高效毛细管电泳的分离模式.doc

1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electroporesis，CZE）分离原理：毛细管区带电泳出称为自由溶液毛细管电泳，是毛细管电泳是最简单的一种形式。其分离机理是基于各被物质的净电荷与质量之间比值的差异，不同离子按照各自表面电荷密度的差异，以不同的速度在中解质中移动而导致分离，它要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度，是目前应用最广的一种分离模式。适用于蛋白质、氨基酸、多肽类和离子的分析。毛细管中除电解液外，无需填充任何物质，操作容易，自动化程度高。2 毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis，CGE）分离原理：凝胶电泳是凝胶移到毛细管中用为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态的分散的体系。具有多孔性，类似于分子筛的作用，被分离物在通过装入毛细管内的凝胶力，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，适用于生物大分子的分析，可纯粹按分子体种大小进行分离（SDS-PAGE），以决定蛋白质的分子量，可以识别一个碱基差异的寡核苷酸，可分离DNA片段，如微卫星（STR）分析，可改变凝胶的浓度不控制分离的范围，如PCR产物的分析。3 胶束电动毛细管色谱（Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MECC）分离原理：是电泳技术和色谱技术的交叉，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时，这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成球体（胶束）。目前以十二烷基磺酸钠（SDS）胶束用的最为普遍，MECC存在二个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间，和CZE一增，缓冲液在管壁处形成正电，产生强烈的向负极方向移动的最渗流，面SDS胶束由于外壳带负电性，具有向正极迁移的倾向，一般电渗流的速度胶束向正极迁移速度，迫使胶束最终以较低的速度向负极移动。中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同。疏水性强的作用力大，保留的时间长。MECC是目前惟一既能分离中性离子又能分离带电组分的HPCE模式。4 等电聚焦电泳（Isoelectric Focusing，IEF）分离原理：两性电解质在分离介质中的迁移，在毛细管内形成pH梯度，各种具有不同等电点的多肽和蛋白质按照这一梯度迁移到其不同的等电位置并停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，利用等电点的细微差异进行分离，将不同的蛋白质聚焦在不同的位置上后，阴极的缓冲液换成盐类，再加上高压，使末端引起梯度降低，让组分一个个通过检测器可求得精确的等电点。5 等速聚焦电泳（Isotachophoresis，ITP）分离原理：在被分离组分与电解质一起向前移动的同时进行聚焦分离的电泳方法，与IEF一样，ITP在毛细管中的电渗流为零，缓冲系统由前后两种不同淌度的电解质组成，分离时毛细管内首先导入尾随电解质（淌度低于被分离组分）。在强电场的作用下，各被分离组分在两种电解质之间的空隙是发生聚焦分离。选择处理或未处理硅交毛细管均右，电渗流可用0.25%羟脯氨酰甲本纤维抑制.前导电解质:5nM磷酸,尾随电解质:缬氨酸,在分离开始时,电流会由于高淌度的电解质完全充满毛细管而迅速增大,进入分离过程时,电流会随着低淌度的电解质进入毛细管而下降.6 毛细管电色谱(capillary electrochromatography,CEC)分离原理:是将高效液相色谱众多的固定相填冲到毛细管中,以样品与固定相间的相互作用为分离机制,以电流流相为驱动力的色谱过程.7 亲和毛细管电泳(affinity capillary electrkphoresis,ACE)分离原理:在电泳过程中具有生物专一性亲和力,即受体(recepror)和配体(ligand)相互间发生的特异亲和作用.形成了受体的配体的复合物.对受体和配体在发生亲和作用前后的电泳图谱变化,可获得有关受体和配体亲和力大小结构变化作用产物等方面的信息.8 电动色谱(electrokinetic chromatography,EKC)分离原理:是根据电动现象命名的一种电泳模式,涉及电渗,电泳和色谱三方面的原理,主要用于手性化合物的分离.9 非水相毛细管电泳(non-aqueous capillary electrphoresis,NACE)分离原理:是分析物在有机溶剂中进行电泳分离的一种模式,使用非水相介质可增加方法的选择性,并有利于非水溶性物质的分离.