CK20和NMP22在尿路上皮癌中的表达和意义.docx
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1、CK20和NMP22在尿路上皮癌中的表达和意义 作者:林毅,陈文轩,强万明,李黎明【摘要】 目的 探讨细胞角蛋白20和核基质蛋白22在尿路上皮癌中的表达和意义。方法 应用RT-PCR法和酶联免疫法分别检测30例尿路上皮癌、8例正常尿路上皮组织标本中CK20mRNA表达和尿中NMP22的水平。结果 CK20mRNA在30例尿路上皮癌中阳性表达率为%。NMP22在尿路上皮癌中的含量明显高于对照组,分别为u/ml和u/ml,而且与肿瘤病理分级和临床分期明显相关。NMP22诊断尿路上皮癌的敏感性、特异性分别为%和%。结论 CK20和NMP22的表达与尿路上皮癌的生物学行为密切相关。NMP22与尿路上皮
2、癌的恶性程度呈正相关,CK20和NMP22可协同参与尿路上皮癌的生物学行为。【关键词】 尿路上皮癌 细胞角蛋白20 核基质蛋白22Expression and significance of cytokeratin 20 mRNA and nuclear matrix protein 22 in urothelial cancer Abstract Objective To study the correlation of cytokeratin 20mRNA and nuclear matrix protein 22in urothelialRT-PCR was used to determ
3、ine the expression of CK20 mRNA in 30 urothelial cancers ,and 8 normallevels in urinary were determined by an enzyme-linked immunosorbent assayin urothelialThe positive rate of CK20 mRNA in 30 urothelial cancer was %.The median NMP22 value was significantly higher than control group u/ml versus u/ml
4、 in urothelialvalues of NMP 22 was found to be positively correlated to the degree of the differentiation and the clinical staging of the urothelialsensitivity and specificity of NMP22 were % and %, The results suggest that CK20 mRNA and NMP 22 play important role in the occurrence and development o
5、f urothelialfindings suggest that the detection of multiple factors is more valuable than that of single factor. Key words urothelial tumor;cytokeratin20;nuclear matrix protein 22 尿路上皮癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,其中90%以上为移行细胞癌,其特点为术后复发率高,往往复发后其恶性度增大,而且肿瘤的浸润和转移倾向增强,肿瘤的生物学行为受多种基因的调控。近年发现CK20只在胃肠道和尿路上皮中表达,核基质蛋白对DNA的
6、复制、转录以及基因表达的调节起着重要作用。我们采用RT-PCR法检测细胞角蛋白20mRNA的表达,应用酶联免疫法测定尿路上皮癌中核基质蛋白22的水平,探讨其与尿路上皮癌的生物学行为的关系,现报告如下。 1 资料与方法 一般资料 对2001年12月2002年6月我院收治的30例尿路上皮癌及8例正常膀胱黏膜手术标本及尿液进行分析。男21例,女9例。年龄5879岁,平均岁。按世界卫生组织病理分级:G1 4例,G2 12例,G3 14例;国际抗癌联盟标准:浅表肿瘤14例,浸润肿瘤16例。CK20 mRNA的检测 所有手术标本于液氮冻存后,转至-80 冰箱保存。采用美国Promega公司生产的RT-PC
7、R试剂盒进行检测,CK20引物:Sense Primer:5-CAG ACA CAC GGT GAA CTA TGG-3,Antisense Primer:5-GAT CAG CTT CCA CTG TTA GAC G-3。GAPDH 引物:Sense Primer:5-ATG GCA CCG TCA AGG CTG AG-3 Antisense Primer:5-CGC CTG CTT CAC CAC CTT CT-5。PCR扩增条件为94 2 min,55 1 min,72 2 min,35个循环。用2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。NMP22的测定 留取患者晨起第一次尿液,应用Mat
8、ritech公司生产的双抗体夹层ELISA方法测定尿路上皮癌患者尿液中的NMP22水平,建立ROC曲线,确定NMP22的临界值及诊断中敏感性和特异性的判断。统计学方法 用SPSS 统计软件包对数据进行统计分析。采用卡方检验和等级资料秩和检验,组间比较使用等级资料Mann-Whitney U秩和检验,被认为有统计学意义。 2 结果 CK20mRNA和NMP22在尿路上皮癌中的表达 CK20mRNA和NMP22的表达与尿路上皮癌密切相关。CK20mRNA的表达与移行细胞癌、腺癌和内翻性乳头状癌有明显的相关性,而在鳞癌中无表达,它与肿瘤数目的多少和肿瘤复发程度无关。NMP22的表达在移行细胞癌、鳞癌
9、和腺癌中有较强的表达,而在内翻性乳头状癌中表达较弱,多发肿瘤与单发肿瘤相比,差异有显着性意义,但与肿瘤的复发程度无关,见表1。CK20mRNA表达与肿瘤的病理分级、临床分期无明显相关性。NMP22的含量随着病理分级增高、临床分期的增加,而差异有显着性,见表2。尿NMP22测定在尿路上皮癌诊断中的价值 根据NMP22测定值做出ROC曲线,见图1,ROC曲线下面积为,面积的标准误为,尿NMP22用于诊断尿路上皮癌有显着性意义,面积的95%可信区间为,不包括。以 u/ml为临界值。NMP22诊断尿路上皮癌的敏感性为%,特异性为%;阳性预测值为%,阴性预测值为%。CK20mRNA和NMP22表达在尿路
10、上皮癌中的相互关系 从表3可以看出,在CK20阴性组中NMP22表达降低例数为50%,而在CK20阳性组中NMP22表达降低例数为%,卡方检验,两组之间差异有显着性。表1 CK20mRNA和NMP22在尿路上皮肿瘤中的表达 表2 尿路上皮癌中CK20mRNA和NMP22与病理分级、临床分期的关系 3 讨论 细胞角蛋白有角蛋白基因编码,是上皮细胞发生、分化、成熟过程中逐渐形成的细胞骨架中间丝成分,它包括至少20个成员。根据分子量和等电点的不同,可分为酸性角蛋白和碱性角蛋白。不同的角蛋白以不同的组合方式协同表达13。CK20由Moll等于1990年分离鉴定,并用免疫组化技术证明CK20只在胃肠道上
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