基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱法测定猪肉中22种磺胺类药物的残留.pdf
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1、第 4 卷 第 1 期 食 品 安 全 质 量 检 测 学 报 Vol.4 No.1 2013 年 2 月 Journal of Food Safety and Quality Feb.,2013 *通讯作者:秦峰,副主任药师,主要研究方向为食品安全检测技术。Email:*Corresponding author:QIN Feng,Deputy Chief Pharmacist,Shanghai Institute for Food and Drug Control,No.1500,Zhangheng Road,Pu-dong District,Shanghai 201203,China.E-
2、mail: 基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱法 测定猪肉中 22 种磺胺类药物的残留 徐伟东,秦 峰*,李晓雯,陈桂良(上海市食品药品检验所,上海 201203)摘摘 要要:目的目的 建立基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱测定猪肉中 22 种磺胺类药物残留量的测定方法,包括磺胺苯酰、磺胺醋酰、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺噁噁胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲唑、噁磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺喹啉、磺胺噻唑、磺胺噁异唑、磺胺胍、甲氧苄啶、磺胺索嘧啶。方法方法 猪肉样品与弗罗里硅土混合,研磨均匀,
3、装入空的固相萃取管中,用 15 mL 1%乙酸二氯甲烷:乙酸乙酯(13,v/v)洗脱,洗脱液用氮气吹干,残渣用 1 mL 乙腈:10 mmol/L 乙酸铵溶液(1585,v/v)溶解。加入 1 mL 正己烷混合离心,取下层溶液,经 0.22 m 滤膜过滤后用 Agilent Poroshell 120 EC-C18(2.1 mm150 mm,2.7 m)色谱柱分离,高分辨质谱测定。结果结果 22 种磺胺类药物在 10100 g/kg 范围内线性关系良好,相关系数 r0.99,除磺胺甲噻二唑、甲氧苄啶和磺胺脒/磺胺胍加标回收率小于 40%外,其余均大于 60%,定量限为 510 g/kg。结论结
4、论 本方法具有前处理快速、高效、有机试剂用量少、成本小等优点,适用于猪肉中磺胺类药物残留量的测定。关键词关键词:高分辨质谱;基质固相分散;猪肉;磺胺 Determination of twenty-two sulfonamide residues in pork by matrix solid phase dispersion-high pressure liquid chromatography-high resolution mass spectrometry XU Wei-Dong,QIN Feng*,LI Xiao-Wen,CHEN Gui-Liang(Shanghai Institu
5、te of Food and Drug Control,Shanghai 201203,China)ABSTRACT:Objective To establish a method for determination of 22 sulfonamides in pork,including sul-fabenzamide,sulfacetamide,sulfachloropyridazine,sulfadiazine,sulfadimethoxine,sulfamethazine,sulfam-erazinesulfadoxine,sulfamonomethoxine,sulfamethoxy
6、pyridazine,sulfamethoxydiazine,sulfamethoxazole,sulfamethizole,sulfamoxole,sulfaphenazole,sulfapyridine,sulfaquinoxaline,sulfathiazole,sulfisoxazole,sulfaguanidine,trimethoprim and sulfisomidine,with matrix solid phase dispersion and high pressure liquid chromatography-high resolution mass spectrome
7、try.Methods Pork samples were mixed and grinded with solid-phase sorbent(Florisil),then put in a glass mortar.The mixture was packed as a solid phase extraction cartridge and eluted with 15 mL 1%acetic acid dichloromethane:ethyl acetate(1:3,v/v).The eluted materials were collected and evaporated to
8、dry by nitrogen gas.The residues were dissolved in 1 mL acetonitrile:10 mmol/L ammonium acetate(15:85,v/v)and 1mL n-hexane.After centrifugation,the lower solution was gone 142 食品安全质量检测学报 第 4 卷 through a 0.22 m filter membrane and then separated by Agilent Poroshell 120 EC-C18 column(2.1 mm150 mm,2.7
9、 m),after that it was determined by high resolution mass spectrometry.Results The linear range of 22 sulfonamides were 10100 g/kg,r0.99.The recoveries of sulfamethizole,trimethoprim and sulfagua-nidine were below 40%,the others were above 60%.The limits of quantitation were 510 g/kg.Conclusion The a
10、dvantages of this method are fast,efficient,less organic reagent and low cost.It is suitable for the deter-mination of sulfonamides residues in pork.KEY WORDS:high resolution mass spectrometry;matrix solid phase dispersion;pork;sulfonamides 1 引 言 磺胺类药物(sulfanilamides,SAs)结构上类似对氨基苯甲酸(PABA),可与 PABA 竞争
11、性作用于细菌体内的二氢叶酸合成酶,从而阻止以PABA为原料合成细菌所需的四氢叶酸,进而抑制细菌蛋白质的合成达到抑菌效果。该类药物具有抗菌谱广、抗菌效果明显、性质稳定、价格便宜等优点,目前大量用于防治畜禽细菌性感染疾病1。由于磺胺类药物在动物体内无法代谢完全,其残留量通过食物链进入人体,进而对人体健康构成危害2。我国和其他国家对动物源性食品中磺胺类药物的最高残留限量(MRL)均作出规定3,见表 1。基质固相分散法(matrix solid phase dispersion,MSPD)是由 Barker 在 1989 年提出并给予理论解释的一种样品前处理技术4,该技术最初是试样直接与反相填料(C1
12、8或 C8键和硅胶)研磨、混匀制成均匀的半固态物质,然后装柱,用洗脱剂淋洗的一个过程。它将组织匀浆、提取和净化等步骤在同一操作中完成,减少分析环节,降低工作量,因此在药物残留领域该技术的应用愈来愈多。近年来,随着不同基质,不同分析目标领域的增加,该技术的应用愈发的灵活5,分散剂除了包括反相填料(C18或 C8),还包括了正相无机材料分散剂(如氧化铝和弗罗里硅土)、正相填料分散剂(如硅胶和键合极性基团的硅胶)、无选择性保留特性材料分散剂(如沙及硅藻土)、高选择性分散剂(如分子印迹聚合物材料)和新型材料(如碳纳米管等),相应的洗脱溶剂亦随着固体分散剂的类别和分析物的化学性质相应改变。本文考察不同固
13、体吸附剂、不同洗脱溶剂和洗脱体积、基质和分散剂的比例等因素对测定结果的影响。目前对猪肉中磺胺的理化分析方法主要有高压液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、超临界流体色谱法(SFC)、气相色谱质谱联用法(GC/MS)和高压液相色谱质谱联用法等(LC/MS)6。LC/MS 法是检测动物源性食品中 SAs 残留的重要方法,其中以低分辩质谱为多,主要用于确证检测。与低分辩质谱不同的是,高分辩质谱具有高质量准确度、高质量分辩率、参数设定简单、一次全扫描数据、除可以对目标化合物定量外还可以用于非定向和未知化合物的筛选等优点,目前已应用于检测尿液、毛发、牛奶、动物组织等样品中的药物残留7。本文使用高分
14、辩质谱(Q-TOF-MS)对猪肉中的 22 种磺胺进行了检测,包括磺胺苯酰、磺胺醋酰、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶 噁噁、磺胺甲唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲唑、噁磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺喹啉、磺胺噻唑、磺噁胺异唑、磺胺胍、甲氧苄啶、磺胺索嘧啶(见图 1),表 1 不同国家对动物源性食品中磺胺类药物最高残留限量的规定 Table 1 The MRL of SAs in animal original food controlled by different countries 地区 限量规定 颁布时间
15、中国 牛奶中磺胺二甲嘧啶不得过 25 g/kg;食品动物中肌肉、脂肪、肝、肾中磺胺类的残留总量不得过 100 g/kg 2002 欧美 动物组织的残留总量不得过 100 g/kg 2003 日本 动物组织的残留总量不得过 20 g/kg 2002 第 1 期 徐伟东,等:基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱法测定猪肉中 22 种磺胺类药物的残留 143 (图 1)144 食品安全质量检测学报 第 4 卷 图 1 22 种磺胺类药物的结构式 Fig.1 Structures of 22 SAs 为进一步开展不同类兽药残留的检测打下基础。2 材料与方法 2.1 仪器和设备 API TripleT
16、OF 5600质谱系统(美国AB SCIEX公司),配有电喷雾离子源;Agilent 1260 高压液相色谱仪(美国 Agilent 公司);Milli-Q 超纯水器(美国Millipore 公司);MS3 型漩涡振荡器(德国 IKA 公司);CR 21G 型高速冷冻离心机(德国 Eppendorf 公司);多位氮气浓缩仪(德国 Organomation 公司)。2.2 材料和试剂 Acrodise GHP 双性滤膜(美国 Pall 公司);HPLC级甲醇、乙腈和甲酸(美国 Merck 公司);HPLC 级乙酸乙酯、正己烷(美国 Honeywell 公司);HPLC 级二氯甲烷(中国 J&K
17、公司);分析纯乙二醇(上海凌峰化学试剂公司);实验用水为经 Milli-Q 净化系统(0.22 m过滤膜)过滤的去离子水;10 mL 带筛板的固相萃取空柱、弗罗里硅土和 ODS-C18(中国 Agela 公司);硅藻土、酸性氧化铝(100 目)、中性氧化铝(100 目)和碱性氧化铝(100 目)(国药集团化学试剂公司);磺胺苯酰、磺胺醋酰、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺多辛、磺胺甲基嘧啶、噁磺胺甲噻二唑、磺胺甲唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶(德国 Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司),噁磺胺二甲唑、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、噁噁磺胺喹啉、磺
18、胺噻唑、磺胺异唑(美国 Sigma 公司),甲氧苄啶、磺胺脒、磺胺索嘧啶(中国药品生物制品检定所和中国兽医药品监察所)。磺胺标准储备液配制:准确称取上述各种磺胺标准品 0.0100 g,分别用甲醇溶解并定容至 100 mL,浓度为 100 g/mL,20 保存。磺胺混合标准溶液配制:临用时,分别取上述磺胺标准储备液,用乙腈:10 mmol/L 乙酸铵(1585,v/v)稀释成 1 g/mL 的混合标准溶液。磺胺混合标准线性溶液配制:分别量取磺胺混第 1 期 徐伟东,等:基质固相分散-高压液相色谱-高分辨质谱法测定猪肉中 22 种磺胺类药物的残留 145 合标准溶液适量,用乙腈:10mmol/L
19、 乙酸铵(1585,v/v)稀释成 5、10、25、50 ng/mL 的混合标准溶液,作为线性溶液 S1S4。2.3 方法 2.3.1 样品处理 称取0.50 g试样(精确到0.1 g)和1.50 g弗罗里硅土(精确到 0.1 g)与玻璃研钵中,用玻璃杵研磨约 5 min,使样品均匀分散,将该混合物装入约 10 mL 带筛板的固相萃取空管中,轻轻压紧,连接在固相萃取装置上,用 15 mL 的二氯甲烷:乙酸乙酯(13,v/v)洗脱。将收集洗脱液于 50 下氮气吹干,用 1.0 mL乙腈:10 mmol/L 乙酸铵(1585,v/v)溶解,涡旋混合 3 min,加入 1 mL 正己烷,混合后 46
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