冠心平片鉴别及含量测定方法研究.docx

冠心平片鉴别及含量测定方法研究【摘要】 目的建立冠心平片的鉴别及含量测定方法。方法采用薄层色谱法对制剂中的当归、瓜蒌皮、三七进行鉴别，并用紫外分光光度法测定制剂中总多糖含量。结果薄层鉴别色谱特征斑点明显。所测定的3批样品中，多糖含量最高是%，最低是%，平均为%；平均加样回收率是%，RSD为%。结论 用薄层色谱法对该制剂中的当归、瓜蒌皮、三七进行鉴别及用紫外分光光度法测定总多糖的方法简便准确、专属性强，可作为冠心平片的质量控制方法之一。【关键词】 冠心平片； 多糖； 薄层鉴别； 紫外分光光度法Abstract：ObjectiveTo establish quality standards for Guanxinping Tablet. MethodsRadix Angelicae Sinensis,Pericarpium Trichosanthis and Radix Notoginseng were identified by TLC, and the content of polysaccharides was determined by UVspectro. photometry. ResultsThe TLC spots developed were quite clear. The hightest content was % , the lowest content was %, the average content of polysaccharides was %. The average recouery of polysaccharides was %,with RSD of %, respectively . ConclusionThe method is convenient, reliable. It is one of the ways that can be used for the quality control of Guanxinping tablet.Key words：Guanxinping tablet； Polysaccharides； TLC； UVspectrophotometry 冠心平片由黄精、当归、瓜蒌皮、三七等中药组成，具有补气益阴养血、活血化淤行气、疏经通脉止痛功能。临床上主要用于气虚阴伤血亏、痰气淤血阻滞、气短乏力、心悸等症，以及心律失常，动脉粥样硬化，高血脂等。为确保制剂质量，笔者对该制剂进行了鉴别及含量测定方法研究。现将结果报告如下。 1 仪器与试药仪器WD9413A凝胶成像分析仪：北京六一仪器厂产品； 电子分析天平，BP211D 奥豪斯公司 ； TU1800S紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司产品；939薄层铺板机，重庆贝可得仪器技术公司产品。材料及试药硅胶G 、 硅胶GF254，青岛南洋化工集团公司产品；硅胶G板 、硅胶GF254板，自制； 冠心平片，江苏省中医医院制剂部生产，批号020812，041111，050522；无水葡萄糖，上海化学试剂采购供应站试剂厂生产；所用试剂均为分析纯。2 方法与结果薄层色谱鉴别三七TLC 方法取本品10片，研细，加乙醇50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 ml溶解，用正丁醇40 ml，分2次萃取，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，20 ml/次，弃氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液；再取三七对照药材 g，同法制得三七对照药材溶液，作为对照品溶液；另取不含三七药材制成的阴性样品10片，同法处理，制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各10 l，分别点于同一块硅胶G板上，以三氯甲烷醋酸乙酯甲醇水10 以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 加热斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点。见图1 。当归TLC 方法取本品20片，研细，加1%的碳酸钠溶液50 ml，超声提取30 min，离心，取上清液，加盐酸调pH至1 2，用乙醚60 ml，分3次萃取，合并乙醚液，用水洗3次，20 ml/次，弃水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；再取当归对照药材，同法制成对照品溶液。另取不含当归药材制成的阴性样品20片，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5 l，分别点于同一块硅胶G板上，以苯乙酸乙酯甲酸为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无此斑点。见图2 。瓜蒌皮TLC 方法取本品10片，研细，加乙醇50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20 ml溶解，用乙醚60 ml，分3次萃取，20 ml/次。合并乙醚液，用水洗3次，20 ml/次，弃水液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；再取瓜蒌皮对照药材2 g，用同样的方法制成对照品溶液；另取不含瓜蒌皮药材制成的阴性样品10片，同法处理，制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5 10 l，分别点于同一块硅胶G板上，以石油醚醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸试液，在105 加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点。见图3 。含量测定黄精作为一种具有补中益气、益肾填精、滋阴润肺、生津补脾功效的传统中药，对治疗心血管疾病、结核病、慢性肝炎以及在抗菌、解毒、抗疲劳、抗衰老等方面均有良好作用,其有效成分主要为黄精多糖。在本方中，黄精以补心气、润心肺之功选为君药，所以选择黄精中有效成分黄精多糖为主要目标1测定制剂中总多糖的含量。照分光光度法测定总多糖含量2。对照品溶液的制备精密称取105 干燥至恒重的葡萄糖对照品 mg，置100 ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定波长的选择精密吸取对照品溶液 ml，置10 ml 具塞刻度试管中，加水至 ml 摇匀，在冰水浴中缓缓滴加%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10 min ，取出，立即置冰水浴中冷却10 min ，取出，以相应试剂为空白，在400 700 nm波长范围内扫描，绘制吸收光谱，结果表明，葡萄糖在528 nm处有最大吸收。标准曲线的制备精密量取对照品溶液， ，ml分别置10 ml 具塞刻度试管中，各加水至 ml 摇匀，在冰水浴中缓缓滴加%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10 min ，取出，立即置冰水浴中冷却10 min ，取出，以相应试剂为空白。照紫外-分光光度法，在528 nm 波长处测得吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。见图4。稳定性实验精密吸取对照品溶液 ml，置10 ml量瓶中，按标准曲线项下操作，分别于配制后0，10，20，30，40 min测定吸收度。结果表明在40 min内吸收度基本保持不变，最大吸收波长也无变化。精密度实验精密吸取对照品溶液 ml，共6份，分别置10 ml量瓶中，按标准曲线项下操作测定吸收度，RSD为%。加样回收率实验取已知含量的成品2片，研细，精密称定，加80%的乙醇100 ml，加热回流1 h，滤过，滤渣用80%的乙醇洗涤3次后，再精密加入105 干燥至恒重的葡萄糖对照品后，加水100 ml回流提取1 h，滤过，滤液置200 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取此液 ml，按“标准曲线的制备”项下“各加水至 ml 摇匀，在冰水浴中缓缓滴加%蒽酮-硫酸溶液至10 ml 刻度”起操作，依法测得吸光度。结果见表1。表1 回收率实验结果样品的测定取本品4片，研细，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 ml ，置水浴中回流1 h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，10 ml/次，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 ml，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，10 ml/次，合并滤液及洗液，放冷，转移至250 ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取 ml, 置10 ml 具塞干燥试管中，按“标准曲线的制备”项下“各加水至 ml 摇匀，在冰水浴中缓缓滴加%蒽酮-硫酸溶液至10 ml 刻度”起操作，依法测得吸光度，计算样品含量。结果见表2。表2 冠心平多糖含量测定结果3 讨论采用TLC法对当归、三七、瓜蒌皮进行薄层鉴别，以药材对照，具有快速简便、重复性好、特异性高等优点。在进行当归的鉴别时，成品用加80%的乙醇回流水浴提取，过滤，加稀盐酸调pH至12，用乙醚萃取3次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 ml，使溶解作为供试品溶液，以苯-甲醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视，供试品色谱与对照品色谱分离不佳。在对三七鉴别时，先按中国药典的方法用氯仿甲醇水10 以下放置的下层溶液为展开剂，但在配制时没有分层现象，样品分离不清楚，后改以氯仿醋酸乙酯甲醇甲酸为展开剂，以10%的硫酸乙醇为显色剂，斑点显色也不清晰，分离不好。最后用三氯甲烷醋酸乙酯甲醇水10 以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 加热斑点显色清晰，分离效果好。在冠心平片组方中，黄精为主药，黄精多糖是其有效成分之一，参考中国药典黄精药材项下采用比色法来测定黄精多糖的含量，具有简便、准确、重现性好，可作为冠心平片的定量检测方法。但当归、三七、瓜蒌皮所含多糖亦是有效成分，按样品工艺制备缺黄精的阴性对照品，在 528 nm处也有吸收。所以用分光光度法测其中总多糖的含量。 含量指标的确定：按3批样品测定结果分析，含量变化幅度不大，含量最高为%，最低为%，平均为%，考虑到目前药材来源及质量不稳定等因素较多，暂取均数的2/3作为低限，即成品中多糖含量低限为%。 加样回收率中，由于对照品葡萄糖能溶解于80%乙醇，所以在提取样品的时候，是用80%的乙醇提取之后，再将葡萄糖加至处理后的样品中，然后进行回收率实验。在进行回收率实验中，RSD = %，误差较大。其原因是该方法的稳定时间较短，加入蒽酮显色剂后，仅在40 min内稳定，蒽酮遇光易分解，操作时应该在加入蒽酮后，迅速测定。【参考文献】 1庞玉新，赵 致，袁 媛. 黄精的化学成分与药理作用J.山地农业生物学报，2003，22：547. 2国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：215，附录VIB.