基因工程试题doc.doc
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1、基因工程试题【实用文档】doc文档可直接使用可编辑,欢迎下载基因工程试题A一、名词解释(每题2分,共0分)、转染:、质粒不亲和性:、cDNA 文库:4、RAC:5、基因工程:、RTPC7、插入失活:、S- 序列:、穿梭质粒载体:1、多克隆位点:二、选择题(每题1分,共15分)1( )基因工程操作的三大基本元件是:(I供体I 受体 II 载体 IV 抗体V 配体)AI + +I + II VC II + I + ID IIIV + III + I + V( )基因工程的单元操作顺序是A 增,转,检,切,接B 切,接,转,增,检C 接,转,增,检,切 检,切,接,增,转E 切,接,增,转,检3(
2、)生物工程的上游技术是 基因工程及分离工程基因工程及发酵工程C 基因工程及酶工程基因工程及细胞工程E基因工程及蛋白质工程4( )下列对逆转录酶描述正确的是: 依赖于NA的NA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶B 依赖于cDN的NA聚合酶或称为cDNA指导的NA聚合酶C 依赖于N的DA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶 依赖于RNA的NA聚合酶或称为rNA指导的RA聚合酶( )下列对限制性内切酶描述正确的是限制性内切酶可识别任一的DNA序列B 使用限制性内切酶时,有时可出现星活性 限制性内切酶可识别碱基数不超过5个D限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端6 ( )4DNA 连接酶是通过形成
3、磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起,其底物的关键基团是A 2 OH 和 5 -和 3PC 3 OH 和2 P 3 -OH 和 5 -PE 5 和 3 -7( )下列有关连接反应的叙述,错误的是 连接反应的最佳温度为11 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 0C连接反应缓冲体系的 AT 浓度不能高于 1mMD 连接酶通常应过量 -5 倍E DTT 在反应中可加也可不加( )下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?A质粒 B黏粒C酵母人工染色体(YAC) D噬菌体9( )载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞I 为外源基因提供复制能力 II 为外源基因提供整合能力) A B IC I
4、 +III I+IIIE I +III10( )考斯质粒(comd)是一种 A 天然质粒载体 由入-DA的 cos 区与一质粒重组而成的载体C 能裂解受体细胞的烈性载体 具有溶原性质的载体 能在受体细胞内复制并包装的载体1( )下列有关基因的描述,错误的是 A 蛋白质是基因表达唯一的产物B 基因是DN链上具有编码功能的片段 基因也可以是RND基因突变不一定导致其表达产物改变结构2( )关于NA的最正确的提法是: 同mRNA互补的单链DA 同mRNA互补的双链NA 以mRNA为模板合成的双链DNA 以上都正确1( )某一重组 NA (6。2 b ) 的载体部分有两个 SaI 酶切位点。用 maI
5、 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子,其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的 SaI酶切位点共有 A5 个4个C 3 个D 个14( ) 同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是: AOC DNASC DNPLN BC DNAL DNAOC DACLNAOC DNAS DN D S DN DALDNA( ) cDNA法获得目的基因的优点是A 成功率高 不含内含子C操作简便D 表达产物可以分泌 能纠正密码子的偏爱性三、简答题(每题5分,共5分)1、什么是包涵体?2、PCR反应体系包括哪些内容?基本反应过程是什么?3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响?、作
6、为基因工程载体必须具备的基本条件是什么?5、基因工程诞生的理论基础是什么?四、论述题(每题10分,共40分)1简述载体构建的一般过程2大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么?3如何有效地提高外源基因的表达效率?试述ACE技术原理和方法基因工程试题标准答案及评分标准A一、选择题(每题1分,共15分)1、A2、A 3、 4、A 5、B 6、D7、 8、C 9、 E 1、B、A 12、C 3、D 4、 15、B二、名词解释(每题2分,共0分)1、转染:专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体A分子的生命过程。2、质粒不亲和性:在没有选择压力的情况下,两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共
7、存的现象.3、cNA文库:是指某生物某一发育时期所转录形成的cDA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。4、RACE:是一种通过PCR进行DN末端快速克隆的技术,是以mRNA为模板反转录成cDN第一链后用CR技术扩增出某个特异位点到3,或5,端之间未知序列的方法。5、基因工程:在分子水平上的进行的遗传操作,指将一种或多种微生物的基因或基因组提取出来,或人工合成基因,按着人们的愿望,进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。、RT-PCR:先用逆转录酶作用于mRNA,以寡聚T为引物合成cDNA第一链,然后用已知一对引物,扩增嵌合分子
8、,这种方法称为逆转录PR7、sert iacton:即插入失活,基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点,在该位点用相应的限制性内切酶处理,并将外源DNA片段插入该位点,则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框,往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达,或即使翻译表达,形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质,这一现象称为插入失活。8、SD序列:在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同1S核糖体RNA 3,末端碱基互补的序列,该序列最初由hie 、Dagaro发现,故后来命名为ShineDalgarno 序列,简称-D序列。9、穿梭质粒
9、载体:指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记,因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。0、C:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。三、简答题(共5分,每题5分)1、什么是包涵体?重组蛋白在胞内表达时,常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在,这种晶状体即包涵体。包涵体的形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象,这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合,而不是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白。2、PR反应体系包括哪些内容?基本反应过程是什么?PCR反应体系所要求的条件: a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的NA引物(约20个碱
10、基左右)。、具有热稳定性的酶如:TaDNA聚合酶。c、dNTP。d、作为模板的目的DA序列, 无菌水,F,缓冲液PR反应体系的基本反应过程:预变性、变性、退火、延伸、复延伸。3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响?酶的纯度。D样品的纯度。DNA的甲基化程度。酶切反应的温度与时间。NA分子的构型。限制性核酸内切酶的反应缓冲液。4、作为基因工程载体必须具备的基本条件是什么?能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制具有合适的限制内切酶位点具有合适的选择标记基因5、基因工程诞生的理论基础是什么?是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现:证实了DA是遗传物质揭示了DN分子
11、的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明:限制核酸内切酶的发现与DNA切割DN连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用四、问答题(每题10分,共40分)简述载体构建的一般过程A 目的基因分析()OR 分析(2)酶切位点分析B载体选择与分析(1)多克隆位点分析(2)抗性标记分析(3)启动子与其他筛选标记分析C连接体系与连接时间确定2大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么?优点:大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉,基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚,对其基因表达调控的分子机理也比较了解,而且历经二十年的基因工程实践,大肠杆
12、菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系,有多种适用的寄主菌株和载体系列,大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点:在通常情况下,细菌的RN聚合酶不能识别真核的启动子;许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰,如正确的折叠和组装,而细菌中通常并没有这样的修饰机制,从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白;外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别,并被当做“异已分子”降解掉.3如何有效地提高外源基因的表达效率?提高启动子强度 缩短启动子同克隆基因间距离高效的翻译起始序列高效的转录终止区 提高质粒拷贝数及稳定性 用以下方法提高翻译水平:调整SD序列与AG间的
13、距离用点突变的方法改变某些碱基增加mRNA的稳定性的 减轻细胞的代谢负荷:诱导表达表达载体的诱导复制 提高表达蛋白的稳定性,防止其降解:克隆一段原核序列,表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质4试述3RCE技术原理和方法PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3或5末端之间区域的部分DNA称为快速扩增cDNA末端技术.如果已敿目的mRNA的一片段链内短序列,据此或设计基因特异引物,用原先存在的poy(A)尾(3末端)或附加的同聚尾(5末端)互补的序列做末端引物,就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDA序列。为获得末端cDNA克隆,mRN反转录时需用杂合引物(T)。Q由17个核苷酸
14、长的g(dT)及特定的3个核苷酸序列(QI-O)构成,前者被命名为锚定引物。为获得5末端部分cDA克隆需用基因特异引物,产物第一链产物,可用末端脱氧核苷酸转移酶及dAP加poly(A)尾.通过QT引物和反转录使用的上游基因特异引物生成第二链DNA。xxXXXX学校XX年学年度第二学期第二次月考XXX年级x班级姓名:_班级:_考号:_题号一、选择题二、填空题三、综合题总分得分评卷人得分一、选择题(每空?分,共?分)1、下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述,正确的是A蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的基因工程合成的是天然存在的蛋白质,蛋白质工程合成的可以不是天然存在的蛋白质C.基因工程是
15、分子水平操作,蛋白质工程是细胞水平(或性状水平)操作基因工程完全不同于蛋白质工程2、PR是一种体外迅速扩增DN片段的技术,下列有关PCR过程的叙述,不正确的是A变性过程中破坏的是NA分子内碱基对之间的氢键B复性过程中引物与DA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成延伸过程中需要DN聚合酶、TP、四种核糖核苷酸D.P与细胞内DA复制相比所需要酶的最适温度较高3、35采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出了转基因羊。但是人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列有关叙述,正确的是( )A人体细胞中凝血因子基因的碱基对数目,小于凝血因子氨基酸数目的3倍B.可用显微注射技术将含有人凝血
16、因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C在该转基因羊中,人凝血因子基因只存在于乳腺细胞,而不存在于其他体细胞中D人凝血因子基因开始转录后,DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA4、ch1基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失chL基因的变异株细胞。技术路线如图所示,对此描述错误的是( )AhL基因的基本组成单位是脱氧核苷酸B。过程中使用的限制性核酸内切酶的作用是将A分子的磷酸二酯键打开C.过程都要使用DNA聚合酶D.若操作成功,可用含红霉素的培养基筛选出该变异株5、下图表示基因工程中目的基因的获取示意图,不正确的是:、同种生
17、物的基因组文库大于cD文库B、表示PCR技术,用来扩增目的基因C、从基因文库中要得到所需目的基因,可根据目的基因的有关信息来获取、只要基因的核苷酸序列已知,就只能通过人工合成的方法获取6、图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有Msp、BH、Mbo、Sma种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为:CGG、GCC、GTC、CGGG。下列分析中正确的是:A、若用限制酶sp完全切割图1中NA片段,会破坏个磷酸二酯键B、若图1所示DNA虚线方框内的碱基对被T-A替换,用限制酶Sma完全切割后会产生3种不同的DA片段C
18、、若切割图2中的质粒以便拼接目的基因D应选择限制酶 BamH和bD、若用上述条件构建含有目的基因的重组质粒并成功导入细菌体内,则此细菌在添加抗生素和B的培养基中不能存活评卷人得分二、填空题(每空? 分,共? 分)、转基因抗病香蕉的培育过程如图。图中Pst、ma、co、Apa为限制酶,质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下图表示四种限制酶的识别序列及酶切位点.(1)构建重组质粒需要用限制酶和酶。(2)基因工程中除质粒外,和也可作为载体。基因工程操作的核心步骤是。(3)将重组质粒导入植物细胞常用方法是;若将重组质粒导入大肠杆菌细胞,需用处理大肠杆菌。()若要获得抗病基因,能否用限制酶Sa对
19、图中对应的位点进行切割?请说明理由。要获得含抗病基因的重组质粒能否用Pst、Apa限制酶切割质粒?。8、如图为利用生物技术获得生物新品种的过程,据图回答:(1)图中采用的目的基因获取方法是技术,其中过程需要酶才能完成()在培养转基因绵羊的过程中常用的受体细胞是,目的基因导入的方法是其中在动物细胞培养过程中,需让培养液中含有一定量的C2,其主要作用是在过程中还需要用到的主要生物技术有(3)在抗虫棉的培育过程,其中过程常用的方法是,要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后,是否能稳定遗传并表达,需进行检测和鉴定工作,请写出在个体生物学水平上的鉴定具体方法是:评卷人得分三、综合题(每空? 分,共?
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