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扬州市外环境霍乱弧菌污染状况调查方案

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2020年4月19日
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扬州市外环境霍乱弧菌污染状况调查方案
一、背景
当前，尽管霍乱的流行规律尚不十分明确。但一般情况下，经水传播是霍乱流行最重要的传播方式已是毋容置疑的了。沿海水域、河口和内陆河流、湖泊等自然水体是霍乱弧菌的自然生境，水体中以及海（水）产品中所携带的产毒霍乱弧菌在人群霍乱的发生和传播发挥了重要作用。为进一步配合省疾控中心加强对我省的霍乱监测工作，及时发现病例、识别暴发、确定传染源，预测疫情及科学制定防制对策，特制订本方案。
二、目的
1．了解霍乱弧菌在我市外环境中存在和动态变化情况，来及时发现病例、识别暴发，为制定防治策略和措施提供科学依据。
2、掌握我市霍乱菌株的型别、分布、毒力、耐药性变化情况。
三、调查内容及方法
（一）外环境感染状况调查
1、外环境水体调查
环境水体包括淡水和海水养殖场、水产品码头、医院污水排放口、下水道排放口、肉联加工的出厂水、与人群生活关系密切的河流、池塘、湖泊、水井以及乡镇自来水厂源水等。采样点的选择应结合流行病学调查等资料确定，采样时应选择在水流平稳或静止处吸取，采样时间一般在清晨时，水体未受人群活动等因素影响。每个采样点选定1个取水位置（上、中、下），每个取水位置采集不少于2份水样做为平行检测。
水体标本采样时，现场收集每份水体样品的pH、水温、采样点环境温度三项基础指标。pH测定用范围在5.5-10.0的pH试纸，水温和环境温度能够普通酒精温度计测定。
2、海（水）产品样本的采集
1）采样点的规定
所采集的样本应包括以下采样点的海（水）产品及其相关样品：
① 养殖场或捕捞点的海（水）产品；
② 批发市场销售的海（水）产品；
③ 餐厅暂养的海（水）产品；
④ 餐厅销售的海（水）产品冷菜等。
2）采样种类
①各采样点所采集的样本应包括甲鱼、鱼类、贝类(螺、蚌等)、蛙类、甲壳类动物（虾、蟹等）;
②采集的样本尽可能包括一定量的进口海（水）产品；
③采集的样本应尽量采自来源于不同产地、批发市场。
3）样品采集、运送及前处理方法
海（水）产品的采样采用肛门、鱼鳃、体表涂抹法为主，并结合整体或部分采集法开展。
整体或部分采集法：一般选取活的或新鲜的水生动物为采集对象，有时也应考虑冰冻的水生动物，以无菌操作采集合适的部位，如鳃部和/或肠内容物等，置采样瓶（管）或食品采样袋密封，在常温下送检。有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处理。样品增菌前进行如下处理：
1）对于原条鱼类样品采集鳃部和/或肠内容物以无菌操作剪碎后，置碱性胨水培养；2）贝壳、甲壳类样品，如为细小动物，则将原标本以剪或锤子打碎后，取25-50克左右，置碱性胨水培养。样品体积与碱性蛋白胨水体积比例为1：5至1：10。
体表及肛门涂抹法：要求在进行整体或部分采集法时同步开展。以无菌棉签涂抹5只（条）以上的某类水生动物体表、肛门、鳃，置碱性蛋白胨水送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。
本次调查整体与涂抹样本量之比为1：1。
3、熟食品监测
对点内饮食店、餐馆内的熟食品进行采样监测。
4、样品检测[分离培养方法与程序可参考《霍乱防治手册（第五版）》
5、菌株上送
所有检出的霍乱菌株，均经纯培养后接种于0.7%的半固体培养基，置37℃培养18-24h，按生物安全要求于分离后7日内直接上送省疾控中心，并附菌株来源信息表（附表6）。
6、信息收集与报告
将水体、水产品和熟食品样本分离结果、包括菌株检测结果整理到“外环境水体霍乱弧菌分离记录（附表2”）、“海（水）产品监测霍乱弧菌分离记录（见附表3）”和“熟食品监测霍乱弧菌分离记录（附表4）”以及附表5、6中，录入统一数据库，7月10日前将调查结果报至扬州市疾病预防控制中心急传科。
联系电话：87343732 87313724
电子信箱：
（二）海（水）产品中霍乱弧菌分子流行病学分析
1、方法：
经过霍乱菌株毒力基因检测及PFGE分子分型进行分析比较。
2、研究对象：
（1） 所有从海（水）产品中分离的霍乱菌株；
（2） 同期本地区霍乱病例和带菌者中分离的菌株；
3、实验室检测
（1）霍乱毒素基因检测
（2）菌株脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析
四、工作进度安排
3月底完成培训等准备工作；
4 - 7月进行调查；
7月10日前，完成全部调查工作，并将相关报表和总结报告上报市疾控中心。
五、组织管理
由市疾控中心根据省疾控中心制定的调查方案，结合本市实际情况确定本市调查方案，并负责本市调查工作的具体组织管理实施、培训、检测等工作。
省疾控中心将提供一定调查经费补助，并负责对方案有关的技术问题进行指导和培训等。
六、附件
附表1 外环境霍乱弧菌污染状况调查工作任务分配表
附表2. 外环境水体监测霍乱弧菌分离记录
附表3. 海（水）产品监测霍乱弧菌分离记录
附表4. 熟食品监测霍乱弧菌分离记录
附表5 外环境霍乱弧菌监测统计汇总表
附表6 霍乱菌株登记表

附表1 扬州市外环境霍乱弧菌污染状况调查工作任务分配
地区
合计
水体
海（水）产品
食品
甲鱼
甲壳类
贝类
蛙类
鱼类
扬州市
100
10
20
20
20
10
10
10
广陵区
50
5
10
10
10
5
5
5
江都市
50
5
10
10
10
5
5
5

附表2 外环境水体监测霍乱弧菌分离记录
样品编号
采集时间
采集地点
样品种类a
分离结果(+/-)
血清群/生物型b
噬菌体-生物分型
产毒
(+/-)
水样pH值
采集位置水温
采集当天
最高气温/最低气温
备注

a. 样品种类包括：沿海水、沿海养殖场水、江河水、淡水养殖场水、池塘水以及其它准确描述名称。
b. 不属于O1群和O139群的霍乱弧菌菌株，未能确定血清群时按非O1/非O139群记录。
填表人： 填表日期： 年 月 日 报告单位：

附表3. 海（水）产品监测霍乱弧菌分离记录
样品编号
采集时间
采集地点
样品种类a
1.整体/2。涂抹
分离结果
(+/-)
血清群/生物型b
噬菌体-生物分型
产毒
(+/-)
备注

a. 准确描述海产品、淡水产品的名称。
b. 不属于O1群和O139群的霍乱弧菌菌株，未能确定血清群时按非O1/非O139群记录。
填表人： 填表日期： 年 月 日 报告单位：

附表4 熟食品监测霍乱弧菌分离记录

样品编号
采集时间
采集地点
样品种类a
分离结果
(+/-)
血清群/生物型b
噬菌体-生物分型
产毒
(+/-)
备注

a. 准确描述熟食品的名称。
b. 不属于O1群和O139群的霍乱弧菌菌株，未能确定血清群时按非O1/非O139群记录。
填表人： 填表日期： 年 月 日 报告单位：

附表6. 霍乱菌株登记表
菌株
编号
菌株来源
（病人、带菌者、水体、食品）
姓
名
性
别
年
龄
病人发病地址 （环境样品写采样地址）
发病日期
采样日期
临床
诊断
菌
型
初次检出单位
初次检出者
菌株上送日期
上送负责人
菌株接收单位
菌株接收人
备注

填表人： 填表日期： 年 月 日 报告单位：
附表5. 外环境霍乱弧菌监测统计汇总表
检测 内 容
采样
份数
阳性数
O1群古典型
El Tor小川型
El Tor稻叶型
El Tor彦岛型
O139群
合计
水

体
沿海水域

江河水系

池塘水体

污水
生活水

医院等排污水

养殖水

其它

水
产
品
甲鱼

甲壳类

贝壳类

鱼类

牛蛙

其它

食品

合计

备 注

填表人： 填表日期： 年 月 日 报告单位：

名词解释：
1. 自然生境：生境是一个比较复杂的概念.生境主要由以下几个因数组成: A.食物基地 B.隐蔽地 C.水源地 D.交配繁殖地。除此之外,在试验研究中还有许多其它的因数,这就要求我们要更加细致的观察.
生境一词多用于类称，概括地指某一类群的生物经常生活的区域类型，并不注重区域的具体地理位置；但也能够用于特称,具体指某一个体、种群或群落的生活场所，强调现实生态环境。一般描述植物的生境常着眼于环境的非生物因子(如气候、土壤条件等)，描述动物的生境则多侧重于植被类型。
美国E.P.奥德姆曾将生境比作生物的"住址"，而将生态位比作生物的"职业"。R.H.惠特克则指出，生境指物种能够生存的环境范围，侧重于生物分布；而生态位则指物种在群落中的作用，侧重于生物功能。
自然环境就是指人类生存和发展所依赖的各种自然条件的总和，有别于自然生境。
2. pH是法语“Pouvoir Hydrogène”一词的缩写，亦称氢离子活度指数，是溶液中氢离子活度的一种标度，也就是一般意义上溶液酸碱程度的衡量标准。pH值越趋向于0表示溶液酸性越强，反之，越趋向于14表示溶液碱性越强，在常温下，pH=7的溶液为中性溶液。