中医中药研究中实验动物的选择与应用模板.doc
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1、资料内容仅供您学习参考,如有不当或者侵权,请联系改正或者删除。中医中药研究中实验动物的选择与应用一、 中医药研究中开展动物实验的意义中国医药学自从有文字记载以来的几千年悠久历史中, 总结了劳动人民长期和疾病作斗争的丰富经验。它对中华民族的繁衍昌盛有很大贡献, 对世界医学的发展也有很大的影响。科学研究最贵有创造性, 有特点。在发展中、 西医学的同时, 用唯物辩证法指导中西医结合, 对于促进中国医学科学发展、 赶超世界先进水平具有重要意义。在唯物辩证法指导下用现代科学知识和方法整理研究世界各国各民族传统医学并与现代医学的精华相结合, 创立新的世界医学, 是实现世界医学史中从朴素辩证唯物论和形而上学
2、影响下的旧医学飞跃为唯物辩证法指导下的新医学的正确道路。医学科学研究中我们强调中西医结合方向决不是要闭关自守或夜郎自大。相反, 我们对西医( 更不用说其它现代自然科学) 的一切长处都应该认真学习研究, 要有分析地研究应用西医的一切新成就, 引起可能引进、 应该引起的新技术, 注射西医和一切现代科学研究的新动向、 新思路, 以便洋为中用, 启发思想, 广开思路。另外, 中国医药学这个宝库必须用现代科学知识和方法( 包括各自然科学和现代西医中合乎科学的知识和方法) 加以发掘、 整理和提高。从中医发展史看, 中医学几千年来的研究途径几乎全是经过临床观察方法以认识疾病的发生、 发展、 变化规律及总结有
3、效的防治措施。医学发展的历史证明: 局限于临床观察方法是中医学发展缓慢的原因之一。动物实验是现代医学的常见方法和手段, 中医药学利用动物实验方法, 在一定范围内能够提示更为具体的中医理论本质, 有利于中医学科学达到一个新的认识水平。随着现代医学的迅猛发展, 中医将动物实验手段从现代医学中移植过来, 近几十年才逐渐发扬光大, 将动物实验方法渗入到了中医生理、 病理、 方药、 针灸、 防治等研究领域, 经过动物实验, 提示了一些中医理论实质, 为中医理论提供了一些实验科学依据, 使动物实验方法在中医学研究中出现了新的苗头, 表现了强大的生命力。总结近几十年中医动物实验研究概况, 五六十年代多是经过
4、动物实验研究针刺对疾病的防治作用; 70年代多是经过动物实验进行中药药理研究; 80年代则有经过动物实验, 利用中医治疗手段对西药实验性病变进行防治。中医药研究中开展动物实验的好处有如下几方面: ( 一) 能够替代人体, 预测中药毒副作古今中外有关中药毒副作用的记载并不少见, 如: 淮南子修务训记载: ”神农尝百草之滋味, 水泉之甘苦, 全民知所避就, 当此之时, 一日而遇七十毒”备急千金要方记载: ”水银中毒发生口舌糜烂”近年来报导: 误服大青龙汤致死; 误服大承气汤致死。日本医药品副作用文献抄录报告: 葛根汤、 十味败毒散、 八味地黄丸、 柴胡加龙骨牡蛎汤、 半夏泻心汤等36种方剂有副作用
5、。还报导苍耳子中毒致死、 乌头中毒致死等等。究竟有毒副作用的药物安全量是多大? 中毒致死量是多少? 服用后会出现哪些不良反应? 哪些药物在什么情况下有毒副作用? 以及发生毒副反应后如何救治? 这些方面至今多还缺乏比较精确的认识。要解决这些问题, 不可能也不允许在人体身上直接进行试验, 因为医学的宗旨是为人类防病治病、 增进健康的, 因此最好的方法就是进行动物实验。( 二) 能够严格控制实验条件, 较可靠地证实治疗效果人类疾病的转归除药物治疗外还受着多种因素的影响, 如: 气候环境、 精神情绪、 饮食劳逸等, 这些因素在一定条件下会造成疾病好转或恶化。临床上还可见到由于患者产生强烈的治愈要求,
6、对接受治疗产生良好的疗效愿望, 心理上产生一种有效偏因, 从而出现治疗有效的反应, 即所谓的”假阳性”现象; 反之, 临床上也常见到患者在治疗中因饮食起居不慎或受到精神刺激等因素的影响, 从而造成疾病恶化。这些情况都会造成医生在治疗疾病中产生错误的疗效判断。之因此有些个案报道或新方疗效报道的疗效结果在临床上重复使用时出现与原报道结果不符的现象; 其原因之一就与其它因素影响有关。因此要比较可靠地评论药物在治疗效果就需要在严格控制各种影响因素的条件下进行, 可是由于人类的高度复杂性, 在多数情况下很难严格控制, 而对于动物来说就比较容易严格控制。( 三) 能够验证和发展中医理论, 为中医理论提供实
7、验科学依据中医学产生于自然哲学时期, 是在长期的医疗实践经验积累的基础上, 以整体综合观察方法, 在不干扰原有生理病理的情况下逐渐形成和发展起来的高度概括的医学理论。在其形成和发展过程中由于缺乏科学实验和其它科学手段, 造成中医理论难以深入地提示更为具体的规律, 出现一些笼统、 抽象、 模糊的概念, 使丰富的实践经验与笼统、 抽象、 模糊的理论结合起来。动物实验能够使人的认识深入到直接观察难以达到的物质内部更深的层次, 提示一些更为具体、 更为确切的规律, 特别是当需从组织形成学角度来观察时, 就更需要借助动物实验。经过动物实验不但能够为验证中医理论提供科学的实验依据, 而且能够进一步发展中医
8、理论提供科学的实验依据。如: 王氏为阐明”肺主通周水道”的理论, 经过人工扩肺以增强免疫肺通气量观察对兔排出尿量的影响, 发现当扩肺后2分钟左右每只动物尿量开始减少, 伴随扩肺时间的延长, 尿量减少越明显, 停止扩肺后, 尿量逐渐恢复到扩肺前水平。莫氏等在中医”肾开窍于耳”的理论基础上, 用生物电作为内耳功能指标, 证实了醛固酮对内耳功能有促进作用, 由此提出把醛固酮作为联系中医肾与耳之间的物质基础的设想。辽宁中医学院等人经过对脾虚动物模型葡萄糖转运电位( PD) 的观察分析, 发现脾虚时PD明显地受到抑制, 而四君子汤则有促进PD恢复的作用。日本的久保道德为说明桂枝汤具有发汗作用, 她在小鼠
9、血中注入炭, 小鼠皮色变黑, 病理切片有大量炭附着于皮肤肌肉下层组织的血管壁内, 灌服桂枝汤为主方剂后, 异物消除。( 四) 能够缩短研究周期, 加快中医发展中医学的发展历史告诉我们: 有此问题单凭临床经验积累需要花费很长时间才能得到解决, 或者虽花费很长时间, 问题仍得不到解决, 而经过动物实验有些问题就能够得到迅速解决。如中药十八反中几对相反药, 历来有人主张必须恪守, 有人则认为不必绝对化, 更有人认为合用显著的治疗效果, 多少年来一直没有充分的依据来说明这一问题, 有人经过动物实验仅在几个月内不但证明了相反药配伍后毒性远比单味药高, 而且证明了两种药物用量不同产生的毒性大小也不一样。二
10、、 中医证型动物模型复制方法及动物选择中医证型的动物模型大约有”阳虚”、 ”阴虚”、 ”脾虚”、 ”脉微欲绝”、 ”血虚”、 ”血瘀”、 ”肝郁”、 ”寒证”、 ”热证”、 ”温病”及”里实”等11种。其造型的思路和方法除个别者外, 均是选择一些造成与临床证型相仿的致病因素, 作用于动物机体使其产生类似临床某些证的模型, 而致病因素不外乎物理、 化学、 生物以及某些内脏损伤或切除等。如用生大黄、 番泻叶、 玄明粉造成脾虚运化失常模型; 用阿托品( 胆碱能M型受体阻断剂) 、 利血平( 耗竭儿茶酚胺类递质) 造成植物神经功能失调拟脾虚、 阳虚、 阴虚模型; 根据中医饥饱无度、 损伤脾胃的理论,
11、用甘兰加猪脂使饮食失节造成脾虚生化乏源模型; 以大剂量醋酸氢化可的松使动物产生一系列耗竭现象, 达到虚损状态比拟阳虚模型; 以适量的大肠杆菌静脉注射, 复制急性和暴发性大肠杆菌败血症比拟温病模型; 依中医”正邪相争”理论为指导, 用给动物注入强毒细菌以”助邪”及结扎血管阻断血运降低机体抗病力以”伤正”的办法, 造成动物”里实”模型; 另外, 还开展了采用多种病因造型方法的尝试, 其造型所用动物主要还是小动物( 大、 小白鼠) , 也有用金黄地鼠、 家兔和猫的。给药( 或作用) 途径除胃饲外, 是肌肉、 皮下、 腹腔及耳缘静脉注射。中医证型动物模型造型方法。1”卫气营血”模型( 熊启达等: 四川
12、医学杂志, ( 2) : 65, 1982) : 选用家兔, 体重2.12.75kg。用强毒力的大肠杆菌以0.75ml( 每ml含大肠杆菌27亿个) /kg体重, 注射至兔耳缘静脉造型。感染后动物表现蜷缩、 懒动、 少食、 体温升高、 心率增快、 耳血管周围渗血、 出血; 舌象有明显病理改变; 血培养有大肠杆菌生长, 白细胞及血小板显著减少。可100%造型成功, 适用于开展实验性温病研究。2”寒证、 热证”模型( 梁月华等: 在医杂志, ( 11) , 1982) : 选用雌性大白鼠, 体重170210g。热证型: 用温热药( 附子、 干姜、 肉桂、 党参、 黄芪、 白术) 制成100%水煎剂
13、灌胃, 每次2ml, 每日2次。寒证型: 首先于腹腔内注射三联疫苗1ml, 每日1次共2次; 然后给予寒冷药( 胆草、 黄连、 黄柏、 银花、 连翘、 石膏) 制成的100%水煎剂灌胃, 每次2ml, 日2次。给药后15天60-70%造型成功。热证型: 心率加快, 饮水量增多, 尿内儿茶酚胺及17-羧皮质类固醇排出量增多。寒证型: 心率减慢, 尿内儿茶酚胺及17-羧皮质类固醇排出量减少。用此模型可测量痛阈和惊厥阈值及脑内介质; 观察动情周期及血内孕酮含量。3”血瘀”模型: 高粘滞血症模型( 阮景绰等) : 选用家兔, 耳缘静脉注入10%葡聚糖生理盐水, 每公斤体重注入5ml, 可100%造型成
14、功。给药后可见微循环血液变慢, 红细胞聚集, 全血及血浆粘度增加, 血沉快, 红细胞电泳变慢。此模型适用于”活血化瘀”药物作用原理的研究。”血瘀”模型( 毛腾敏: 北医学报, ( 4) : 305, 1981。) : 选用大白鼠, 皮下注射0.1%肾上腺素0.2ml/次, 日2次, 加冰水刺激5分钟处理1日或2日, 给药后次日, 血粘度明显升高, 血中纤维蛋白及红细胞压积亦升高。用此法连续处理2天, 隔48小时处死, 心肌出现散在性坏死灶。心肌病变能模拟克山病心肌坏死, 此模型已用于大剂量维生素C治疗克山病机制的研究。”血瘀”模型( 金惠铭等: 中华医学杂志, ( 1) : 50, 1982.
15、) ; 选用家兔, 耳缘静脉快速注射10%高分子右旋糖酐( HMWD) 生理盐水溶液, 剂量为1.5g/kg。注药后30分钟即可从微循环活体观察到血流明显减慢, 血细胞严重聚集、 微血管周围明显渗出和出血管微循环障碍表现。1224小时后微循环障碍达高峰。此模型主要用于研究微循环障碍、 中医血瘀及探讨活血化瘀药物作用原理。第二军医大学亦用此法制造”血瘀模型, 选用未孕家兔, 雌雄不构, 体重22.5kg, 10%HMWD静脉注射, 每次15ml/kg, 每周2次, 历时10周。4”血虚”模型( 贲长恩等: 中医杂志( 6) : 69, 1981.) : 选用雄性大白鼠, 体重180-250g。于
16、实验第1、 4、 7天皮下注射2%乙酰基苯肼( Acety-Phenyhydrazine,APH) 生理盐水溶液, 以每100g体重计, 第1次1ml, 第2、 3次0.5mll给药后可形成实验性溶血性贫血。红细胞与血红蛋白减少, 出现大量海氏( Heine) 小体。可维持914天。此模型适用于血虚与气虚药物的研究。5”脾虚”模型( 李传英等: 淅江中医杂志( 8) : 355, 1982) : 选用雄性大白鼠。以大黄、 玄明粉、 玄明粉水煎剂和大黄、 番泻叶的水浸泡液灌胃给药。给药后动物发生泄泻、 清瘦、 食量下降、 精神萎磨不振, 毛发欠光泽, 基本符合临床脾虚病人症状。另外还有报导选用昆
17、明种雄性小鼠, 体重1820g; 25日龄Wistar大鼠, 体重70100克; 叙利亚金黄地鼠。用大黄水浸煎剂, 小鼠0.5g/ml/日/只, 金黄地鼠每日100g体重0.71.25g/ml, 大鼠用15%大黄粉悬液35ml。胃饲法给药, 每日1次, 大鼠每日二次, 给药后第8天90%以上造型成功。6”肝郁”模型( 陈国林) : 选用大、 小白鼠。小白鼠腹腔注射艾叶注射液0.6ml( 含生药0.3g) , 每日1次, 分别于45天及60天处死。大白鼠腹腔注射艾叶注射液2ml(含生药2.0g)每日1次, 半月后改为隔日1次, 40天处死。艾叶中毒后动物易激怒, 好斗, 咬人, 进食量少, 体重
18、增加慢。小白鼠: 肝脏有灶性坏死, 以60天组较45天组为重。大白鼠: 肝细胞肿胀, 胞浆疏松出现颗粒, 门区有嗜酸细胞浸润, 中央静脉充血。7”阳虚”模型: 选雄性小白鼠, 体重2530g。以大剂量醋酸氢化可的松肌肉注射1mg/保, 每日1次, 约7次, 约7次造型成功, 适于研究补肾药的作用。也可选用2028g小鼠, 急性组织分别用利血平5、 10、 20、 50、 100、 200g/只; 亚急性组, 给500g/kg( 隔天下午) ; 均腹腔给药。亚急性组另加更生霉素74g/kg, 共7次, 亦腹腔给药, 均可100%造型成功, 适于”形寒肢冷”证发病机理研究和探讨中药( 理中汤) 作
19、用机理研究。还可给小鼠每日灌喂甲基氧嘧啶2.5mg/只或5-10mg/日, 一周左右即可有95%造型成功, 适用于观察受体与甲状腺素减少之间关系。8”阴虚”模型: 选用雄性小鼠, 体重20-30g, 甲状腺素片3mg/只/月, 利血平0.02mg/只/日共研成粉末, 以生理盐水稀释, 充分摇匀后灌胃给药。810天造型成功, 适用于研究滋阴中药作用原理。9”阴证”与”阳证”模型( 董筠一等: 陕西中医学院学报, ( 3) : 1, 1981) : 选用雄性小白鼠, 体重2030g。利血平10g( 溶于0.1ml盐水) /只/日肌注, 45天后出现类似阴证症候; 阿托品1520g/只/日肌注, ,
20、 2天后出现类似阴证症候。适于观察机体各器官系统的机能改变, 细胞水平的电生理变化以及中药或针刺对上述变化的改进情况。10”脉微欲绝”模型( 左箴等: 第二军医大学学报( 1) : 19, 1982) : 选用猫, 经股静脉注入3%戊巴比妥钠溶液, 按0.250.5ml/kg剂量造型。注药后心肌收缩力极度减弱, 近于停跳状态, 血压降至10mmHg左右, 动物股动脉搏动微弱, 几乎不能触及, 可100%造型成功, 适于观察强心升压药物, 如附子制剂及其分离物的急性效应。11”气虚”模型( 上海第二医学院: 上海中医药杂志( 5) : 8, 1964) : 选用家兔, 体重1.072.5kg,
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