含量随之降低。嫩叶中二氢查耳酮含量为5.63%，一年生老叶为4.12%，两年生老叶为3.24%。2.2.4不同加工过程中二氢查耳酮含量的测定从表4可以看出，在加工过程中，二氢查耳酮的含量变化比较小，也就是说，多穗柯在加工成茶叶后二氢查耳酮的含量基本不变。3讨论二氢查耳酮大量存在多穗柯的叶中，不同的采集时间证明多穗柯叶中二氢查耳酮含量最高的时期是810月份，而不同的储藏时间对二氢查耳酮的含量具有很大的影响，储藏时间越长，二氢查耳酮含量越低，平均每年下降7.2%，不同的叶龄中，以嫩叶中的含量最高，而两年生的叶中二氢查耳酮的含量最低。另外多穗柯在加工成茶叶的过程中，二氢查耳酮的含量基本不变，可以依然维持其较高的甜味。参考文献：1Ehrenkranz J,Lew is N,Kahn C,et al.Phlorizin:a reviewJ.Diabetes Metab Res Rev,2005,21:31-382Hu Y Q,Liu D L,Zhou Y C.Bioactivities of natural dihydrochalconoidsJ.World Phytoned,2002,17(6):241-2443 全国中草药汇编编写组:全国中草药汇编(下册)(第一版)M.北京:人民卫生出版社,1987:2564韦宝伟,李茂,李伟芳.多穗柯总黄酮的降糖研究J.内科.2008,3(4):510-5125李胜华,伍贤进,郁建平,等.多穗柯总黄酮提取工艺及其含量动态变化研究J.食品科学,2008,29(8):139-141表2不同自然存放时间对二氢查耳酮的影响存放时间(月)二氢查耳酮含量/%05.3815.1664.78124.45184.23243.76表3不同叶龄的叶中二氢查耳酮的含量不同叶龄的叶/月二氢查耳酮含量/%15.6335.1264.8694.53124.12243.24表4不同加工过程中二氢查耳酮的含量加工过程二氢查耳酮含量/%摊放5.19杀青5.11摊放5.01揉捻4.98摊放4.87烘干4.81食品安全与检测食品科技论坛http:/ 迎 垂 询283