ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用.docx
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1、ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用【摘要】 本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用。以RTPCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明: CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2 蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关(),与P27蛋白
2、表达呈负相关()。 G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显着性差异。结论: CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2 、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。【关键词】 ERK信号转导途径P38信号转染途径; 信号转导途径; 慢性髓系白血病Regulative Effects of ERK and P38 Signal Transduction Pathway on Cell Cycle in Chronic Myeloid Leuke
3、mia Abstract This study was aimed to investigate the regulative effect of ERK and p38 signal transduction pathway on cell cycle of CML. The mRNA and protein expression of ERK, p38,cyclin D2, cyclin E and p27 (ERK and p38 were PhosphERK and PhosphP38) in CML cells and K562 cell lines were detected by
4、 RTPCR and Western blot, respectively; cell cycle was determined by FCM, and their relationship was analyzed. The results showed that the mRNA and protein expressions of ERK, p38,cyclin D2 and cyclin E in CML cells and K562 cells increased () and the expression of p27 decreased (). There was positiv
5、e correlation between the protein expressions of cyclin D2 and the protein expreesion of ERK, p38 and cyclin E, but there was negative correlation between the protein expressions of cyclin D2 and the protein expression of p27. The percentage of cells in G0/G1 phase was decreased and the percentage o
6、f cells in S phase was increased, there was significant difference as compared with control (). It is concluded that increase of the mRNA expression and protein activity of ERK and p38 activate the cell cycleregulating proteins such as cyclin D2 ,cyclin E,p27 which results in shortening of G0/G1 pha
7、se, switching cell to S phase through G1/S check point quickly and accelerating cell cycle progression and cell proliferation, and eventually leads to occurence of CML. Key words ERK signal transduction pathway; P38 signal transduction pathway; signaling transduction pathway; chronic myeloid leukemi
8、a 慢性髓系白血病(CML)的分子生物学特点是存在bcr/abl融合基因,表达具有高酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白,它通过相关信号转导途径,影响下游的细胞周期调控分子的表达水平,进而扰乱细胞周期,与白血病细胞恶性生长和增殖有密切关系1。 Cyclin D2、cyclin E和P27是BCR/ABL通过相关信号转导途径调节细胞周期的重要靶蛋白,但其具体作用机制不清。本研究拟对CML细胞中cyclin D2、cyclin E和p27的表达状况及其与丝裂素活化蛋白激酶信号转导途径的信号分子磷酸化p38、ERK表达的相互关系进行研究,以求进一步揭示ERK和p38信号转导途径对慢性粒细胞性白血病
9、细胞周期的调控作用,为CML临床治疗的进一步探讨提供初步的理论基础。 临床资料 30例BCR/ABL阳性的CML慢性期患者,均按国内标准1、经临床血液学及细胞遗传学、分子生物学检查确诊。30例中,男性19例,女性11例,中位年龄47岁。初治21例,曾用羟基脲、干扰素治疗9例;另选20例健康人,作为正常对照,其中男性11例,女性9例,中位年龄38岁。 临床标本和细胞培养 分别抽取患者和健康人新鲜骨髓5 ml,肝素抗凝,制作6张骨髓片,其余骨髓加等量PBS稀释,用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞。获取的单个核细胞直接用于实验检测或保存于-80冰箱备用。 K562细胞株由本院中心实验室提供,
10、置于含有15%小牛血清的RPMI 1640培养液中,在37、 5% CO2、饱和湿度的恒温孵育箱中培养,采用对数生长期细胞进行实验。 细胞周期的流式细胞术检测 分别取CML患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5106个, 用PBS洗3遍,所得细胞用70%乙醇固定,不含DNA酶的RNA酶处理,碘化丙锭染色后进行流式细胞仪检测,并对获取数据进行细胞周期分析。 各组细胞中相关蛋白表达水平的Western blot检测 分别取CML患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5106个,加入1 ml蛋白裂解液(50 mmol/L TrisHCl pH=、150 mmol/L NaCl、100
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