人教版教学定稿动物细胞融合与单克隆抗体.pptx
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1、如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交,得到绿色的小奶牛,那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗?动物细胞也能融合吗?一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用 思考:思考:思考:思考:1 1、什么叫动物细胞融合?、什么叫动物细胞融合?、什么叫动物细胞融合?、什么叫动物细胞融合?2 2、促进细胞融合的、促进细胞融合的、促进细胞融合的、促进细胞融合的方法方法方法方法有哪些有哪些有哪些有哪些?3 3、细胞融合技术最大的、细胞融合技术最大的、细胞融合技术最大的、细胞融合技术最大的优点优点优点优点是什么?是什么?是什么?是什么?4 4、植物体细胞
2、杂交与动物细胞融合、植物体细胞杂交与动物细胞融合、植物体细胞杂交与动物细胞融合、植物体细胞杂交与动物细胞融合 有哪些有哪些有哪些有哪些异同异同异同异同?物理法物理法物理法物理法化学法化学法化学法化学法生物法生物法生物法生物法电场法电场法电场法电场法(效率高、伤害小、易操作效率高、伤害小、易操作效率高、伤害小、易操作效率高、伤害小、易操作)(离心、振动、电刺激)(离心、振动、电刺激)(离心、振动、电刺激)(离心、振动、电刺激)聚乙二醇(聚乙二醇(聚乙二醇(聚乙二醇(PEGPEG)灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒灭活的病毒(灭活的仙台病毒)(灭活的仙台病毒)(灭活的仙台病毒)(灭活的仙台病毒)链接链
3、接链接链接:病毒促融细胞病毒促融细胞病毒促融细胞病毒促融细胞灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合,形成杂种细胞细胞融合,形成杂种细胞主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法(同左)灭活的病毒物理(离心、振动、电刺激)化学(聚乙二醇)诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较2.动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多
4、个动物细胞结合形成一个细胞的过程,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞杂交细胞。提问?1.抗体是由何种细胞产生的?效应B细胞(浆细胞)。2.一个淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗?每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.一种抗原侵入机体之后,引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗?动物在免疫反应过程中,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。4.简述获得抗体的传统途径?抗原 动物体 抗体 抗原不纯 抗体不纯二、单克隆抗体二、单克隆抗体刺激浆细胞6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体?体外培养单个淋巴细胞,提取分泌的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个
5、问题?5.这种方法获得的抗体有什么缺陷?产量低,纯度低,特异性差一个一个一个一个B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖能无限增殖能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能分泌一种特异性抗体既能分泌一种特异性抗体既能分泌一种特异性抗体既能分泌一种特异性抗体又能无限增殖又能无限增殖又能无限增殖又能无限增殖19751975年英国科学家年英国科学家年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦米尔斯坦和和和和柯勒柯勒柯勒柯勒设想:设想:设想:设想
6、:B B淋巴细胞的淋巴细胞的特点:特点:B B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。生抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。具有特异性免疫作用。每一个每一个B B淋巴细胞只能产生一种特淋巴细胞只能产生一种特异性抗体。异性抗体。单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程专一专一抗体抗体检验检验阳性阳性单克隆抗体单克隆抗体 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合细胞融合杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选,继续培养筛选,继续培养足
7、够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔筛选筛选创始人:米尔斯坦创始人:米尔斯坦创始人:米尔斯坦创始人:米尔斯坦杂交杂交杂交杂交细胞细胞细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫经免疫经免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞第一次筛选第一次筛选第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选第二次筛选第二次筛选能产生特定抗
8、体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体整个制备过程为何要经过两次筛选整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种),第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种),第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养,然后再筛选出细胞的情况下开始培养
9、,然后再筛选出能产生特异性能产生特异性抗体的细胞群。抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义,克隆的含义,只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞,而是淋巴细胞,而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。知识拓展:知识拓展:知识拓展:知识拓展:如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?如何进行杂交
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