利用荧光显微技术研究生物单分子.pptx
《利用荧光显微技术研究生物单分子.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《利用荧光显微技术研究生物单分子.pptx(18页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、利用荧光显微技术研究生物单分子利用荧光显微技术研究生物单分子陈浩200425023 分析化学专业光学单分子方法的进展光学单分子方法的进展近20 年来,光学探测方法有了长足的进步。在80 年代出现并逐渐成熟起来的近场显微术为超衍射极限分辨成像提供了基本手段,同时也使光学显微术进入了纳米科学的领域。而共焦显微术不仅突破传统光学的衍射极限,而且为光学探测引入了第三维空间信息,使光学探测具有了层析能力,实现了真正的空间三维成像。超短脉冲激光技术直接导致了多光子荧光显微术的成功。尤其是飞秒激光激发的荧光显微术,对于提取时间分辨的信息是有力的工具。这种荧光单分子探测及单分子光谱探测与其数据处理方法的组合,
2、形成了荧光共振能量转移的探测方法。通过该方法可以获得1.5 纳米 8 纳米的空间分辨率的构像信息,达到光学方法上最高的分辨率。以上近场、共焦、荧光显微术和荧光共振能量转移四种基本技术构成了目前活跃的生物单分子探测的光学平台。Myosin V 的分子结构肌球蛋白是包含18个不同子类的一大类蛋白分子马达,但构型上都属于二聚体,有两个明显伸出的“头”,用于附着在肌球蛋白丝上,这里我们干脆称之为“腿”。Myosin V 的两种运动模型(1)在Hand-over-hand模型中,后腿向前移动了74nm,而前腿没有移动。分子本身移动了37nm,染料移动了372xnm,(如果MyosinV的结构是不对称的,
3、x为染料到轴的平均距离)。(2)在inchworm模型中,myosin 分子的所有部份都向前移动37nm,并且有一个头始终与肌球蛋白丝结合在一起。单分子荧光技术检测运动模型把一个荧光分子标记在myosin V 的一条腿上,再用荧光显微镜来对标记的荧光分子进行检测。据此来研究myosin V的迈步过程。具体检测技术:全内反射荧光显微共聚焦荧光显微远场和近场光学检测主动或被动发光的原因是物体受激发之后,内部电偶极跃迁引起电磁场的辐射,电磁波从物体表面向自由空间传播。物体表面以外的场分布可以划分为两个区域:距物体表面仅几个波长内区域,这一区域称为近场区域;近场区域以外到无穷远是远场区。常规激发和收集
4、均处于远场区域。在远场区域只存在可以向无穷远传播的远场波(也称为辐射波)。近场区域光场包括了限于表面仅几个波长内存在的成分,即近场波(也称为非辐射波);又包括远场波。近场波也被称为衰逝波,(隐失波),其强度随离开表面距离指数衰减,不能在自由空间存在。近场波体现了光在传播过程中,遇到空间光学性质不连续时,光波的空间瞬态变化,这种变化很快在空间衰减,它反映了空间光学性质的不连续性。全内反射显微光在光密介质中传输,如果它以大于临界角的角度入射到另一个折射率较小的介质上,光就会发生全反射。实际上,即使当角度 Hc,仍然会有一小部分能量以隐失波的形式穿透到液体介质中,在“近场”情况下,光沿平行界面传播。
5、由全内反射产生近场激发照明之后,利用共焦或宽场去取像,即构成荧光标记全内反射荧光显微镜。全内反射显微术典型的垂直照明深度全内反射显微术典型的垂直照明深度100nm100nm。这么薄的光学层析层切片意。这么薄的光学层析层切片意味着信噪比比共焦系统好得多味着信噪比比共焦系统好得多,细胞的光损伤和光漂白也很小。其图像是通过细胞的光损伤和光漂白也很小。其图像是通过CCD CCD 相机来捕获的。这种仪器很灵敏或成像速度很快相机来捕获的。这种仪器很灵敏或成像速度很快(但很少有但很少有CCD CCD 相机兼有以上两个优点相机兼有以上两个优点),),目前可达到的量子产率已到目前可达到的量子产率已到 80%,8
6、0%,成像速率成像速率200200帧帧/秒。秒。共聚焦显微在光学成像系统中利用两个焦点来生成物体的象。一个焦点为使用显微镜物镜把入射的激光在物体表面或内部形成的。这个焦点便是一个象点,也是一个点光源。它可以是反射的光,也可以是物体受激发发出的荧光。这一象点再通过另一个物镜成像在针孔孔径上,则生成了第二个焦点。这两个焦点是共轭的(共焦)。通过沿x或y方向一点点地生成象点,综合成平面图像,再调节z方向生成象点,通过计算机合成三维图像。所以共焦显微镜具有对细胞和光漂白区域进行深度三维成像的能力。Hand-over-hand VS inchworm纳米精度荧光成像技术FIONA Fluorescenc
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 利用 荧光 显微 技术研究 生物 分子
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【w****g】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【w****g】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。