第三章-细菌的遗传与变异.ppt

第三章第三章 细菌细菌(xjn)(xjn)的生长和遗传变的生长和遗传变异异第一页，共九十八页。第一节第一节 细菌细菌(xjn)(xjn)的生长及其特的生长及其特性性n n细菌(xjn)(xjn)在适宜的环境条件下，不断吸收营养物质，按照自己的代谢方式进行新陈代谢活动。正正正正常常常常情情情情况况况况下下下下，同同同同化化化化作作作作用用用用大大大大于于于于异异异异化化化化作作作作用用用用，细细细细菌菌菌菌大大大大量量量量繁繁繁繁殖殖殖殖，数量增多的现象叫做生长。数量增多的现象叫做生长。数量增多的现象叫做生长。数量增多的现象叫做生长。n n这里的生长是细菌群体数量的增长。这里的生长是细菌群体数量的增长。第二页，共九十八页。n n细菌个体生长到一定阶段，就会以二分裂的方式形成二个细菌个体生长到一定阶段，就会以二分裂的方式形成二个细菌个体生长到一定阶段，就会以二分裂的方式形成二个细菌个体生长到一定阶段，就会以二分裂的方式形成二个子细胞，细菌个体数目增加子细胞，细菌个体数目增加子细胞，细菌个体数目增加子细胞，细菌个体数目增加，这种繁殖方式似乎与动植物的这种繁殖方式似乎与动植物的这种繁殖方式似乎与动植物的这种繁殖方式似乎与动植物的繁殖方式大不相同，繁殖方式大不相同，繁殖方式大不相同，繁殖方式大不相同，但如果但如果但如果但如果(rgu)(rgu)我们将细菌看作是一个植我们将细菌看作是一个植我们将细菌看作是一个植我们将细菌看作是一个植物的种子或动物的受精卵，把细菌繁殖产生的群体作为物的种子或动物的受精卵，把细菌繁殖产生的群体作为物的种子或动物的受精卵，把细菌繁殖产生的群体作为物的种子或动物的受精卵，把细菌繁殖产生的群体作为整体来考虑的话，细菌与其他生物则是完全相同的。整体来考虑的话，细菌与其他生物则是完全相同的。整体来考虑的话，细菌与其他生物则是完全相同的。整体来考虑的话，细菌与其他生物则是完全相同的。细菌细菌细菌细菌更像是一个更像是一个更像是一个更像是一个“没有固定形状，没有组织分化，可分可合没有固定形状，没有组织分化，可分可合没有固定形状，没有组织分化，可分可合没有固定形状，没有组织分化，可分可合”的多细的多细的多细的多细胞生物胞生物胞生物胞生物，更象是特殊植物，这里之所以说它是植物是因为只要更象是特殊植物，这里之所以说它是植物是因为只要更象是特殊植物，这里之所以说它是植物是因为只要更象是特殊植物，这里之所以说它是植物是因为只要给以合适的条件细菌也可以像植物一样永远生长下去。给以合适的条件细菌也可以像植物一样永远生长下去。给以合适的条件细菌也可以像植物一样永远生长下去。给以合适的条件细菌也可以像植物一样永远生长下去。n n各类细菌都是抱团群居，各类细菌都是抱团群居，各类细菌都是抱团群居，各类细菌都是抱团群居，研究表明群居的细菌获得营养的能力研究表明群居的细菌获得营养的能力研究表明群居的细菌获得营养的能力研究表明群居的细菌获得营养的能力大大高于游离的细菌，同时群居的细菌还象高等动植物一样大大高于游离的细菌，同时群居的细菌还象高等动植物一样大大高于游离的细菌，同时群居的细菌还象高等动植物一样大大高于游离的细菌，同时群居的细菌还象高等动植物一样释放类似激素的调节因子，使群体主动适应环境的变化，并释放类似激素的调节因子，使群体主动适应环境的变化，并释放类似激素的调节因子，使群体主动适应环境的变化，并释放类似激素的调节因子，使群体主动适应环境的变化，并对环境产生影响，因此研究单个细菌的生长意义不大，对环境产生影响，因此研究单个细菌的生长意义不大，对环境产生影响，因此研究单个细菌的生长意义不大，对环境产生影响，因此研究单个细菌的生长意义不大，通常通常通常通常都是将细菌群体作为研究对象，考察细菌群体的生长规律，都是将细菌群体作为研究对象，考察细菌群体的生长规律，都是将细菌群体作为研究对象，考察细菌群体的生长规律，都是将细菌群体作为研究对象，考察细菌群体的生长规律，“生、老、病、死生、老、病、死生、老、病、死生、老、病、死”。n n 在介绍细菌的生长规律之前，先介绍细菌生长数量的测定在介绍细菌的生长规律之前，先介绍细菌生长数量的测定在介绍细菌的生长规律之前，先介绍细菌生长数量的测定在介绍细菌的生长规律之前，先介绍细菌生长数量的测定方法。方法。方法。方法。第三页，共九十八页。一、细菌一、细菌(xjn)(xjn)生长测定方法生长测定方法n n（1 1）直接测定）直接测定）直接测定）直接测定 n n 直直接接测测定定是是常常用用的的细细菌菌生生长长(shngzhng)(shngzhng)测测定定方方法法，它它它它借借借借助助助助显显显显微微微微镜镜镜镜直直直直接接接接观观观观察察察察计计计计数数数数，其其其其优优优优点点点点是是是是测测测测定定定定过过过过程程程程快快快快速速速速，缺缺缺缺点点点点是是是是不不不不能能能能区区区区分分分分细细细细菌菌菌菌的的的的死死死死活活活活。直直接接测测定定法法根根据据不不同同的的测测定定方方法法原原理理，可可以以分分成成以以下下几类：几类：n n1.1.涂片染色法涂片染色法涂片染色法涂片染色法 n n 将将已已知知体体积积(0 00101mlml)的的待待测测样样品品，均均匀匀地地涂涂布布在在载载玻玻片片的的已已知知面面积积内内(1 1cmcm2 2)，经经固固定定染染色色后后，在在显显微微镜镜下下选选择择若若干干个个视视野野计计算算细细胞胞的的数数量量，每每个个视视野野的的直直径径和和面面积积、对对应应的的细细菌菌体体积积用用目目镜镜测测微微尺尺测测出出，结结合合视视野野中中的的细细菌菌数数量量从从而而推推算算0 00101mlml菌样的细菌数量。菌样的细菌数量。第四页，共九十八页。涂片涂片(t pin)(t pin)染色法染色法第五页，共九十八页。2计数器测定法计数器测定法将菌液滴在血球计数板将菌液滴在血球计数板0 01 1mlml 的计数格中，细菌被固定的计数格中，细菌被固定(gdng)染色后，在显微镜下选择数出若干个小格中的细菌数目，（一染色后，在显微镜下选择数出若干个小格中的细菌数目，（一般数般数125个小格），根据比例关系折算出单位体积菌液中细菌的个小格），根据比例关系折算出单位体积菌液中细菌的数量。数量。第六页，共九十八页。例如数了例如数了125个小格中有个小格中有90个细菌则个细菌则 (90125)0.0025=288个个/ml菌菌液液中中细细菌菌数数目目就就为为288个个/ml。这这种种方方法法只只只只能能能能测测测测定定定定个个个个体体体体较较较较大大大大的的的的细细细细菌菌菌菌，细细菌菌个个体体r若若太太小小，则则由由于于每每一一小小格格中中细细菌菌层层层层(cn cn)叠加，相互遮挡，难以准确计数。若适当稀释，效果较好。叠加，相互遮挡，难以准确计数。若适当稀释，效果较好。第七页，共九十八页。3比例比例(bl)(bl)计数法计数法n n将将将将待待待待测测测测样样样样品品品品溶溶溶溶液液液液与与与与等等等等体体体体积积积积的的的的血血血血液液液液(xuy)(xuy)混混混混合合合合，然然然然后后后后涂涂涂涂片片片片，在在在在显显显显微微微微镜镜镜镜下下下下测测测测定定定定细细细细菌菌菌菌与与与与红红红红血血血血球球球球数数数数的的的的比比比比例例例例，因因因因血血血血液液液液(xuy)(xuy)中中中中的的的的红红红红血血血血球球球球数数数数已已已已知知知知(男男男男性性性性400500400500万万万万个个个个mlml，女女女女性性性性350450350450万万万万个个个个mlml)，由由由由此此此此可可可可以以以以测测测测得得得得细菌数量。细菌数量。细菌数量。细菌数量。第八页，共九十八页。4比浊计数法比浊计数法n n这是这是这是这是测定悬浮细胞的快速方法测定悬浮细胞的快速方法测定悬浮细胞的快速方法测定悬浮细胞的快速方法。n n其其其其原原原原理理理理是是是是细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞是是是是不不不不完完完完全全全全透透透透光光光光的的的的，光光光光束束束束通通通通过过过过悬悬悬悬浮浮浮浮液液液液时时时时会会会会引引引引起起起起光光光光的的的的散散散散射射射射或或或或吸吸吸吸收收收收，降降降降低低低低透透透透光光光光度度度度，在在在在一一一一定定定定范范范范围围围围内内内内透透透透光光光光度度度度与与与与溶溶溶溶液的混浊度即细胞浓度成正比，藉此可以测定细菌浓度。液的混浊度即细胞浓度成正比，藉此可以测定细菌浓度。液的混浊度即细胞浓度成正比，藉此可以测定细菌浓度。液的混浊度即细胞浓度成正比，藉此可以测定细菌浓度。n n采采采采用用用用这这这这种种种种方方方方法法法法时时时时；为为为为了了了了得得得得到到到到实实实实际际际际的的的的细细细细胞胞胞胞绝绝绝绝对对对对含含含含量量量量，通通通通常常常常须须须须将将将将已已已已知知知知细细细细胞胞胞胞浓浓浓浓度度度度的的的的样样样样品品品品按按按按上上上上述述述述测测测测定定定定程程程程序序序序制制制制成成成成标标标标准准准准(biozhn)(biozhn)曲曲曲曲线线线线，然然然然后后后后根根根根据据据据透透透透光光光光度度度度或或或或光光光光密密密密度度度度值值值值从从从从标标标标准准准准(biozhn)(biozhn)曲线中直接查得细菌含量。曲线中直接查得细菌含量。曲线中直接查得细菌含量。曲线中直接查得细菌含量。第九页，共九十八页。（1）制标准）制标准(biozhn)(biozhn)曲线曲线n n（2）测定菌液浊度，查表得出）测定菌液浊度，查表得出(d ch)(d ch)细菌数量细菌数量第十页，共九十八页。（二）间接（二）间接(jin ji)(jin ji)计数法计数法n n间间接接(jin(jin ji)ji)计计数数法法又又称称活活菌菌计计数数法法。它它是是通通过过测测定定样样品品中中活活的的细细菌菌数数量量来来间间接接地地表表示示细细菌菌的的含含量量。这这种种方方法法优优点点在在于于只只计计数数样样品品中中的的活活细细菌菌数数目目，缺缺点点在在于于测测定定所所需需的的时时间间较较长长，手手续续繁繁琐琐。它分下述几种方法：它分下述几种方法：n n1.平板计数法平板计数法n n将待测细菌样品将待测细菌样品先作先作10倍梯度稀释倍梯度稀释，然后，然后取相应稀释度的样品取相应稀释度的样品涂布于固体平板培养涂布于固体平板培养基上，或与未经融化基上，或与未经融化的固体培养基混合、的固体培养基混合、摇匀，培养一定时间摇匀，培养一定时间后观察并计数后观察并计数(j sh)(j sh)生生长的菌数长的菌数，最终根据，最终根据细菌数和取样量计算细菌数和取样量计算出细菌浓度。出细菌浓度。第十一页，共九十八页。第十二页，共九十八页。各各各各取取取取1 1mlml，均均均均匀匀匀匀(jnyn)(jnyn)涂涂涂涂布布布布于固体培养基平板上于固体培养基平板上于固体培养基平板上于固体培养基平板上培培培培养养养养，每每每每一一一一个个个个(y(y)细细细细菌菌菌菌会会会会 生成一个生成一个生成一个生成一个(y)(y)菌落菌落菌落菌落稀稀稀稀释释释释度度度度过过过过小小小小，菌菌菌菌落落落落(jnlu)(jnlu)密密密密集集集集无无无无法法法法计计计计数数数数可可可可以以以以计计计计数数数数，但但但但 数数数数 量量量量 过过过过多多多多，费费费费 时时时时费力费力费力费力数量合数量合数量合数量合适，统适，统适，统适，统计计算，计计算，计计算，计计算，作为结作为结作为结作为结果果果果数数数数 量量量量 太太太太 少少少少，误误误误 差差差差 因因因因 素素素素 太太太太大大大大，不不不不 做做做做 计计计计数数数数第十三页，共九十八页。n n一一般般计计数数平平板板的的细细菌菌生生长长菌菌落落数数以以30300个为宜。个为宜。n n细菌数量细菌数量=数出的菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为100个个n n则则n n细菌数量细菌数量=100/10-5=107个个/mLn n 平平板板计计数数法法是是采采用用(ciyng)(ciyng)最最广广的的一一种种活活菌菌计数法计数法。第十四页，共九十八页。2.液体液体(yt)(yt)计数法计数法n n液液液液体体体体计计计计数数数数法法法法是是是是根根根根据据据据统统统统计计计计学学学学原原原原理理理理设设设设计计计计的的的的一一一一种种种种方方方方法法法法。具具具具体体体体做做做做法法法法是是是是：先先先先将将将将待待待待测测测测菌菌菌菌液液液液作作作作1010倍倍倍倍梯梯梯梯 度度度度 稀稀稀稀 释释释释，然然然然 后后后后 取取取取 相相相相 应应应应(xingyng)(xingyng)稀稀稀稀释释释释度度度度的的的的样样样样品品品品分分分分别别别别接接接接种种种种到到到到3 3管管管管或或或或5 5管管管管一一一一组组组组液液液液体体体体培培培培养养养养基基基基中中中中，培培培培养养养养一一一一定定定定时时时时间间间间后后后后，观观观观察察察察各各各各管管管管及及及及各各各各组组组组中中中中细细细细菌菌菌菌是是是是否否否否生生生生长长长长、记记记记录录录录结结结结果果果果，再再再再查查查查与与与与之之之之匹匹匹匹配配配配的的的的统统统统计计计计表表表表，即即即即最最最最可可可可能能能能数数数数表表表表(MPN)MPN)，算算算算出出出出细细细细菌菌菌菌的的的的最最最最终终终终含含含含量量量量。因因因因此此此此，这这这这种种种种方方方方法法法法又又又又叫叫叫叫最最最最可可可可能能能能数数数数法法法法或或或或MPNMPN法。法。法。法。n n例如例如例如例如测定硫酸盐还原菌的测定硫酸盐还原菌的测定硫酸盐还原菌的测定硫酸盐还原菌的数量数量数量数量，这种菌是厌氧菌，生，这种菌是厌氧菌，生，这种菌是厌氧菌，生，这种菌是厌氧菌，生长中形成了硫化氢气体，这长中形成了硫化氢气体，这长中形成了硫化氢气体，这长中形成了硫化氢气体，这些硫化氢会与铁生成大量些硫化氢会与铁生成大量些硫化氢会与铁生成大量些硫化氢会与铁生成大量黑黑黑黑色的硫化亚铁沉淀色的硫化亚铁沉淀色的硫化亚铁沉淀色的硫化亚铁沉淀，在显微，在显微，在显微，在显微镜下这些沉淀很难与细菌镜下这些沉淀很难与细菌镜下这些沉淀很难与细菌镜下这些沉淀很难与细菌区分；由于它是厌氧菌，区分；由于它是厌氧菌，区分；由于它是厌氧菌，区分；由于它是厌氧菌，不能在空气状态下生长，不能在空气状态下生长，不能在空气状态下生长，不能在空气状态下生长，因此平板培养计数也无法因此平板培养计数也无法因此平板培养计数也无法因此平板培养计数也无法使用使用使用使用(shyng)(shyng)，对这类菌可以对这类菌可以对这类菌可以对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化利用它们生长时产生的硫化利用它们生长时产生的硫化利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行液体培养，亚铁黑色特征进行液体培养，亚铁黑色特征进行液体培养，亚铁黑色特征进行液体培养，按按按按MPNMPN法进行计数。法进行计数。法进行计数。法进行计数。第十五页，共九十八页。（1）10倍梯度倍梯度(t d)(t d)稀释稀释第十六页，共九十八页。第十七页，共九十八页。(3)统计统计(tngj)(tngj)、查表、计算、查表、计算 n n统计确定统计确定(qudng)(qudng)数量指数量指标标n n取生长的管数最多的且稀释度取生长的管数最多的且稀释度取生长的管数最多的且稀释度取生长的管数最多的且稀释度最高稀释度的生长管中生长的最高稀释度的生长管中生长的最高稀释度的生长管中生长的最高稀释度的生长管中生长的管数，为数量指标的第一位数管数，为数量指标的第一位数管数，为数量指标的第一位数管数，为数量指标的第一位数字，后面两个稀释度的生长管字，后面两个稀释度的生长管字，后面两个稀释度的生长管字，后面两个稀释度的生长管数后两位数数后两位数数后两位数数后两位数，就上例情况而言，就上例情况而言，就上例情况而言，就上例情况而言，3 3个重复生长的个重复生长的个重复生长的个重复生长的1010-3-3和和和和1010-4-4两个两个两个两个稀释度，但两者中高稀释度稀释度，但两者中高稀释度稀释度，但两者中高稀释度稀释度，但两者中高稀释度的是的是的是的是1010-4-4，其生长管数，其生长管数，其生长管数，其生长管数“3 3”为为为为数量指标的第一位数字；第数量指标的第一位数字；第数量指标的第一位数字；第数量指标的第一位数字；第二和第三位数则为二和第三位数则为二和第三位数则为二和第三位数则为2 2和和和和0 0。因。因。因。因此所得的数量指标为此所得的数量指标为此所得的数量指标为此所得的数量指标为“320320”。n n查表查表n n所所所所查查查查的的的的统统统统计计计计表表表表是是是是通通通通过过过过其其其其他他他他精精精精确确确确的的的的计计计计数数数数方方方方法法法法，确确确确定定定定的的的的各各各各种种种种数数数数量量量量指指指指标标标标时时时时细细细细菌菌菌菌(xjn)(xjn)数数数数量量量量的的的的可可可可能能能能的的的的最最最最大大大大值值值值，在在在在确确确确定定定定了了了了数数数数量量量量指指指指标标标标后后后后，可可可可从从从从MPNMPN三三三三管管管管法法法法统统统统计计计计表表表表查查查查相相相相应应应应的的的的细细细细菌菌菌菌最最最最大可能数量。大可能数量。大可能数量。大可能数量。第十八页，共九十八页。MPN三管法测数统计表三管法测数统计表上面上面上面上面(shng min)(shng min)例子中数量指标例子中数量指标例子中数量指标例子中数量指标“320”“320”对应的细菌最大可能数为对应的细菌最大可能数为对应的细菌最大可能数为对应的细菌最大可能数为9.59.5个菌个菌个菌个菌/毫毫毫毫升。升。升。升。杂质过多的污水杂质过多的污水杂质过多的污水杂质过多的污水不适宜不适宜不适宜不适宜(shy)(shy)用其他方法用其他方法用其他方法用其他方法测定大肠杆菌测定大肠杆菌测定大肠杆菌测定大肠杆菌，同样可以，同样可以，同样可以，同样可以MPNMPN法进行测定，除法进行测定，除法进行测定，除法进行测定，除此之外，此之外，此之外，此之外，厌氧的铁细菌厌氧的铁细菌厌氧的铁细菌厌氧的铁细菌也只能用这种方法进行数量统计。也只能用这种方法进行数量统计。也只能用这种方法进行数量统计。也只能用这种方法进行数量统计。第十九页，共九十八页。3.薄膜计数法薄膜计数法n n对于某些细菌对于某些细菌对于某些细菌对于某些细菌(xjn)(xjn)含量较低含量较低含量较低含量较低的样品的样品的样品的样品(如空气或饮用水如空气或饮用水如空气或饮用水如空气或饮用水)，可，可，可，可采用薄膜计数法。采用薄膜计数法。采用薄膜计数法。采用薄膜计数法。将待测样将待测样将待测样将待测样品通过带有许多小孔但又不品通过带有许多小孔但又不品通过带有许多小孔但又不品通过带有许多小孔但又不让细菌透过的微孔滤膜，让细菌透过的微孔滤膜，让细菌透过的微孔滤膜，让细菌透过的微孔滤膜，藉藉藉藉助膜的作用将细菌浓缩，再将助膜的作用将细菌浓缩，再将助膜的作用将细菌浓缩，再将助膜的作用将细菌浓缩，再将膜放于固体培养基表面培养，膜放于固体培养基表面培养，膜放于固体培养基表面培养，膜放于固体培养基表面培养，然后类似于平板计数那样计算然后类似于平板计数那样计算然后类似于平板计数那样计算然后类似于平板计数那样计算结果结果结果结果。这种计数法。这种计数法。这种计数法。这种计数法要求样品要求样品要求样品要求样品中不得含有过多的悬浮性固中不得含有过多的悬浮性固中不得含有过多的悬浮性固中不得含有过多的悬浮性固体或小颗粒体或小颗粒体或小颗粒体或小颗粒。（1）抽滤）抽滤第二十页，共九十八页。（2）滤膜培养）滤膜培养(piyng)(piyng)n n（3）统计计数）统计计数n n样品中的细菌数量样品中的细菌数量样品中的细菌数量样品中的细菌数量=菌落数菌落数菌落数菌落数 抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数抽滤样品的体积数n n例如例如例如例如 上图测出上图测出上图测出上图测出5 5个菌落，抽滤了个菌落，抽滤了个菌落，抽滤了个菌落，抽滤了100100mlml自来水自来水自来水自来水n n则则则则 n n自来水中的细菌数自来水中的细菌数自来水中的细菌数自来水中的细菌数=5100=5100ml=50ml=50个个个个/L L自来水自来水自来水自来水n n 上上上上述述述述各各各各种种种种活活活活菌菌菌菌计计计计数数数数法法法法中中中中，根根根根本本本本原原原原理理理理都都都都是是是是利利利利用用用用一一一一个个个个细细细细菌菌菌菌可可可可以以以以繁繁繁繁殖殖殖殖生生生生成成成成一一一一个个个个菌菌菌菌落落落落的的的的特特特特点点点点。因因因因此此此此被被被被测测测测的的的的细细细细菌菌菌菌都都都都应应应应处处处处于于于于均均均均匀匀匀匀(jnyn)(jnyn)分分分分散散散散的的的的悬悬悬悬浮浮浮浮状状状状态态态态。对对对对于于于于本本本本身身身身为为为为絮絮絮絮体体体体或或或或颗颗颗颗粒粒粒粒状状状状的的的的细细细细菌菌菌菌样样样样品品品品，如如如如好好好好氧氧氧氧水水水水处处处处理理理理中中中中的的的的活活活活性性性性污污污污泥泥泥泥，在在在在测测测测定定定定计计计计数数数数之之之之前前前前要要要要采采采采取取取取预预预预处处处处理理理理方方方方法法法法(如如如如匀匀匀匀浆浆浆浆器器器器捣捣捣捣碎碎碎碎等等等等)进进进进行行行行强强强强化化化化分分分分散。散。散。散。第二十一页，共九十八页。(三三)重量重量(zhngling)(zhngling)法法n n细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞尽尽尽尽管管管管很很很很微微微微小小小小，但但但但是是是是仍仍仍仍然然然然具具具具有有有有一一一一定定定定的的的的体体体体积积积积和和和和重重重重量量量量，在在在在细细细细菌菌菌菌生生生生长长长长过过过过程程程程中中中中，测测测测定定定定单单单单位位位位体体体体积积积积液液液液体体体体中中中中细细细细菌菌菌菌群群群群体体体体重重重重量量量量变变变变化化化化直直直直接接接接表表表表示示示示细菌生长数量的方法称为重量法。细菌生长数量的方法称为重量法。细菌生长数量的方法称为重量法。细菌生长数量的方法称为重量法。n n1.1.测定细胞干重法测定细胞干重法测定细胞干重法测定细胞干重法n n测定干重时，需先将细菌测定干重时，需先将细菌测定干重时，需先将细菌测定干重时，需先将细菌分离分离分离分离，再，再，再，再烘干称量烘干称量烘干称量烘干称量。分离可采用离心法或分离可采用离心法或分离可采用离心法或分离可采用离心法或过滤法过滤法过滤法过滤法。取已经培养一段时间的待测细菌样品，用离心机收集。取已经培养一段时间的待测细菌样品，用离心机收集。取已经培养一段时间的待测细菌样品，用离心机收集。取已经培养一段时间的待测细菌样品，用离心机收集(shuj)(shuj)生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细菌细胞，菌细胞，菌细胞，菌细胞，然后在然后在然后在然后在105105110110下进行干燥下进行干燥下进行干燥下进行干燥，称取干燥后的重量，以此，称取干燥后的重量，以此，称取干燥后的重量，以此，称取干燥后的重量，以此代表细菌生长量的多少。从细菌细胞的化学组分可知，干重约为湿代表细菌生长量的多少。从细菌细胞的化学组分可知，干重约为湿代表细菌生长量的多少。从细菌细胞的化学组分可知，干重约为湿代表细菌生长量的多少。从细菌细胞的化学组分可知，干重约为湿重的重的重的重的10102020。原原原原核细菌的细胞重量是核细菌的细胞重量是核细菌的细胞重量是核细菌的细胞重量是1010-15-151010-11-11g/g/个细胞个细胞个细胞个细胞，真真真真核核核核单细胞微生物重量为单细胞微生物重量为单细胞微生物重量为单细胞微生物重量为1010-11-111010-7-7g/g/个细胞个细胞个细胞个细胞。第二十二页，共九十八页。n n水水水水处处处处理理理理工工工工程程程程设设设设施施施施中中中中的的的的细细细细菌菌菌菌生生生生长长长长量量量量通通通通常常常常采采采采用用用用这这这这种种种种细细细细胞胞胞胞干干干干重重重重测测测测定定定定法法法法。这这这这种种种种方方方方法法法法实实实实际际际际上上上上测测测测得得得得的的的的是是是是水水水水中中中中悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物重重重重量量量量，它它它它是是是是将将将将细细细细菌菌菌菌作作作作为为为为(zuwi)(zuwi)所所所所有有有有悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物来来来来进进进进行行行行测测测测定定定定，如如如如果果果果水水水水中中中中非非非非细细细细菌菌菌菌类类类类的的的的悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。n n非非非非细细细细菌菌菌菌的的的的悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物通通通通常常常常大大大大部部部部分分分分是是是是一一一一些些些些固固固固体体体体无无无无机机机机物物物物及及及及少少少少量量量量的的的的油油油油类类类类等等等等有有有有机机机机物物物物，有有有有机机机机物物物物与与与与无无无无机机机机物物物物在在在在物物物物理理理理性性性性质质质质上上上上有有有有一一一一个个个个最最最最大大大大的的的的区区区区别别别别，即即即即在在在在很很很很高高高高的的的的温温温温度度度度下下下下，有有有有机机机机物物物物会会会会被被被被空空空空气气气气中中中中的的的的氧氧氧氧气气气气彻彻彻彻底底底底氧氧氧氧化化化化为为为为COCO2 2和和和和HH2 2OO，只只只只留留留留下下下下非非非非常常常常少少少少的的的的残残残残渣渣渣渣，而而而而无无无无机机机机物物物物化化化化学学学学性性性性质质质质稳稳稳稳定定定定，高高高高温温温温下下下下不不不不会会会会分分分分解解解解，这这这这样样样样我我我我们们们们可可可可以以以以利利利利用用用用高高高高温温温温灼灼灼灼烧烧烧烧的的的的方法来区分细菌与固体无机物方法来区分细菌与固体无机物方法来区分细菌与固体无机物方法来区分细菌与固体无机物。第二十三页，共九十八页。（1）悬浮物中绝大多数为细菌）悬浮物中绝大多数为细菌(xjn)(xjn)时时n n细胞细胞(xbo)(xbo)数目数目=细菌群体的重量细菌群体的重量个体细菌的平均重个体细菌的平均重量量第二十四页，共九十八页。（2）除细菌外还有大量）除细菌外还有大量(dling)(dling)无机悬浮物无机悬浮物时时n n W1 W2n n细菌细菌(xjn)(xjn)群体的重量群体的重量=W2W1n n细胞数目细胞数目=细菌群体的重量细菌群体的重量个体细菌的平均重量个体细菌的平均重量第二十五页，共九十八页。（3）除细菌）除细菌(xjn)(xjn)外还有大量有机悬浮物外还有大量有机悬浮物时时n n过过过过多多多多的的的的有有有有机机机机物物物物悬悬悬悬浮浮浮浮物物物物会会会会对对对对测测测测定定定定结结结结果果果果干干干干扰扰扰扰(gnro)(gnro)很很很很大大大大，此此此此时不能用重量法，应改用其他方法。时不能用重量法，应改用其他方法。时不能用重量法，应改用其他方法。时不能用重量法，应改用其他方法。n n总总体体来来说说重重重重量量量量法法法法方方法法较较之之其其他他方方法法误误误误差差差差较较较较大大大大，一一一一般般般般只能作为只能作为只能作为只能作为粗率估计粗率估计的计数方法的计数方法。第二十六页，共九十八页。2.细胞细胞(xbo)(xbo)含氮量法含氮量法n n所所所所有有有有生生生生物物物物包包包包括括括括细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞内内内内的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质氮氮氮氮含含含含量量量量比比比比较较较较稳稳稳稳定定定定，一一一一般般般般在在在在15151616，平平平平均均均均为为为为1616。根根根根据据据据样样样样品品品品中中中中属属属属于于于于有有有有机机机机来来来来源源源源的的的的氮氮氮氮含含含含量量量量测测测测定定定定结结结结果果果果，就可以求出细菌生长量的多少就可以求出细菌生长量的多少就可以求出细菌生长量的多少就可以求出细菌生长量的多少。n n这这这这种种种种方方方方法法法法首首首首先先先先确确确确定定定定三三三三项项项项已已已已知知知知数数数数，细细细细菌菌菌菌中中中中的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质平平平平均均均均含含含含量量量量、水水水水样样样样中中中中的氮来源、水样中的有机氮含量的氮来源、水样中的有机氮含量的氮来源、水样中的有机氮含量的氮来源、水样中的有机氮含量。n n细细细细菌菌菌菌中中中中的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质含含含含量量量量可可可可以以以以通通通通过过过过实实实实验验验验室室室室纯纯纯纯细细细细菌菌菌菌的的的的分分分分离离离离破破破破碎碎碎碎及及及及氮氮氮氮含含含含量量量量测测测测定定定定来来来来得得得得出出出出；水水水水样样样样中中中中的的的的氮氮氮氮来来来来源源源源可可可可通通通通过过过过分分分分析析析析水水水水的的的的来来来来源源源源进进进进行行行行定定定定性性性性分分分分析析析析，如如如如细细细细菌菌菌菌培培培培养养养养液液液液中中中中起起起起始始始始的的的的成成成成分分分分是是是是无无无无机机机机氮氮氮氮化化化化合合合合物物物物则则则则水水水水样样样样中中中中的的的的有有有有机机机机氮氮氮氮都都都都来来来来源源源源于于于于细细细细菌菌菌菌的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质，这这这这种种种种情情情情况况况况下下下下通通通通过过过过凯凯凯凯氏氏氏氏定定定定氮氮氮氮测测测测定定定定出出出出的的的的有有有有机机机机氮氮氮氮含含含含量量量量就就就就是是是是细细细细菌菌菌菌中中中中的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质含含含含量量量量，继继继继而而而而通通通通过过过过计计计计算算算算得得得得出出出出水水水水中中中中的的的的细细细细菌菌菌菌数量。数量。数量。数量。n n细菌的数目细菌的数目细菌的数目细菌的数目=有机氮含量有机氮含量有机氮含量有机氮含量16%16%单个细胞的蛋白质含量单个细胞的蛋白质含量单个细胞的蛋白质含量单个细胞的蛋白质含量n n如如如如果果果果水水水水中中中中非非非非细细细细菌菌菌菌的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质比比比比例例例例过过过过大大大大，如如如如屠屠屠屠宰宰宰宰厂厂厂厂废废废废水水水水(fishu)(fishu)及及及及食食食食品品品品加加加加工工工工厂厂厂厂废废废废水水水水(fishu)(fishu)，这这这这时时时时细细细细菌菌菌菌与与与与游游游游离离离离蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质难难难难以以以以区区区区分分分分，这这这这种种种种方法不易参用。方法不易参用。方法不易参用。方法不易参用。第二十七页，共九十八页。3.DNA含量含量(hnling)(hnling)法法n n这种方法与细胞含氮量法思路是一样的，这种方法与细胞含氮量法思路是一样的，不同不同的细菌的细菌(xjn)(xjn)细胞细胞DNA含量是不同的，但同种细含量是不同的，但同种细菌的菌的DNA含量却是基本一致含量却是基本一致。利用这一特性，。利用这一特性，可以通过测定可以通过测定DNA的含量来表示细菌的生长量，的含量来表示细菌的生长量，故可采用适当的故可采用适当的荧光指示剂荧光指示剂或或染色剂染色剂与菌体与菌体DNA作用，用荧光比色或分光光度法测得作用，用荧光比色或分光光度法测得DNA的含量。的含量。n n这种方法对样品纯度以及仪器和人员的要求较这种方法对样品纯度以及仪器和人员的要求较高，通常只作为少量细菌纯培养时细菌数量的高，通常只作为少量细菌纯培养时细菌数量的测定，条件合适时，测定，条件合适时，这种方法的精确性是非常这种方法的精确性是非常高的。高的。第二十八页，共九十八页。(四四)其它生理其它生理(shngl)(shngl)生化指标法生化指标法n n细细细细菌菌菌菌的的的的生生生生长长长长生生生生命命命命活活活活动动动动过过过过程程程程中中中中，不不不不可可可可避避避避免免免免地地地地要要要要吸吸吸吸收收收收和和和和消消消消耗耗耗耗一一一一些些些些物物物物质质质质，同同同同时时时时产产产产生生生生和和和和分分分分泌泌泌泌另另另另一一一一些些些些物物物物质质质质。测测测测定定定定这这这这些些些些物物物物质质质质的的的的变变变变化化化化与与与与细细细细菌菌菌菌数数数数量量量量的的的的变变变变化化化化有有有有着着着着直直直直接接接接的的的的关关关关系系系系，通通通通过过过过测测测测定定定定这这这这类类类类物物物物质质质质的的的的变变变变化化化化可可可可以以以以间间间间接接接接表表表表示示示示细细细细菌菌菌菌生生生生长长长长的的的的情情情情况况况况。水水水水处处处处理理理理中中中中通通通通常常常常采采采采用用用用的的的的生生生生理理理理生生生生化化化化指指指指标标标标有有有有：营营营营养养养养物物物物质质质质(COD)COD)的的的的消消消消耗耗耗耗，溶溶溶溶解解解解氧氧氧氧的的的的消消消消耗耗耗耗(如如如如好好好好氧氧氧氧细细细细菌菌菌菌的的的的瓦瓦瓦瓦呼呼呼呼仪仪仪仪测测测测定定定定法法法法)，有有有有机机机机酸酸酸酸的的的的产产产产生生生生，HH2 2和和和和CHCH4 4的的的的产产产产生生生生(如如如如厌厌厌厌氧氧氧氧细细细细菌菌菌菌的的的的生生生生长长长长及及及及活活活活性测定性测定性测定性测定)。n n利利利利用用用用这这这这类类类类方方方方法法法法时时时时，首首首首先先先先要要要要确确确确定定定定(qudng)(qudng)细细细细菌菌菌菌的的的的数数数数量量量量与与与与这这这这些些些些物物物物质质质质变变变变化的化的化的化的对应关系对应关系对应关系对应关系，作出作出作出作出相应的相应的相应的相应的标准曲线标准曲线标准曲线标准曲线。继而。继而。继而。继而查表计算查表计算查表计算查表计算。第二十九页，共九十八页。n n如如如如好好好好氧氧氧氧细细细细菌菌菌菌，利利利利用用用用CODCOD消消消消耗耗耗耗速速速速率率率率与与与与细细细细菌菌菌菌数数数数量量量量的的的的比比比比例例例例关关关关系系系系，由由由由CODCOD消耗情况消耗情况消耗情况消耗情况(qngkung)(qngkung)判断细菌数量时，通常按如下方法进行判断细菌数量时，通常按如下方法进行判断细菌数量时，通常按如下方法进行判断细菌数量时，通常按如下方法进行n n（1 1）测定）测定）测定）测定CODCOD消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线 n n分分分分批批批批细细细细菌菌菌菌培培培培养养养养，固固固固定定定定时时时时间间间间取取取取样样样样测测测测定定定定培培培培养养养养条条条条件件件件下下下下细细细细菌菌菌菌数数数数量量量量与与与与CODCOD的值，作的值，作的值，作的值，作CODCOD消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线消耗速率与细菌数量的标准曲线 。第三十页，共九十八页。（2）应用）应用(yngyng)(yngyng)n n实实实实际际际际中中中中我我我我们们们们只只只只需需需需要要要要测测定定CODCOD的的的的消消消消耗耗耗耗速速速速率率率率，对对照照标标准准曲曲线线查查相相应应的的细细菌菌数数量量，这这类类方方法法的的准准确确性性受受细细菌菌种种类类、标标准准测测定定情情况况与与实实际际水水环环境境情情况况的的可可比比性性等等因因素素的的影影响响，一一般般只只用用于于实实验验室室细细菌菌生生理理研研