CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用.docx
《CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用.docx(11页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用 作者:宋鹏,刘陶,杨浩,韩锋产,陈五岭【关键词】 人巨细胞病毒 Development and primary application of immunogold fastdetection kit for human cytomegalovirus 【Abstract】 AIM: To develop a cheap and easytouse kit based on dot immunogold filtration assay for analysis of antibody of the human cytomlegalovirus i
2、n serum. METHODS: With prepared GICA apparatus and colloidal gold which were coupled with SPA, the goldSPA conjugate reacted with human IgG in serum and migrated along the nitrocellose strip on which the branched multiple antigenic peptide of human cytomlegalovirus was immobilized. If the serum cont
3、ained antiHCMV IgG, there would be a red line on the strip where the branched multiple antigenic peptide of human cytomlegalovirus were immobilized. RESULTS: A total of 120 sera were detected for antiHCMV IgG by GICA and ELISA. The sensitivity and specificity of GICA were % and %. The corresponding
4、rate of both tests was %. CONCLUSION: GICA is a sensitive, specific, simple and rapid assay for detecting antiHCMVIgG in sera.【Keywords】 Human cytomegalovirus;Branched multiple antigenic peptide; golol colloid; enzymelinked immunosorbent assay【摘要】 目的: 开发一种低成本、简单易用的基于免疫金渗滤法的试剂盒,以用于检测分析血清中的巨细胞病毒抗体. 方法
5、: 将用人工合成的人巨细胞病毒(HCMV)抗原表位的线性肽和分支多抗原肽分别划线固定于硝酸素纤维膜上,制成免疫层析检测试纸条,血清中IgG与测试条上金标记物结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色带条并用GICA和ELISA试剂盒对比检测120份血清标本中抗HCMV抗体. 结果: 分支多抗原肽制成的免疫层析检测试纸条的灵敏度为%,特异度为%,两法符合率为%. 结论: GICA检测血清中的抗HCMV抗体特异性强,灵敏度高,简便快速,有广泛应用价值.【关键词】 人巨细胞病毒;分支多抗原肽;胶体金;酶联免疫吸附测定0引言人巨细胞病毒感染的普遍性和严重性已引起医学界的高度重视1
6、. 但HCMV感染时,临床症状变化很大,可随患者年龄、机体状况、感染途径不同而异. 现今实验室检测手段包括ELISA检测患者血清中IgG和IgM,套式PCR技术检测血清HCMV的DNA,RTPCR检测HCMV的mRNA以及病毒培养等,但由于以上方法耗时耗力2,且检测费用较高,不适合在基层临床医疗机构的普及性筛查. 为此,我们采用人工合成的包含HCMV抗原表位的线形多肽以及多抗原肽,采取胶体金免疫层析法3,对HCMV进行快速检测.1材料和方法材料制备型HPLC;核酸蛋白检测仪;激光解析质谱;台式冻干机; 固相萃取小柱;芴甲氧羰基保护的氨基酸; 1氧3双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼、1羟基苯并三氮
7、唑;线性多聚赖氨酸、DIEA、三氟乙酸; G10, G25凝胶;乙腈;HCMV ELISA对照试剂盒;氯金酸;葡萄球菌A蛋白(SPA);点膜器. HCMV质控血清为第四军医大学全军基因诊断技术研究所提供,血清标本从第四军医大学西京医院收集.方法抗原表位设计参照文献4,根据KyteDoolittle亲水性方案预测B细胞表位结果设计合成了HCMVgp55抗原表位序列VTSGSTKD .线性肽的合成将PACPEGPS树脂g用二甲基甲酰胺浸泡30 min,进行活化. 采用对称酸酐法将已经活化的树脂进行第一个氨基酸的连接. 称取待连接的氨基酸 195 mg,加入 mL二氯甲烷DCM和3滴DMF使之溶解,
8、加入1mol/L二环己基碳化二亚胺/N甲基吡咯烷酮 275 mL,磁力搅拌,室温下反应15 min,过滤除去沉淀,蒸发掉过滤液中的溶剂,得到对称酐. 将对称酐溶于最少量的DMF中,加入到活化的树脂中,摇动1 min,然后加入 mol/L 4二甲氨基吡啶(DMAP)/DMF 460 L,摇动反应90 min,吹去反应液,用10 mL DMF洗涤3次,吹干. 其余7个氨基酸的连接采用原位活化法,将连接有第一个氨基酸的树脂放入反应瓶中,加入300 g/L哌啶/DMF溶液50 mL反应15 min,以脱去芴甲氧羰基保护基团. 取 mmol的保护氨基酸,用1 mol/L DIEA/DMF 5 mL溶解,
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- CMV 抗体 免疫 快速 检测 试剂盒 开发 初步 应用
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【快乐****生活】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【快乐****生活】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。