中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点.docx
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1、中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点【摘要】目的了解国内Duchenne/Becker型肌营养不良症(DMD/BMD)患者基因缺失的分布特点。方法用12对引物以多重PCR检测与56例DMD/BMD患者,分析缺失型患者抗肌营养不良蛋白(dystrophin)基因缺失的断裂点分布, 并结合国内文献报道的221例病例资料,分析9对引物的总检出率及各引物的最佳组合。结果国内dystrophin基因缺失断裂点72%位于4451号内含子内,以44号内含子最多(22%),50号内含子次之(17%), 位于4551号内含子内的断裂点是44号内含子的倍。7号内含子断裂较少,仅4%的断裂点位于该内含子。9对引
2、物的总检出率为48%,其中5对引物的总检出率为46%。两对引物的最佳组合为48号和17号,可检出35%的患者。结论国内dystrophin基因4451号内含子高度不稳定,容易发生断裂。7号内含子可能不是国内dystrophin基因缺失断裂的高发区域。在国内5对引物的总检出率接近9对引物,48号和17号外显子的二重PCR扩增对于全国范围内DMD/BMD的筛选,尤其是结合其他方法进行大范围的产前筛选,不失为一种可取的选择。【Abstract】ObjectiveTo understand the distributional characteristics of dystrophin gene de
3、letion in Chinese 56 Duchenne/Becker muscular dystrophy (DMD/BMD) patients were detected by twelve primers mPCR (9 primers plus exon 7,50,52) and the distribution of the breakpoints of dystrophin gene deletion was analyzed. Combining with the 221 unrelated DMD/BMD cases reported in the published pap
4、ers in China, we analyzed the positive ratio detected by the nine primers mPCR and the best primers combination to detect DMD/BMD About 72% of deletion breakpoints fell in intorns 4451 in the Chinese&nbs p;DMD/BMD patients. About 22% of deletion breakpoints fell in intron 44 , 17% in intron 50, wher
5、eas the majority (50%) were located within the segments encompassing introns 4551. Only 4% of deletion breakpoints fell in intron 7. Nine primers mPCR could detect 48% of all the cases of DMD/BMD, and five (exons 12,51,17,48,45) of these nine primes could detect 46% of all the cases of DMD/BMD. The
6、best two-primer combination was exons 48 and 17, which could detect 35% deletion of all the DMD/BMD Introns 44 51 were highly unstable and prone to break. Intron 7 might not be a real deletion “hot spot” in the Chinese population. In China, the positive rate of deletion detection with five primers m
7、PCR was almost the same as that with nine primers mPCR. Detecting deletion of exons 48 and 17 might be a preferable choice if the prenatal screening on a wide range of pregnancies would be needed.【Key words】Muscutar dystrophyGene deletion Polymerase chain reactionDystrophin抗肌营养不良蛋白(dystrophin)基因突变中5
8、5%65%为缺失,5%10%为重复,8%左右为小的缺失和插入,点突变占25%左右1。dystrophin基因缺失分布在不同民族有不同的特点,如在以色列,Duchenne/Becker肌营养不良症(DMD/BMD) 患者dystrophin基因突变中缺失率较低2,而希腊人和保加利亚人dystrophin基因缺失的断裂点分布有其独特的特点3,4。我们利用12对引物(9对引物5加7、50和52号外显子扩增引物)检测了56例DMD/BMD患者,分析了缺失型患者dystrophin基因缺失的断裂点分布。并结合国内文献报道,共分析了274例无血缘关系的DMD/BMD患者9对引物检测的总检出率及各引物最佳组
9、合。资料和方法一、资料56例DMD/BMD患者均来自我院神经遗传病专科门诊,其中BMD 5例。所有患者均为男性,年龄8个月至30岁。患者中有6例两两之间有血缘关系。53例无血缘关系的病例中12例有家族史或同胞发病,占23%。除1例8个月男婴为症状前诊断外,其余患者均有典型临床表现并经肌电图、肌酶谱检查证实。此外,结合国内文献221例资料,分析9对引物的总检出率。二、PCR扩增9对由Chamberlain设计的引物5由中山医科大学遗传病学教研室提供,为了解dystrophin基因缺失在中央缺失热区的断裂点,我们根据Beggs等6的设计合成了50、52号外显子扩增引物。将以上11对引物分为5对、4
10、对、3对三组:5对引物为12、17、45、48、51号外显子扩增引物,4对引物为4、8、19、44号,3对引物为50、51、52号。每次扩增均同时设空白和正常对照。缺失的外显子再以单一引物PCR扩增验证1次。为了解7号内含子的断裂情况, 我们合成了7号外显子扩增引物,引物序列7F:GCATGGAAGTAAATCTCATGGAAC;7R:GTGTAG-AAATGACAAGTCTCAGATG,扩增产物为279 bp。结果56例患者中28例至少有1个外显子缺失。53例无血缘关系的患者中27例有基因缺失,总检出率为51%。累及中央缺失热区的缺失24例,总检出率为45%, 占检出病例的89%。根据检测结
11、果,在27例缺失的54个断裂点中,72%的断裂点位于4451号内含子,50%的断裂点位于4551号内含子。确定位于7、44、50和51号内含子内的断裂点共30个,22%、17%、13%的断裂点分别位于44号、50号、51号内含子。7号内含子断裂较少,仅4%的断裂点位于该内含子。结合文献资料7-14, 274例DMD/BMD患者9对引物的总检出率为48%。对207例有完整资料的病例分析表明,48号外显子缺失最常见,45、51、17号外显子次之,它们各自的总检出率分别为28%、20%、16%、10%,分别占9对引物检出人数的57%、42%、33%、22%。4、8号外显子缺失少见,仅占总检出率的1%
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