细胞工程考试复习题样本.doc
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1、资料内容仅供您学习参考,如有不当或者侵权,请联系改正或者删除。 细胞工程复习题第一章: 绪论1.细胞工程是指按照一定的设计方案, 经过在细胞、 亚细胞或组织水平上进行实验操作, 获得重构的细胞、 组织、 器官以及个体, 创造优良品种和产品的综合性生物工程。广义的细胞工程包括所有的生物组织、 器官及细胞离体操作和培养技术。 狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。2. 细胞培养( cell culture) 和组织培养( tissue culture) 都属于体外培养( in vitro culture) , 是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。是细胞工程的最基本技术。3.动物细胞工
2、程发展史1、 细胞融合现象的发现2、 动物细胞培养技术的建立, 19 , Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞, 并观察到从中长出的轴突细胞( 神经纤维) , 她的工作被认为是动物细胞培养开始的标志; 3.细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生4、 动物克隆技术的建立4动物细胞工程的应用1、 动物细胞培养生产医药产品( 单克隆抗体)2、 新品种培育3、 试管动物与婴儿4、 组织工程5、 珍稀动物资源的保存与保护5.将目的基因在器官或组织中进行特异性高表示的基因动物称为动物生物反应器第二章1 .动物细胞工程实验室的设置无菌操作室( 接种室) 功能: 细胞筛选、 接种、 培养基无菌制备要求:
3、密封、 防尘、 防霉规划: 更衣间、 缓冲间、 操作间培养与观察室功能: 细胞培养、 观察要求: 清洁, 防尘规划: 观察室, 培养室制备室功能: 培养基的初制备、 提取工艺的操作、 细胞培养的上游和下游技术操作要求: 清洁, 防尘清洗灭菌室功能: 培养皿的清洗、 灭菌和无菌纯水的制备要求: 清洁、 防尘储藏室功能: 保存细胞、 无菌培养基、 常见液体以及消毒后的器皿等要求: 清洁, 防尘2.细胞计数法是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目, 用以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。细胞计数的原则: ”S”型计数, 遵循数上不数下数左不数右的原则。细胞生长曲线是观察细胞在一代生存期内的增生
4、过程的重要指标, 以培养时间( d) 为横坐标、 细胞密度为纵坐标所做出的曲线。 3.细胞贴壁率又称接种存活率, 用于观察贴壁附着生长细胞, 主要反映细胞的生存能力, 和部分底物材料的相容性。4.细胞活力测定方法: MTT比色法、 CCK-8 法5.细胞培养活体染色方法: 1) 碱性活性染料: 噻嗪类( 次甲基蓝、 甲苯胶蓝) 、 哑喷类( 量焦油蓝、 量焦油紫) 、 吖嗪类( 中性红、 詹纳斯绿) 、 三酚苯甲烷类( 甲基紫、 维克多利亚蓝) 2) 酸性活性染料:台盼蓝、 刚果红、 吡咯蓝) 6.支原体污染的检测方法: 相差显微镜观察、 荧光染色法观察 、 电镜检测 、 培养检测7.污染后解
5、决方法: : 使用抗生素、 加温处理、 使用支原体特异性血清、 其它方法第四章1.接触抑制定义: 细胞从接种到长满底物表面后, 由于细胞繁殖数量增多相互接触后, 不再增加。2.密度抑制: 细胞接触汇合成片后, 虽发生接触抑制, 但只要营养充分, 细胞依然能够进行增殖分裂, 数量仍在增多, 但当细胞密度进一步增大时, 培养液中营养成分的减少, 细胞营养的枯竭和代谢物的影响, 则发生密度抑制, 导致细胞分裂停止细胞永生化也称不死性, 是细胞获得持续生长增殖能力的特性。而恶性细胞不但能长期增殖生长并有异体接种致瘤性。3.细胞系( cell line) 是指由原代培养经初步纯化, 获得的以一种细胞为主
6、的、 能在体外长期生存的不均一的细胞群体。 4.细胞株( cell strain) 是指细胞系经进一步的克隆化, 得到的由单一细胞组成的群体。细胞系( cell line) 是指由原代培养经初步纯化, 获得的以一种细胞为主的、 能在体外长期生存的不均一的细胞群体。 5.细胞培养的常见液体:水-新鲜制备的纯水或三蒸水平衡盐溶液-Hanks、 PBS液等维持渗透压平衡消化液-胰蛋白酶、 EDTA-Na及胶原酶溶液、 消化酶抑制液-含血清培养液、 大豆胰酶抑制剂pH调整液-NaHCO3、 HEPES溶液抗生素液-青霉素、 链霉素、 卡那霉素和庆大霉素等谷氨酰胺补充液-谷氨酰胺溶液, 注意其很不稳定6
7、.传代细胞培养方法1) 贴壁生长的细胞: 消化法传代、 直接吹打或用硅胶软刮2) 悬浮细胞: 直接吹打、 自然沉降法细胞的冻存原则: 慢速冷冻、 保存温度低细胞的复苏原则快速解冻7. 细胞同步化培养方法: 1) 选择细胞同步化: M期细胞震摇脱落法、 离心洗脱法、 梯度沉降法2) 诱导细胞同步化法: 血清饥饿法( G1) 、 异亮氨酸营养缺乏法( G1) 、 DNA合成抑制剂阻断法( S) 、 秋水仙素阻断法( M) 8.细胞的冻存要点: 消化细胞( 同前) , 将细胞悬液收集至离心管中。 1000rpm离心10分钟, 弃上清液。 沉淀加含保护液的培养, 计数, 调整至5106/ml左右。 将
8、悬液分至冻存管中, 每管1 ml。 将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口, 封口一定要严, 否则复苏时易出现爆裂。 贴上标签, 写明细胞种类, 冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。 按下列顺序降温: 室温4( 20分钟) 冰箱冷冻室( 30分钟) 低温冰箱( 30 1小时) 气态氮( 30分钟) 液氮。9细胞的复苏要点将冻存于液氮中的冻存管取出, 迅速放入37-40水浴中使其在1min内融化。 无菌操作下打开冻存管, 将细胞悬液吸取到培养瓶中, 补足生长液 后, 置37培养。待细胞贴壁( 约4h) 后, 换培养液一次。 或取出细胞悬液至离心管中, 补加10ml培养液, 500-1000r/
9、min低 速离心5min, 去上清, 用培养液适当稀释后装入培养瓶中, 置37培 养, 次日后更换一次培养液。 待细胞长成单层后即可传代。第五章1.细胞融合: 定义: 指用自然或人工方法、 使两个或更多个不同的细胞融合成一个细胞的过程, 又称为体细胞杂交。2.细胞融合的方法: PEG介导的融合、 细胞电融合、 病毒介导的融合3,.特异性杂交瘤细胞的筛选原理: 经过选择性培养后生长的杂交瘤细胞, 仅有部分是分泌预定特异性抗体的杂交瘤细胞。可取上清液, 根据抗原的性质、 抗体类型及所需灵敏度等具体情况来加以选择。4. 单抗的制备: 1) 过程动物免疫与亲本细胞的选择、 2) 细胞融合: 淋巴细胞杂
10、交瘤的制备、 3) 杂交瘤细胞的筛选: 有限稀释法等 4) 单克隆抗体的制备和冻存5) 单克隆抗体的纯化抗体制备有两种方法增量培养法小鼠腹腔接种法5. 杂交瘤技术的原理及流程: 用抗原免疫小鼠-免疫牌细胞、 骨髓瘤细胞的培养-骨髓瘤细胞-在PEG作用下融合成杂交瘤细胞-选择培养基( HAT培养基) ; 未融合的的细胞死亡, 杂交瘤细胞存活-阳性克隆的筛选及克隆化-克隆扩增及大量制备McAb6. 杂交瘤技术产生的3个技术关键: 1) B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性 2) 细胞融合技术 3) 杂交瘤细胞的筛选7单抗纯化方法盐析凝胶过滤离子交换层析亲和层析法辛酸沉淀法第六章1.胚胎工程( embryo
11、 engineering) 以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作, 利用人工方法影响、 改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。主要技术包括体外受精、 胚胎切割、 胚胎移植等。2.精子获能: 精子离开精巢后, 无使卵受精的能力, 它必须经过在附睾中成熟及在雌性生殖道内停留一段时间, 才具有使卵受精的能力, 这种现象称精子获能。 3.顶体反应定义: 精子在同卵子表面接触或与卵膜分泌的物质相遇后, 精子的顶体就会发生一系列的变化。4. 体外受精( IVF) : 就是将哺乳动物卵母细胞从母体取出, 在体外进行精卵结合的过程。 5.胚胎移植( embryo transfer, ET) 一般是针对早期
12、胚胎而言, 它是指附植前的早期胚胎很容易由子宫中取出, 经过人为处理, 能够再送入子宫的过程, 这是胚胎生物工程的基本技术。6.同期发情: 胚胎移植时, 供体胚胎必须与受体子宫内膜发育状态高度同步化, 才能获得好效果, 这个过程称为同期发情7.多精受精的阻止: 透明带反应、 受精膜的形成8.胚胎的收集: A 手术法收集胚胎:1) 输卵管冲胚(顺向冲胚、 逆向冲胚); 2) 子宫角冲胚 B 非手术法收集胚胎: 二路法、 三路法第七章1.干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞, 干细胞具有两种特性: 能够产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞; 同时还能分化成为多种特定功能的体细胞。2.干细胞
13、有几个主要特征 : 干细胞本身不是终末分化细胞; 干细胞能无限增殖分裂; 干细胞可连续分裂几代, 也可在较长时间内处于静止状态; 干细胞分裂产生的子细胞只能有两种命运保持为干细胞或分化为特定细胞。3.干细胞的分类: 很据分化潜能大小分: 全能干细胞、 多能干细胞、 专能干细胞根据来源来分: 胚胎干细胞 ESC 、 成体组织来源的干细胞 ASC 4.ES细胞生物学特性: 细胞形态结构及核型、 细胞的高度分化潜能 、 碱性磷酸酶的表示 、 胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表示5. 组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和 方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、 功能和生长的机制, 研究开发能够
14、修复、 维持或改 善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。 第八章1.核移植定义 : 将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、 分裂并发育,使得核供体的基因得到完全复制。2.核移植目的: 生殖性克隆、 治疗性克隆3.治疗性克隆技术途径包括以下几个步骤: 首先取病人体细胞核, 移植到去核的成熟受体卵母细胞; 在早期胚胎形成后, 从中分离获得人ES 细胞; 对ES细胞进行基因修饰和定向分化研究; 4) 将定向分化后的细胞移植给病人。4.核移植技术的一般程序: 核受体细胞的准备、 核供体细胞的准备、 核移植、 激活、 重构胚胎的培养、 胚胎移植、 体细胞克隆动物的鉴定
15、5.核移植原理: 1) 胚胎、 胚胎干细胞、 胎儿成纤维细胞、 成体细胞的每一个细胞核具有相同的遗传物质。2) 已经发生分化的胚胎细胞核移植到成熟的卵母细胞中, 因为特殊因子作用, 使植入核基因表示被重新编程或调整, 将”发育钟”拨回到受精状态, 即恢复”全能性”( totipotent)。3) 已经分化的细胞经过去分化培养后, 同样具有潜在发育潜能, 能够恢复全能性。6.核移植技术存在的问题A成功率低, 为1-5B理论研究滞后技术研究C体细胞克隆后代可能出现老化现象D核移植技术环节尚需要不断完善第十一章1.植物组织培养: 在含有营养物质及植物生长物质的培养基中, 培养离体植物组织( 器官或细
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