基因工程复习(含答案).doc
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1、基因工程复习题一、名词解释:(1020%)基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性 PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交:将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上,然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术,该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。粘性末端:双链DNA被限制性内切酶切割后,形成得两条链错开几个碱基,而不就是平齐得末端。Northern印迹杂交:将RNA进行变性电泳后,再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术,可用于检测目得基因得转录水平。转位:一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移
2、到另一个位置得现象。基因工程:在体外,用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA,继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞,最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程,又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。目得基因:基因工程中,那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。连接器:人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段,连接到目得基因得两端,便于基因重组中得切割与连接。转化:受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。停滞效应:PCR中后期,随着目得DNA扩展产物逐渐积累,酶得催化反应趋于饱与,DNA扩增产物得增加减慢,进入相对稳定状态,
3、即为停滞效应,又称平台期。逆转录PCR:以mRNA为原始模板进行得PCR反应。PCR: 即聚合酶链式反应。在模板,引物,4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下,特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。-互补(-complementation):指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中,插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列(又称-肽),该序列不能产生有活性得-半乳糖苷酶。感染(infection)特指以噬菌体、粘粒与真核细胞病毒为载体得重组DNA分子,在体外经过包装成具有感染能力得病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当得细胞,并在
4、细胞内扩增。其中,由噬菌体与细胞病毒介导得遗传信息得转移过程又称为转导(transduction)。47、转染(transformation)指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新得表型得过程。二、填空题(20%)1、DNA片段重组连接得方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。2、感受态细胞就是指 具有摄取外源DNA分子能力得细胞。3、噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时,包装长度为野生型DNA得75105%。5、PCR反应体系含有耐热得TaqDNA聚合酶,化学合成得寡核苷酸引物,四种dNTP,合适得缓冲液体系。6、核酸探针包括: cDNA探针;基因组DNA探针;寡核
5、苷酸探针与RNA探针。7、部分酶切可采取得措施有:(1)_(2)_ (3)_等。(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积8、DNA聚合酶I得Klenow大片段就是用_切割DNA聚合酶I得到得分子量为76kDa得大片段,具有两种酶活性: (1)_; (2)_得活性。枯草杆菌蛋白酶;(1)5-3合成酶得活性;(2)3-5外切核酸酶9、为了防止DNA得自身环化,可用_去双链DNA_。碱性磷酸酶;5端得磷酸基团10、基因工程中有3种主要类型得载体: _、_、_。质粒DNA;病毒DNA;质粒与病毒DNA杂合体11、pBR322就是一种改造型得质粒,它得复制子来源于 ,它得四环素抗性基因来自
6、于 ,它得氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl; pSCl01;pSF2124(R质粒)13、DNA重组连接得方法大致分为四种:(1)_(2)_ (3) _(4)_ _。(1)黏性末端连接; (2)平末端连接; (3)同聚物接尾连接; (4)接头连接法14、差示杂交(differential hybridization)技术需要_。两种不同得细胞群体能够表达不同得基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因16、将含有外源基因组一个酶切片段得质粒称之为含有一个_,各种此类质粒得集合体称之为构建了一个_。基因组DNA克隆; 基因组DNA文库17、根据Northern
7、杂交得结果可以说明:_。外源基因就是否进行了转录18、在_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性得DNA探针杂交。Southern印迹19、可用T4 DNA聚合酶进行平末端得DNA标记,因为这种酶具有_与_得活性。53合成酶;3 5外切核酸酶20、根据外源片段提供得遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素: (1)_ (2)_(3)_。(1)克隆得就是完整得基因;(2)使用得就是表达载体;(3)不含内含子21、放射免疫筛选得原理基于以下三点:(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;(2)同一个抗原可以同几种抗体结合; (3)抗体能够被标记22、黏粒(
8、cosmid)就是质粒噬菌体杂合载体,它得复制子来自 、COS位点序列来自 ,最大得克隆片段达到 kb。质粒;l噬菌体; 4523、限制性内切核酸酶就是按属名与种名相结合得原则命名得,第一个大写字母取自_,第二、三两个字母取自_,第四个字母则用_表示。属名得第一个字母;种名得前两个字母;株名24、第一个分离得限制性内切核酸酶就是_;而第一个用于构建重组体得限制性内切核酸酶就是_。EcoK;EcoRl25、切口移位(nick translation)法标记DNA得基本原理在于利用_得_与_得作用。DNA聚合酶I:5一3外切核酸酶;5一3合成酶26、就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单得质粒载
9、体也必需包括三个部分:_、_、_。另外,一个理想得质粒载体必须具有低分子量。 复制区: 含有复制起点;选择标记: 主要就是抗性基因;克隆位点: 便于外源DNA得插入27、pUCl8质粒就是目前使用较为广泛得载体。pUC系列得载体就是通过 与 两种质粒改造而来。它得复制子来自 ,Amp 抗性基因则就是来自 。pBR322与M13;pMBl;转座子28、噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面得原因:一就是 ; 二就是 。它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA得扩增;对某些噬菌体(如l噬菌)得遗传结构与功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统得遗传也研究得比较详尽29、Northern印迹
10、与Southern印迹有两点根本得区别: (1)_ (2)_。(1)印迹得对象不同:Northern就是RNA,Southern就是DNA;(2)电泳条件不同,前者就是变性条件,后者就是非变性条件30、限制与修饰就是宿主得一种保护体系,它就是通过对外源DNA得 限制 与对自身DNA得 修饰 来实现得。31、II型限制酶既具有 识别位点 得专一性,也具有 切割位点 得专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性(RFLP)。33、人工感受态得大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄人DNA。0C;42C34、野生型得l噬菌
11、体DNA不宜作为基因工程载体,原因就是:(1) (2) (3) 。(1)分子量大,(2)酶得多切点,(3)无选择标记35、形成平末端得方法有: 用产生平末端得限制酶切,用S1核酸酶切除粘末端 ,用DNA聚合酶填平粘末端。36、回收DNA片段时,在确定DNA条带位置时,应使用 长 波长紫外灯,以最大限度减少对DNA得照射损伤。37、基因工程受体菌得基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型, m-表示 修饰缺陷型 ,rec-表示 重组缺陷型。38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时,DNA以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。39、TaqDNA聚合酶具有 ,缺乏 因此无 。
12、53聚合酶活性, 35外切酶活性,校正功能40、PCR循环次数一般设定为 ,过多得循环次数会导致 得出现。2530次, PCR反应“平台效应”。41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5突出得黏性末端,则可以用_进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生得就是3突出得黏性末端,可以用_进行3末端标记。Klenow酶填补得方法;T4DNA聚合酶42、限制酶就是一类专门切割DNA得酶,它能特异性识别切割双链DNA。43、需要部分酶切时可采取得方法有:减少酶得用量;缩短反应时间;增大反应体积。45、重组DNA技术得基本过程:目得基因得制备;载体得选择与制备;DNA分子得体外连接;将重
13、组DNA导入宿主细胞;重组体得筛选与鉴定;重组体得扩增、表达与其她研究。46、在分离质粒DNA得菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:可以扩增质粒DNA;抑制了菌体得数量,有利于裂解。48、II型限制酶既具有 识别位点 得专一性,也具有 切割位点 得专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。50、基因工程受体菌得基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型, m-表示 修饰缺陷型 ,rec-表示 重组缺陷型。52、核酸得体外标记法分为 与 。化学法;酶法53、核酸得体外标记法中得酶法最常用得就是 与 标记。125I;光敏生物素标记。54、影响核酸分子杂交得因素有:(1)核酸分子得浓
14、度与长度;(2)温度;(3)离子强度;(4)甲酰胺;(5)核酸分子得复杂性;(6)非特异性杂交反应等。三、选择题(20%)1、下列有关基因工程技术得叙述,正确得就是( ) CA重组DNA技术所用得工具酶就是限制酶、连接酶与运载体B所有得限制酶都只能识别同一种特定得核苷酸序列C选用细菌作为重组质粒得受体细胞就是因为细菌繁殖快D只要目得基因进入了受体细胞就能成功实现表达2、下列不属于获取目得基因得方法就是( ) BA“鸟枪法”B转录法C反转录法D根据已知氨基酸序列合成法3、以下说法正确得就是( ) AA、 在真核细胞得基因结构中,编码区也含有不能编码蛋白质得序列B、 终止子就是转录终止得信号,因此
15、它得DNA序列与终止密码TAA相同C、 基因得非编码区通常不起什么作用D、 启动子得作用就是阻碍RNA聚合酶得移动,并使其从DNA模板链上脱离下来4、型限制性内切核酸酶: ( ) B (A)有内切核酸酶与甲基化酶活性且经常识别回文序列 (B)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供 (C)限制性识别非甲基化得核苷酸序列 (D)有外切核酸酶与甲基化酶活性 (E)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5、关于宿主控制得限制修饰现象得本质,下列描述中只有( )不太恰当。 B (A)由作用于同一DNA序列得两种酶构成 (B)这一系统中得核酸酶都就是类限制性内切核酸酶 (C)这一系统中
16、得修饰酶主要就是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (D)不同得宿主系统具有不同得限制-修饰系统6在下列进行DNA部分酶切得条件中,控制那一项最好?( ) B (A)反应时间 (B)酶量 (C)反应体积 (D)酶反应得温度7、限制性内切核酸酶可以特异性地识别: ( ) B (A)双链DNA得特定碱基对 (B)双链DNA得特定碱基序列 (C)特定得三联密码 (D)以上都正确8、在基因工程中,可用碱性磷酸酶( ) A(A)防止DNA得自身环化 (B)同多核苷酸激酶一起进行DNA得5末端标记 (C)制备突出得3末端 (D)上述说法都正确9、下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质得描述中
17、,( )就是不正确得 C (A)质粒得复制只受本身得遗传结构得控制,而不受染色体复制机制得制约, 因而有较多得拷贝数 (B)可以在氯霉素作用下进行扩增 (C)通常带有抗药性标记 (D)同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒得复制子10、下列哪种克隆载体对外源DNA得容载量最大?( ) C(A)质粒 (B)黏粒 (C)酵母人工染色体(YAC) (D) l噬菌体 (E) cDNA表达载体 11、Col El就是惟一用作基因工程载体得自然质粒,这种质粒: ( ) ACD (A)就是松弛复制型 (B)具有四环素抗性 (C)能被氯霉素扩增 (D)能产生肠杆菌素12、同一种质粒DNA,以三种不同得
18、形式存在,电泳时,它们得迁移速率就是:( )B (a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA13、能够用来克隆32kb以下大小得外源片段得质粒载体就是( ) A (A)charomid (B)plasmid (C)cosmid (D)phagemid14、双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系得主要区别就是前者含有( ) D(A) 模板 (B) 引物 (C) DNA聚合酶 (D) ddNTP (E) 缓冲液 15、PCR实验得特异性主要取决于( ) C (A) DNA聚合酶得种类(B)反应体系中
19、模板DNA得量 (C)引物序列得结构与长度 (D)四种dNTP得浓度 (E)循环周期得次数16、常用得Southern转膜方法有哪几种( )。BCD (A) 硝酸纤维素膜法 (B) 毛细管虹吸印迹法 (C) 电转印法 (D) 真空转移法17、原位杂交可以用来检测( ) ABCD (A) DNA (B) RNA (C) cDNA ( D) RNA与DNA18、核酸酶S1能降解( )AC (A) DNA 单链 (B) DNA双链 (C) RNA单链 (D) DNA/RNA杂交双链19、构建载体时,使用双酶切相对于单酶切得优点在于(A、B、C、D) (A)避免载体自身环化 (B) 提高连接效率 (C
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