人教版动物细胞融合与单克隆抗体制备.pptx
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1、杂杂种种植植株株筛选融筛选融合合AB的原生的原生质体质体再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法?方法?促进融合促进融合的方法?的方法?融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程原理?原理?原理?原理?一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52P52动物融合动物融合.细胞融合的概念.诱导动物细胞融合的方法.意义并用笔画出来2、动物
2、细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞形成一个是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程细胞的过程思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?酶解法,如纤维素酶或果胶酶酶解法,如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?无需,因为动物细胞无细胞壁无需,因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?离心、电激等物理方法;离心、电激等物理方法;PEG等化学
3、方法等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?、动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?不能不能不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂1、动物细胞融合过程动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤
4、组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁原生原生质体质体融合融合植物植物组织组织培养培养杂种细胞杂种细胞物理法物理法化学法化学法生物法:生物法:灭活的病毒灭活的病毒常用方法动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B4 4、原理、原理细胞膜的流动性5 5、最有价值的应用、最有价值的应用制备单克隆抗体3 3、过程、过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒PEG等杂交细胞v细胞融合完成的标志细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核细胞核融合成一个核主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用
5、途用途物理、化学方法物理、化学方法(同左)(同左)灭活的病毒灭活的病毒物理(离心、振物理(离心、振动、电刺激)动、电刺激)化学(聚乙二醇)化学(聚乙二醇)诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A离心 B灭活的病毒 C电刺激 D振动 2.动
6、物细胞融合的目的中最重要的是A克服远源杂交不亲和 B制备单克隆抗体C培育新物种 D生产杂种细胞7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗?、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗?思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用?、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用?生产单克隆抗体生产单克隆抗体请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52提提问问?1.抗体是由何种细胞产生的?抗体是由何种细胞产生的?、一个淋巴细胞、一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种能分泌多种抗体吗?抗体吗?、一种抗原侵入机体之后,引起机体免、一种抗原侵
7、入机体之后,引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗?疫反应产生的抗体只有一种吗?二、单克隆抗体二、单克隆抗体 每个淋巴细胞只能分泌一种抗体,由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。浆细胞浆细胞一种一种抗体不纯抗体不纯 抗原抗原 动物体动物体刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原不纯抗原不纯.简述获得抗体的传统途径?简述获得抗体的传统途径?、这种方法获得的抗体有什么缺陷?、这种方法获得的抗体有什么缺陷?特异性差、纯度低;特异性差、纯度低;产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体?体外培养单个淋巴细胞,提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞,提取分泌
8、的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?不能不能怎样解决这个问题?怎样解决这个问题?设计方案:设计方案:一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂交细胞杂交细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体 为什么用小鼠骨髓瘤细胞与为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融淋巴细胞融合?合?思考思考:因为因为B B淋巴细胞具有淋巴细胞具有分泌特异性抗分泌特异性抗体体的能力,而骨髓瘤细胞具有在体的能力,而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下外培养条件下大量增殖大量增殖的本领,所的本领,所以由某种以由某种B B淋巴细胞和骨
9、髓瘤细胞淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞,融合产生的杂交瘤细胞,能够在体能够在体外大量繁殖,并且产生特定的单克外大量繁殖,并且产生特定的单克隆抗体。隆抗体。B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型?种类型?(只考(只考虑两两融合)融合虑两两融合)融合细胞几种细胞几种类型类型?5 5种种B淋巴细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B淋巴细胞淋巴细胞-B淋巴细胞淋巴细胞B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞3 3种种骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓
10、瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细杂交细胞胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞,克隆专一抗体,分开不同杂交细胞,克隆专一抗体,检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠注射到小鼠体内体内体外培体外培养养2 2、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的:得到杂次筛选目的:得到杂次筛选目的:得到杂次筛选目的:得到杂交瘤细胞(多种)。交瘤细胞(多种)。交瘤细胞(多种)。
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