免疫分析.pptx
《免疫分析.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《免疫分析.pptx(51页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、18.4 荧光免疫分折荧光免疫分折(Fluorescenct immuno-assay,FIA)将将荧荧光光法法引引入入免免疫疫分分析析主主要要是是因因为为它它与与分分光光光光度度法法相相比比具具有有高高的的灵灵敏敏度度。其其灵灵敏敏度度是是分分光光光光度度法法的的10-100010-1000倍倍。人人们们寻寻找找单单分分子子检检测测的的工工作作几几乎乎都都围围绕绕着着荧荧光光化化合合物物,这这本本身身就就反反映映了了荧荧光光法法在在提提高高分分析析灵灵敏敏度度方方面面的的潜潜力力。另另外外,荧荧光光测测定定可可以以把把荧荧光光激激发发波波长长、荧荧光光发发射射波波长长、荧荧光光寿寿命命或或偏
2、偏振振等等参参数数同同时时结结合合起起来来,形形成成特特异异而而花花样样繁繁多多的的分分析析系系统统。由由于于荧荧光光化化合合物物的的微微环环境境会会影影响响上上述述参参数数,荧荧光光光光谱常常使得直接研究一些分子过程成为可能。谱常常使得直接研究一些分子过程成为可能。28.4.1 荧光标记物荧光标记物 FIA就就是是把把一一些些强强荧荧光光的的化化合合物物用用作作标标记记试试剂剂。常常用用的的荧荧光光标记物包括:标记物包括:荧光素类荧光素类(fluoresceins)标记物标记物 荧荧光光素素具具有有很很高高的的摩摩尔尔吸吸光光系系数数和和荧荧光光量量子子产产率率,因因而而它它是是荧光免疫分析
3、中最常用的荧光标记物之一。荧光免疫分析中最常用的荧光标记物之一。罗丹明类罗丹明类(Rhodamine)标记物标记物 罗罗丹丹明明类类衍衍生生物物与与荧荧光光素素类类具具有有相相同同的的基基本本结结构构。与与荧荧光光素素类类化化合合物物相相比比,它它们们的的发发射射波波长长要要长长一一些些,但但荧荧光光量量子子产产率率要要低一些。低一些。3香豆素类香豆素类(Coumarins)(Coumarins)标记物标记物 藻胆蛋白类藻胆蛋白类(Phycobiliproteins)标记物标记物 藻藻胆胆蛋蛋白白类类的的水水溶溶性性非非常常好好,它它们们是是蓝蓝绿绿细细菌菌的的光光合合成成器器的的一一部部分分
4、。在在它它们们的的结结构构中中含含有有几几个个线线性性四四吡吡咯咯辅辅基基,因因而而具具合合很很高高的的吸吸光光能能力力。这这类类化化合合物物常常在在微微粒粒荧荧光免疫分析中被用作荧光探针。光免疫分析中被用作荧光探针。4 8.4.2 在生物体液中进行荧光测定的局限性在生物体液中进行荧光测定的局限性(1)光散射干扰光散射干扰 由由于于蛋蛋白白质质、类类脂脂物物及及胶胶体体颗颗粒粒对对激激发发光光的的散散射射,将将会会出出现现瑞瑞利利散散射射、拉拉曼曼散散射射或或丁丁达达尔尔散散射射。瑞瑞利利散散射射和和丁丁达达尔尔散散射射与与激激发发光光波波长长相相同同,但但拉拉曼曼散散射射的的波波长长要要比比
5、激激发发光的长。散射光无寿命,即随着激发光的终止而消失。光的长。散射光无寿命,即随着激发光的终止而消失。(2)背景荧光干扰背景荧光干扰 生生物物体体液液中中含含有有多多种种荧荧光光物物质质,其其荧荧光光光光谱谱覆覆盖盖很很宽宽的波长范围,因而会产生非常强的背景荧光。的波长范围,因而会产生非常强的背景荧光。5(3)(3)淬灭效应淬灭效应 血清中的蛋白质、胆红素及血红蛋白等可以吸收激发血清中的蛋白质、胆红素及血红蛋白等可以吸收激发或发射光的能量而产生淬灭现象。荧光标记的抗原与血清或发射光的能量而产生淬灭现象。荧光标记的抗原与血清蛋白的结合也会产生荧光淬灭。蛋白的结合也会产生荧光淬灭。(4)(4)光
6、漂白作用光漂白作用 当荧光分子受到激发光的连续照射时会产生光分解而当荧光分子受到激发光的连续照射时会产生光分解而使得荧光强度减小,特别是当激发光的波长短,而激发光使得荧光强度减小,特别是当激发光的波长短,而激发光的强度又非常大时更是这样的强度又非常大时更是这样(如采用激光光源时如采用激光光源时)。68.4.3 荧光免疫分析的仪器荧光免疫分析的仪器 所所有有用用于于荧荧光光免免疫疫分分析析的的荧荧光光仪仪都都由由光光源源、激激发发和和发发射射滤滤光光片片或或单单色色器器、一一个个光光学学系系统统(可可以以是是棱棱镜镜、反反射射镜镜或或光光导导纤纤维维)和和一一个个检检测测系系统统组组成成。更更复
7、复杂杂的的仪仪器器还还可可以以包包括括移移液液、洗洗涤涤、移移动动和和数数据据处处理理单单元元。时时间间分分辨辨荧荧光光仪仪有有一一个个电电子子回回路路用用于于控控制制测测定定时时间间。这这类类复复杂杂的的仪仪器器一一般般都都是是为为特特定定的的化化学学分分析析系系统统所所设设计计的的,所所以以所所有有的的测测定定参参数数都都已已经预先优化好了,并且是固定的。经预先优化好了,并且是固定的。78.4.4 荧光免疫分析法示例荧光免疫分析法示例时间分辨荧光免疫分析法(时间分辨荧光免疫分析法(Time-Resolved Time-Resolved FluorescenceFluorescence,简称
8、,简称TRFTRF)用用三三价价稀稀土土离离子子及及其其螯螯合合剂剂作作为为示示踪踪物物(代代替替荧荧光光物物质质、同同位位素素或或酶酶),标标记记蛋蛋白白质质、多多肽肽、激激素素、抗抗体体、核核酸酸探探针针或或生生物物活活性性细细胞胞,待待反反应应体体系系(如如:抗抗原原抗抗体体免免疫疫反反应应、生生物物素素亲亲和和素素反反应应、核核酸酸探探针针杂杂交交反反应应、靶靶细细胞胞与与效效应应细细胞胞的的杀杀伤伤反反应应等等)发发生生后后,用用时时间间分分辨辨荧荧光光仪仪测测定定最最后后产产物物中中的的荧荧光光强强度度,以此来判断反应体系中被测物质的浓度。以此来判断反应体系中被测物质的浓度。8TR
9、F 分析法的优点:分析法的优点:标标记记物物体体积积很很小小(为为原原子子标标记记),标标记记后后不不会会影影响响被被标标记记物物的的空空间间立立体体结结构构,保保证证了了被被检检测测物物质质的的稳稳定性定性(尤其对蛋白质影响更小尤其对蛋白质影响更小);实实现现了了多多位位点点标标记记,这这不不仅仅使使检检测测更更灵灵敏敏,也也使使一一个个试试剂剂盒盒能能够够同同时时检检测测出出两两种种或或两两中中以以上上的的项项目目(如前列腺特异抗原(如前列腺特异抗原PSA的检测)的检测);目目前前只只有有原原子子标标记记才才能能准准确确的的定定量量检检测测DNA、RNA。9 稀土原子具有的荧光发射峰谱范围
10、窄、激发光稀土原子具有的荧光发射峰谱范围窄、激发光波长范围宽的特点,有利于增强荧光的特异性,提波长范围宽的特点,有利于增强荧光的特异性,提高分辨率;激发光和发射光之间存在较大的高分辨率;激发光和发射光之间存在较大的STOKESSTOKES位移位移(激发光与发光之间的能量差激发光与发光之间的能量差 ),有利于排除,有利于排除非特异性荧光的干扰、降低本底荧光强度;稀土离非特异性荧光的干扰、降低本底荧光强度;稀土离子螯合物产生的荧光强度高、寿命长,有利于消除子螯合物产生的荧光强度高、寿命长,有利于消除环境中其它荧光物质的影响,并可对样品进行多次环境中其它荧光物质的影响,并可对样品进行多次检测。检测。
11、10 时时间间分分辨辨荧荧光光免免疫疫分分析析技技术术具具有有标标记记物物制制备备简简便便、有有效效期期长长、不不污污染染环环境境、操操作作流流程程短短、标标准准曲曲线线线线性性范范围围宽宽、有有效效期期长长、应应用用范范围围十十分分广广泛泛等等优优点点。虽虽然然问问世世仅仅十十余余年年,但但在在方方法法学学研研究究和和应应用用方方面面均均发发展展迅迅速速。国国外外(如如:WALLACWALLAC公公司司)已已有有商商品品化化试试剂剂盒盒4040余余种种,荧荧光光测测试试仪仪研研制制已已进进入入第第三三代代,分分析析技技术术也也已已实实现现高度自动化。高度自动化。118.5 免疫分析发展趋势免
12、疫分析发展趋势 在在免免疫疫分分析析的的诸诸方方法法中中,放放射射免免疫疫分分析析是是第第一一个个定定量量方方法法,而而且且至至今今也也还还有有一一些些使使用用。放放免免分分析析准准确确而而灵灵敏敏,但但由由于于放放射射性性风风险险和和需需要要特特殊殊的的仪仪器器。因因此此,研研究究工工作作者者很很早早就就开开始始寻寻找找可可以以取取代代它它的的新新方方法法。酶酶联联免免疫疫分分析析是是最最先先提提出出的的一一种种,并并在在进进入入八八十十年年代代后后首首次次占占据据主主导导地地位位其其方方法法覆覆盖盖了了一一半半以以上上的的文文献献。荧荧光光免免疫疫分分析析在在建建立立时时间间分分辨辨荧荧光
13、光免免疫疫分分析析后后有有了了突突跃跃性性发发展展,占占目目前前工工作作的的1015,成成为为具具有有发发展展前前途途的的非非放放射射免免疫疫分分析析方方法法之之一一。非非同同位位素素标标记记分分析析中中另另一一个个值值得得重重视视的的方方向向是是发发光光免免疫疫分分析析法法,由由于于方方法法的的高高灵灵敏敏度度和和测测定定的的简简单单在在免免疫疫分分析析中中一一直直占占有有一一定定的的位位置置,每每年年约约占占5的工作。的工作。12 从从发发展展的的趋趋势势来来看看,在在今今后后比比较较长长的的一一段段时时间间内内,酶酶免免疫疫分分析析法法将将仍仍占占主主导导地地位位,特特别别是是在在应应用
14、用方方面面更更将将是是如如此此;而而在研究方面,以下诸方面的工作将有待于进一步拓展和深入。在研究方面,以下诸方面的工作将有待于进一步拓展和深入。138.5.1 基因工程抗体基因工程抗体 从从被被免免疫疫的的动动物物血血清清中中获获得得的的抗抗体体是是多多克克隆隆抗抗体体,虽虽然然用用于于免免疫疫分分析析的的效效果果是是良良好好的的,但但缺缺点点是是抗抗体体不不均均一一,来来源源是不连续的而且有较大的批间差别。是不连续的而且有较大的批间差别。自自七七十十年年代代发发展展了了单单克克隆隆抗抗体体技技术术,到到现现在在已已经经很很成成熟熟。单单克克隆隆抗抗体体克克服服了了多多克克隆隆抗抗体体的的上上
15、述述缺缺点点并并且且在在一一些些方方面面进进一一步步提提高高了了抗抗体体的的性性能能。近近年年来来、一一类类特特殊殊的的单单克克隆隆抗抗体体抗独特型抗体开始在应用中受到广泛的关注。抗独特型抗体开始在应用中受到广泛的关注。14抗独特型抗体抗独特型抗体(Antiidiotypic antibody)免免疫疫系系统统的的抗抗独独特特型型反反应应可可以以导导致致产产生生一一类类特特殊殊的的抗抗体体抗抗独独特特型型抗抗体体。通通过过单单克克隆隆抗抗体体筛筛选选可可得得到到、和和等等型型抗抗体体。抗抗独独特特型型抗抗体体的的特特点点是是其其结结合合位位置置是是独独特特型型抗抗体体的的抗抗原原结结合合位位点
16、点,即即抗抗独独特特型型抗抗体体的的结结合合反反应应性性质质类类似似抗抗原原。其其中中 型型反反应应性性与与抗抗原原完完全全相相向向,可可与与抗抗原原对对独独特特型型抗抗体体进进行行等等结结合合位位点点的的竞竞争争结结合合,因因而而在在目目前前分分析析中中应应用用较较多多。例例如如,利利用用雌雌二二醇醇受受体体的的抗抗体体的的结结合合位位点点可可模模拟拟雌雌二二醇醇的的结结构构,两两者相互竞争,可用于测定雌二醇。者相互竞争,可用于测定雌二醇。15双特异性抗体双特异性抗体(Bispecific antibody)因因为为抗抗体体是是由由四四条条肽肽链链组组成成(HL2)型型结结构构,所所以以通通
17、过过两两个个不不同同单单克克隆隆抗抗体体细细胞胞系系的的二二次次融融合合杂杂交交和和抗抗体体筛筛选选便便可可得得到到具具有有两两个个不不同同的的抗抗原原结结合合位位点点的的抗抗体体(L1H1-L2H2型型)。这这就是双特异性抗体。就是双特异性抗体。双双特特异异性性抗抗体体的的一一个个有有趣趣的的特特点点是是抗抗体体的的两两个个结结合合位位点点具具有有一一定定的的协协同同作作用用,除除了了研研究究意意义义外外,双双特特异异性性抗抗体体的的这这种协同作用已被用来设计均相免疫分析法。种协同作用已被用来设计均相免疫分析法。16双功能抗体双功能抗体(Bi-functional antibody)双功能抗
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫 分析
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【精***】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【精***】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。