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基因工程高考题总结【实用文档】doc
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选修三《现代生物技术》基因工程

(２01２浙江卷）1．天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是
A．提取矮牵牛蓝色花的mＲNA,经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因Ｂ与质粒连接后导入玫瑰细胞
D。将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
（2012四川卷）2.将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后,重新置入大肠杆菌的细胞内,通过发酵就能大量生产人生长激素.下列叙述正确的是
A.发酵产生的生长激素属于大肠杆菌的初级代谢产物
B。大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传
C.大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等
Ｄ。生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶
(2０1２江苏卷）3．图1表示含有目的基因D的ＤNA片段长度（ｂp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Ｍsp Ⅰ、BａmH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Ｓｍａ Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓ＧATCC、↓ＧAＴＣ、CCC↓GGＧ。请回答下列问题:

（1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿_连接.
（２）若用限制酶Smａ Ⅰ完全切割图1中ＤＮA片段，产生的末端是____＿末端，其产物长度为＿_＿＿＿.
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因Ｄ就突变为基因ｄ。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Smａ　Ⅰ完全切割，产物中共有_＿＿__种不同DNA片段。
(4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒,那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加＿____的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是__＿＿___＿_＿__＿＿_.
（2012·天津卷,４.生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体"获得DNＡ片段信息的过程图。

据图回答:
（1)过程①酶作用的部位是键,此过程只发生在非结合区DNA，过程②酶作用的部位是键.
（2）①、②两过程利用了酶的特性。
（3）若将得到的DNＡ片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与酶的识别序列进行对比，已确定选用何种酶.
(4）如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的
。
（５）以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有(多选）
A。分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提ｒＲNA　
B。用无水乙醇处理菠菜叶片,提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
Ｄ。将抑制成熟基因导入番茄，其ｍRNA与催化成熟酶基因的ｍRNA互补结合,终止后者翻译，延迟果实成熟。
5．图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BaｍHＩ的酶切位点，ａmｐＲ为青霉素抗性基因，ｔctR为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，orｉ为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括ＥcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
(1）将含有目的基因的DNＡ与质粒表达载体分别用EｃoRＩ酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个ＤNA片段之间连接形成的产物有__________＿___＿＿＿_、_______＿＿______、三种.若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。
（２)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是.
（3)目的基因表达时,RＮＡ聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。
(4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。
6。转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有ＰsｔⅠ、SmaⅠ、EｃoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：
(１)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶,对进行切割。
(2）培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,应使基因表达载体A中含有，作为标记基因。
（3)香蕉组织细胞具有，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的 　　 　 　、。
7．为扩大可耕地面积,增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
（1）获得耐盐基因后,构建重组DＮＡ分子所用的限制性内切酶作用于图中的处,DNA连接酶作用于处。(填“a"或“b")
（2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和法。
(3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功,既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测,又要用方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
8．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan）常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程.
侵
染
抗虫基因
含kan质粒
重组质粒
土壤农杆菌
含重组质粒土壤农杆菌
A
构建
导入
B
培养选择
转基因抗虫植株
再生植株
愈伤组织
离体棉花叶片组织
C
诱导选择
分化
D
检测

请据图回答:
(1）A过程需要的酶有______＿_____________＿＿_______________________＿_.
(2)B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是_____＿＿＿_____＿__＿___
_______＿_______＿__＿___＿__＿____＿_______________＿_____＿_______。
（3)C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_＿________＿_____。
(4）如果利用ＤNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用＿___＿_____＿＿__＿_
_＿_＿_____＿＿__＿__＿＿______________＿_____＿____＿＿___作为探针。
(５)科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与___＿____＿_______________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为１：1。
②若该转基因植株自交,则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为___。
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占___＿____＿＿__%。
9．以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活.请回答下列问题。
(1）获得目的基因的方法通常包括和。
（2）切割和连接DＮA分子所使用的酶分别是和。
(3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或,后者的形状成.
（4)由于重组DＮA分子成功导入受体细胞的频率，所以在转化后通常需要进行操作.
(5)将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌,从两者中生产的胰岛素在功能和序列上是相同的.
１0、(２０11年江苏卷)３3．（８分）请回答基因工程方面的有关问题：
(1）利用ＰCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如右图所示)。图中引物为单链DＮＡ片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测,第四轮循环产物中含有引物A的DNＡ片段所占的比例为。
②在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
（2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。
某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。

①第1组：；
②第2组:。
（3) PCＲ反应体系中含有热稳定DNＡ聚合酶,下面的表达式不能正确反映ＤNＡ聚合酶的
功能，这是因为。

（4）用限制酶EcoRV、Mｂoｌ单独或联合切割同一种质粒，得到的ＤNA片段长度如下图（１ ｋｂ
　即1００0个碱基对),请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点.

11、(11年北京卷）
Ｔ－ＤNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌(其中的T－DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子（称为T1代）。
(１)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除，因为后者产生的会抑制侧芽的生长。
(２） 为筛选出已转化的个体,需将Ｔ代播种在含的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T代）。
（3) 为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T代播种在含的培养基上，获得所需个体.
（4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起,需将该突变体与植株进行杂交，再自交代后统计性状分离比。
(5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失,
从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性.
（6)根据Ｔ－DＮA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。
胰腺
反转录酶
质粒

②
⑤
③
① DNA
大肠杆菌
原胰岛素信使RNA
③
④
其过程是：提取植株的DNA，用限制酶处理后，再用将获得的DＮＡ片段连接成环（如右图)以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链ＤNA片断中选取作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
12．1979年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNＡ分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功。请根据图回答问题：
（1）此图表示的是采取从____＿＿______中获取目的基因的过程.
（2）图中①DＮA是以＿_＿___＿__＿___＿为模板,_＿________＿形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因.
(3)图中②代表的是_＿__＿_＿＿,在它的作用下将质粒（_＿_＿____DＮA)切出________末端。
（４）图中③代表＿__＿____＿_＿____＿___ＤNA，含__＿_____________＿__＿＿_。
(５)图中④表示将_＿＿_____＿__＿___＿＿＿.⑤表示＿＿___＿_＿＿__＿_＿＿＿＿ＤNＡ随大肠杆菌的繁殖而进行_____＿_＿＿______＿_＿。

（20１２浙江卷）6。天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是
A。提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DＮA，再扩增基因B
Ｂ．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
Ｃ．利用DＮA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D。将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞
【答案】A
【命题透析】通过特定的实例考查基因工程的相关概念及操作要领.
【思路点拨】控制蓝色色素合成的基因B即为我们所需要的目的基因,可通过逆转录法获得基因B,再进行扩增以增加其数量；基因文库中保存的是各基因片段，提取时无须使用限制性核酸内切酶；为使目的基因在受体细胞中稳定存在且能向下一代遗传，应先在体外使用ＤＮＡ连接酶构建基因表达载体,然后再导入大肠杆菌.
（2012四川卷）2。将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后,重新置入大肠杆菌的细胞内,通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是
A．发酵产生的生长激素属于大肠杆菌的初级代谢产物
Ｂ．大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传
C.大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等
D。生长激素基因在转录时需要解旋酶和DNA连接酶
【答案】B　
【解析】A初级代谢产物是微生物生长必需的，而人的生长激素不是大肠杆菌必需的，帮A错.B可遗传的变异有基因突变、基因重组和染色体变异，大肠杆菌是原核生物，但其变异来源是基因重组。C基因为有遗传效应的DNA片段，不含有U。D转录时不需要形成磷酸二酯键，不需要DNA连接酶。 （201２江苏卷）32．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列,图２表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Mｓp Ⅰ、BａmH Ⅰ、Mbｏ Ⅰ、Ｓma　Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓ＣGG、Ｇ↓ＧATCC、↓GAＴC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

(1)图１的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿_＿___连接.
（2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图１中ＤNA片段，产生的末端是＿＿＿__末端，其产物长度为＿_＿_＿。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因Ｄ就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的ＤNA片段,用限制酶Sｍa Ⅰ完全切割，产物中共有___＿＿种不同ＤＮA片段。
(4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿_＿＿。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_＿_＿＿的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因Ｄ不能正确表达,其最可能的原因是＿_____＿_＿＿_＿＿＿＿.
答案：（1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 　（２）平　　5３7bp、７９0bp、6６1bp
（3）4 （4）BamH Ｉ 　抗生素B　 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接
解析:(1）DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖"连接。[来源：中＊教＊网z＊z＊ｓ＊tep]
（2）Ｓｍa　I识别的序列为GGＧＣＣC，切割后会产生平末端；图1所示的DNA分子中含有两个Sma　I的识别位点，第一个识别位点在左端534ｂp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端６58bp序列向左三个碱基对的位置,从这两个位点切割后产生的DＮA片段长度分别为５3４+3，796－３－3，658+3,即得到的DＮＡ片段长度分别为537ｂp、７9０bp和661bｐ。
（３)在杂合子体内含有基因Ｄ和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SｍaI完全切割会产生５３７bp、790bp和661ｂｐ三种不同长度的片段,基因ｄ的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生１327bｐ和661bp两种长度的片段，综上,杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生４种不同长度的片段。
（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的ＢａmH　I和识别序列为GATC的Mbo　I,若使用Mｂo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素Ｂ抗性基因，所以要用BａmH I来切割目的基因和质粒,切割后保留了完整的抗生素Ｂ抗性基因,便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的,目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补,可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达.

(２0１２·天津卷,7）7.(13分）生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究.以下实例为体外处理“蛋白质—DNA复合体”获得DＮA片段信息的过程图。

据图回答：
（1）过程①酶作用的部位是键，此过程只发生在非结合区ＤNA，过程②酶作用的部位是键。
(２）①、②两过程利用了酶的特性.
（3）若将得到的DＮA片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与酶的识别序列进行对比，已确定选用何种酶.
(4）如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合,则其识别、结合DNＡ序列位基因的
。
(5）以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有（多选）
A．分离得到核糖体,用蛋白酶酶解后提rRNA
Ｂ。用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C.通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
Ｄ．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的ｍRNＡ互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。
【答案】（1）磷酸二酯键，肽键
（2）专一
（3)限制性DNA内切酶
(4)启动子
（5）ACＤ
【解析】（1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯键,蛋白酶作用的部位是肽键.
（２）①②过程利用了各种酶催化一种或一类化学反应的特性，即专一性。
（3）DNA要构建重组质粒，需要用限制性ＤNA内切酶切割,再与质粒重组。
(４）RNA聚合酶识别和结合在基因的启动子上,才能驱动基因转录。
（5)蛋白酶能特异性的酶解蛋白质,分子杂交手段也是利用各物质分子结合的特异性，抑制成熟基因转录出的mRNA与催化成熟酶基因的mRＮＡ碱基互补结合，也具有特异性，光和色素易溶于有机溶剂,与酒精并不是特异性的溶解，所以选ABC.
13.图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶ＥcoRＩ、BamＨI的酶切位点,amｐR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因,P为启动因子，T为终止子，ｏｒi为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括ＥcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

（１）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切,酶切产物用DNＡ连接酶进行连接后,其中由两个ＤNＡ片段之间连接形成的产物有＿＿___＿____________、＿__________＿＿＿＿、三种.若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验.之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；若接种到含青霉素的培养基中,能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是。
（3）目的基因表达时，ＲNＡ聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是.
（4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。
13.答案（1）目的基因—载体连接物载体-—载体连接物目的基因—-目的基因连接物分离纯化（其他合理答案也给分)
（2）载体－—载体连接物目的基因－-载体连接物、载体——载体连接物
(3）启动子 mRNA
（4）EcoRI和BamHI（只答一个酶不给分）
１4.转基因抗病香蕉的培育过程如图所示.质粒上有ＰｓtⅠ、ＳmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：
（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶，对进行切割。
(2)培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有，作为标记基因。
(3）香蕉组织细胞具有,因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的 、。
14。答案（1)PsｔⅠ、EcｏRⅠ，含抗病基因的DNA、质粒，(２）抗卡那霉素基因(3）全能性,脱分化、再分化.
２7．为扩大可耕地面积,增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注.我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
（1)获得耐盐基因后，构建重组DNＡ分子所用的限制性内切酶作用于图中的处,ＤNA连接酶作用于处。（填“a”或“b"）
(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和法。
（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测,又要用方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性.
２7。（1）a a 　 (2）基因枪法（或花粉管通道法)
(3)耐盐基因(目的基因）一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）
32．（１4分）在培育转基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因(kaｎ）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长.下图为获得抗虫棉的技术流程。
侵
染
抗虫基因
含kan质粒
重组质粒
土壤农杆菌
含重组质粒土壤农杆菌
A
构建
导入
B
培养选择
转基因抗虫植株
再生植株
愈伤组织
离体棉花叶片组织
C
诱导选择
分化
D
检测

请据图回答:
(１）A过程需要的酶有___＿_＿___________＿_＿__＿____________＿＿＿___＿＿____。
（２)B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是__＿_____＿___________
＿_____＿____＿__＿＿______＿___＿____＿______＿＿___＿_____＿_＿＿__＿_＿__。
(3)C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_＿＿__＿__________。
(４)如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用_＿__＿＿___＿___＿__
_____＿___＿___＿_______＿_____＿__＿＿__________＿＿_＿＿_作为探针.
（５）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与_____＿___＿_____＿______＿＿杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为１：1。
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为___。
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占___＿__＿___＿_％。
32.(1)限制性内切酶和DNA连接酶（2)具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存(3）卡那霉素（4）放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因
（5)①非转基因植株②3：1 ③1０0
28．以重组DＮA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。
（1)获得目的基因的方法通常包括和。
（2）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是和。
(３）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或，后者的形状成。
（4）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率,所以在转化后通常需要进行操作。
（5）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌,从两者中生产的胰岛素在功能和序列上是相同的.
28．（１)化学合成（人工合成)酶切获取（从染色体DＮA分离/从生物细胞分离)
(2）限制性核酸内切酶(限制酶） DNＡ连接酶（连接酶）
(3）质粒小型环状（双链环状、环状）(4)低筛选（5)氨基酸
1、(2011年江苏卷)33．（８分）请回答基因工程方面的有关问题：
（1）利用PＣR技术扩增目的基因,其原理
与细胞内DNA复制类似(如右图所示）。 　
图中引物为单链DNA片段，它是子链
合成延伸的基础。
①从理论上推测,第四轮循环产物中含有　
引物A的DNA片段所占的比例为。
②在第轮循环产物中开始出现两条
脱氧核苷酸链等长的ＤＮA片段.
（2）设计引物是PCR技术关键步骤之一。
某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图)，请分别说明理由。

①第1组:；
②第2组:。
（3) PＣR反应体系中含有热稳定ＤNA聚合酶,下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的
功能，这是因为。

（4）用限制酶ＥcｏRV、Ｍｂol单独或联合切割同一种质粒,得到的DNA片段长度如下图(１ kb
即10００个碱基对）,请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRＶ、Ｍｂol的切割位点。

１、(20１1年江苏卷）33。(8分）
　 (1）①１5/16　 　 ②三
（2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效
②引物Ｉ'自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
(3) DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结
　 合到双链DNＡ片段的引物链上
（4)见右图
2、（１1年北京卷）３１.(1６分)
T—DＮA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子（称为T1代）。
(1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除,因为后者产生的
会抑制侧芽的生长.
（2) 为筛选出已转化的个体，需将T代播种在含的培养基上生长,成熟后自交,收获种子(称为Ｔ代）。
(3） 为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将T代播种在含的培养基上,获得所需个体。
(4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体.为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与植株进行杂交,再自交代后统计性状分离比。
(5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失,
从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性。
（6）根据T—DNＡ的已知序列，利用ＰＣR技术可以扩增出被插入的基因片段。
其过程是:提取植株的DNA，用限制酶处理后，再用将获得的DNA片段连接成环(如右图）以此为模板,从图中A、B、C、D四种单链DNＡ片断中选取作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
2、（１1年北京卷）答案：31（1６分）
（1）顶芽 生长素　 (2）(一定浓度的）除草剂　 (3)（一定浓度的)盐
(４）野生型 　 1 　（5)降低 　　 （6)突变体 DNA连接酶　　 B、C
胰腺
反转录酶
质粒

②
⑤
③
① DNA
大肠杆菌
原胰岛素信使RNA
③
④
２6.197９年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功.请根据图回答问题:
（1）此图表示的是采取从_＿___＿__＿___中获取目的基因的过程.
（2)图中①DNA是以＿_＿__＿__＿____＿为模板，＿__＿__＿＿___形成单链ＤNA,在酶的作用下合成双链DNA,从而获得了所需要的基因。
（3)图中②代表的是＿＿_＿＿___,在它的作用下将质粒(_＿____＿_DNA）切出___＿_＿__末端。
（4)图中③代表＿__＿＿＿_____＿_______ＤNA，含____＿______＿_＿_＿___＿_＿。
（5)图中④表示将___＿_____＿____＿___。⑤表示_＿＿＿_＿_＿______＿＿＿DNA随大肠杆菌的繁殖而进行_＿____＿___＿＿______.
26．(1）基因文库
（2)mRNA 逆（反)转录
(３）特定的限制性内切酶 环状 黏性
（4）重组　　 原胰岛素基因(目的基因）
（5）将目的基因导入受体细胞 重组 扩增

基因工程习题 　　 2０17．9.８
1．利用细菌大量生产人类胰岛素,下列叙述错误的是（　　)
Ａ．用适当的酶对运载体与人类胰岛素基因进行切割与粘合
B。用适当的化学物质处理受体细菌表面,将重组DNA导入受体细菌
C．通常通过检测目的基因产物来检测重组DＮＡ是否已导入受体细菌
D．重组DＮＡ必须能在受体细菌内进行复制与转录，并合成人类胰岛素
2.采用基因工程的方法培育抗虫棉,下列导入目的基因的作法正确的是（　　)
①将毒素蛋白注射到棉受精卵中
②将编码毒素蛋白的ＤＮA序列，注射到棉受精卵中
③将编码毒素蛋白的DNＡ序列,与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞,再进行组织培养
④将编码毒素蛋白的DNA序列,与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵中。
A．①②ﻩB．②③ﻩC.③④ﻩD．④①
3。基因工程是在DNA分子水平进行设计施工的，在基因操作的以下步骤中，不进行碱基互补配对的是（ ）
①人工合成目的基因
②E.coliDNA连接酶结合目的基因与运载体
③将目的基因导入受体细胞
④目的基因的检测和表达
⑤个体生物学水平的鉴定。
A．①③B．①⑤ﻩC．③⑤D。②③④
4.．如图表示基因工程中获取水稻某目的基因的不同方法．下列相关叙述中正确的是( 　）
A.这三种方法都用到酶，都是在体外进行
B．①②③碱基对的排列顺序均相同
C．图示ａ、b、c三种方法均属人工合成法
D.方法a不遵循中心法则
5。．如图表示基因工程中目的基因的获取示意图,不正确的是（）
Ａ。③表示ＰCR技术，用来扩增目的基因
B.从基因文库中要得到所需的目的基因可以根据目的基因的相关信息来获取
C.若获取的目的基因相同,则图中基因组文库小于cDNA文库
D．若基因比较小，核苷酸序列又已知,则可以直接通过人工合成的方法获取
6．。以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图．据图分析，下列说法正确的是（　　）

A．催化②⑤过程的酶都是DＮA聚合酶，都能耐高温
Ｂ。催化①过程的酶是ＲNA聚合酶
C．④过程发生的变化是引物与单链DNＡ结合
Ｄ．如果RNA单链中Ａ与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链ＤNA中,A与U之和也占该DNA碱基含量的40%
7。.下列关于质粒的叙述，正确的是( ）
Ａ．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器
Ｂ.细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的
Ｃ．质粒只有在导入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制
D.质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状ＤNA分子
８。。科学家常选用的细菌质粒往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是（　 ）
A．提高受体细胞在自然环境中的耐热性
B.有利于检测目的基因否导入受体细胞
Ｃ．增加质粒分子的相对分子质量
D．便于与外源基因连接
9。.下列关于基因工程工具的说法不正确的是（ 　）
A．构建基因文库和构建基因表达载体都需要限制酶和DＮA连接酶
B。DＮA连接酶对所连接的DNＡ两端碱基序列有专一性要求
Ｃ。载体能将外源基因导入受体细胞并使其在受体细胞中稳定遗传并表达
D。在基因工程操作中,被用作载体的质粒，都是经过人工改造的
1０．下列叙述符合基因工程概念的是（ ）
Ａ。在细胞内将ＤNＡ进行重组,赋予生物新的遗传特性
B.将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株
C．用紫外线照射青霉菌,使其DＮA发生改变,通过筛选获得青霉素高产菌株
Ｄ。自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DＮA上
1１。下列四条DNA分子,彼此间具有互补粘性末端的一组是（ )

Ａ。①② Ｂ．②④ C.③④ D．②③
12．下列有关基因工程技术的叙述，正确的是( )
Ａ．重组DNＡ技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体
B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列
C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
Ｄ．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达
１3。下列提到的物质不是基因工程常用的工具的是（　 )
①限制性核酸内切酶 　　　②ＤNA聚合酶 　③DNA连接酶 　④运载体 ⑤解旋酶．
A。②④⑤ﻩB．①③④ C。①②③ﻩD。②⑤
１４.如图是利用基因工程技术培育转基因植物,生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstⅠ、SｍａⅠ、EcｏＲⅠ、ＡｐaⅠ为四种限制酶。下列说法错误的是 （ ）

Ａ.图示过程是基因工程的核心步骤
B.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠ
C。抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来
D。除图示组成外,表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构
１5.一种质粒和人的胰岛素基因存在的限制酶的酶切位点(用Ｅ１表示)如图所示，ａ表示标记基因，ｂ表示胰岛素基因．现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因,然后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，最不可能出现的是（　 ）

A。ﻩＢ．ﻩC。ﻩＤ．
１6.利用乳腺生物反应器生产药用蛋白是动物基因工程的重要应用，目前科学家已在牛和山羊等动物乳腺生物反应器中获得了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和α﹣抗胰蛋白酶等医药产品．下列有关乳腺生物反应器的叙述错误的是(　 ）
Ａ。受体细胞可选用受精卵或胚胎干细胞
Ｂ。获得转基因动物需利用胚胎移植技术
C．鉴别药用蛋白基因是否导入受体细胞一般利用分子杂交法
Ｄ。转基因动物产生的生殖细胞可能含有药用蛋白基因
１7。美国科学家将萤火虫的荧光素基因转入烟草植物细胞，获得高水平的表达，长成的植物通体光亮，堪称奇迹．下列有关发光烟草培育的叙述正确的是( 　)
A．在培育过程中需用同一种限制酶分别切割荧光素基因和质粒
Ｂ．将目的基因直接导入烟草细胞常用的方法是显微注射法
Ｃ．受体细胞只能用烟草的受精卵，因为受精卵的全能性最高
D．导入目的基因的烟草细胞不需进行植物组织培养就能发育成一个完整的植株
18。现有一长度为10０0碱基对（by）的ＤNA分子，用限制性核酸内切酶Eco　Ｒ1酶切后得到的ＤNＡ分子仍是１０00ｂy，用Kpｎ１单独酶切得到40０by和6０0bｙ两种长度的DＮA分子,用EｃｏRⅠ，KpnⅠ同时酶切后得到200by和6０0ｂy两种长度的DNA分子.该ＤNA分子的酶切图谱正确的是（ ）
A.ﻩB.
C．D.
１９．下列何种技术能有效地打破物种的界限，定向地改造生物的遗传性状，培育农作物的新的优良品种
A.基因工程技术ﻩB。诱变育种技术ﻩC。杂交育种技术ﻩD.组织培养技术
20。科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶蛋白．以下有关该基因工程的叙述错误的是（ 　）
A。采用逆转录的方法得到的目的基因
B．DNA分子杂交技术可以用来检测人奶基因是否表达
Ｃ。马铃薯的叶肉细胞可作为受体细胞
D．用同种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNＡ,可产生黏性末端而形成重组DNA分子
21。下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是(　 ）
①一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列；
②限制性核酸内切酶的活性受温度影响；
③限制性核酸内切酶能识别和切割ＲNA；
④限制性核酸内切酶可从原核生物中提取；
⑤限制性核酸内切酶的操作对象是原核细胞。
A．②③ﻩB．③④ﻩＣ．③⑤ D．①⑤
２2.关于基因工程和蛋白质工程的说法正确的是(　　)
A.都是分子水平上的操作
B．基因工程就是改造基因的分子结构
C．蛋白质工程就是改造蛋白质的分子结构
D．基因工程和蛋白质工程都能创造出自然界根本不存在的蛋白质
２3。下列关于各种与基因工程有关酶的叙述，不正确的是（ 　)
Ａ。DＮA连接酶能将２个具有末端互补的DＮA片段连接在一起
B．PCＲ反应体系中的引物可作为ＤNA聚合酶作用的起点
C．限制酶的活性受温度影响
D。逆转录酶是以核糖核苷酸为原料，以RＮA为模板合成互补DNA
24．根据基因工程的有关知识,回答下