免疫原和抗血清的制备.pptx
《免疫原和抗血清的制备.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《免疫原和抗血清的制备.pptx(40页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、第一节第一节 免疫原的制备免疫原的制备 一、颗粒性抗原的制备一、颗粒性抗原的制备 二、可溶性抗原的制备和纯化二、可溶性抗原的制备和纯化 三、半抗原性免疫原的制备三、半抗原性免疫原的制备第二节第二节 免疫佐剂免疫佐剂 一、佐剂的种类一、佐剂的种类 二、佐剂的作用机制二、佐剂的作用机制第三节第三节 抗血清的制备抗血清的制备 一、免疫动物的选择一、免疫动物的选择 二、免疫程序二、免疫程序 三、动物采血法三、动物采血法第四节第四节 抗血清的鉴定和保存抗血清的鉴定和保存 一、抗血清的鉴定一、抗血清的鉴定 二、抗血清的保存二、抗血清的保存第五节第五节 抗血清的纯化抗血清的纯化 一、特异性一、特异性IgGI
2、gG抗体抗体 二、单价特异性抗血清二、单价特异性抗血清思考题思考题小结小结第一节第一节 免疫原的制备免疫原的制备 免疫原免疫原(immunogen)是能诱导机体产生抗体是能诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的物质并能与抗体发生反应的物质颗粒性抗原颗粒性抗原细胞、细菌、寄生虫细胞、细菌、寄生虫可溶性抗原可溶性抗原蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸细胞抗原:绵羊红细胞细胞抗原:绵羊红细胞 细菌抗原:菌体抗原、鞭毛抗原细菌抗原:菌体抗原、鞭毛抗原 寄生虫体抗原:虫卵寄生虫体抗原:虫卵一、颗粒性抗原的制备一、颗粒性抗原的制备组织细胞抗原的制备:组织细胞抗原的制备:高速捣碎法组织捣
3、碎机捣碎高速捣碎法组织捣碎机捣碎 研磨法用玻璃匀浆器或乳钵研磨研磨法用玻璃匀浆器或乳钵研磨 搅拌法-电动乳化器(避免高温)(一)可溶性抗原的制备(一)可溶性抗原的制备二、可溶性抗原的制备和纯化二、可溶性抗原的制备和纯化 组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备:组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备:反复冻融法反复冻融法-20冻结,然后室温融化冻结,然后室温融化 超声破碎法超声波(超声破碎法超声波(120kHz)自溶法自身酶系自溶法自身酶系 酶处理法溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶酶处理法溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶 表面活性剂处理法表面活性剂处理法SDS、去氧胆酸钠、去氧胆酸钠、二乙基十六烷基溴二乙基十六烷基溴
4、免疫球蛋白片段的制备:免疫球蛋白片段的制备:非共价键解离法改变非共价键解离法改变pH pH、利用强变、利用强变性剂性剂 共价键解离法氧化法和还原法共价键解离法氧化法和还原法 溴化氰裂解法溴化氰裂解法 酶解法木瓜酶酶解法木瓜酶 、胃蛋白酶、胃蛋白酶 超速离心法:超速离心法:差速离心法低速和高速离心交替进行差速离心法低速和高速离心交替进行 密度梯度离心法区带离心法密度梯度离心法区带离心法 (二)可溶性抗原的纯化(二)可溶性抗原的纯化选择性沉淀法:选择性沉淀法:核酸去除法氯化锰、硫酸鱼精蛋、核酸去除法氯化锰、硫酸鱼精蛋、链霉素链霉素 盐析法硫酸铵、硫酸钠盐析法硫酸铵、硫酸钠 有机溶剂沉淀法乙醇、丙酮
5、有机溶剂沉淀法乙醇、丙酮 聚合物沉淀法聚乙二醇聚合物沉淀法聚乙二醇 离子交换层析法:离子交换层析法:利用蛋白质带电荷不同进行分离利用蛋白质带电荷不同进行分离 离子交换剂:离子交换剂:离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂离子交换纤维素、离子交换凝胶、离子交换树脂 凝胶过滤法:凝胶过滤法:利用凝胶的分子筛作用,对分子量不同的蛋白质利用凝胶的分子筛作用,对分子量不同的蛋白质进行分离进行分离 亲和层析法:亲和层析法:利用生物大分子之间具有的专一性亲和力利用生物大分子之间具有的专一性亲和力 (1)(1)亲和层析支持物的选择:亲和层析支持物的选择:非特异性吸附低;非特异性吸附低;液体流速快;液体流速
6、快;在各种在各种pHpH和高浓度盐溶液中稳定;和高浓度盐溶液中稳定;有合适丰富的化学基团,与蛋白质或其它化合物结有合适丰富的化学基团,与蛋白质或其它化合物结 合;合;有丰富的微孔,以增加结合容量。有丰富的微孔,以增加结合容量。最常用的支持物是最常用的支持物是Separose4BSeparose4B (2)(2)配体的选择配体的选择条件:条件:抗原或抗体必须单一特异性;抗原或抗体必须单一特异性;抗原与抗体必须具有较高的亲和力;抗原与抗体必须具有较高的亲和力;配体必须有一个适当的化学基团。配体必须有一个适当的化学基团。(3)(3)抗原或抗体与支持物的结合:抗原或抗体与支持物的结合:活化:溴化氰;活
7、化:溴化氰;接接“手臂手臂”:带:带“手臂手臂”琼脂糖有氨琼脂糖有氨基琼脂糖、羧基琼脂糖、溴乙酰琼脂糖、基琼脂糖、羧基琼脂糖、溴乙酰琼脂糖、重氮盐衍生物琼脂糖、疏基琼脂糖。重氮盐衍生物琼脂糖、疏基琼脂糖。(4)(4)亲和层析条件的选择:亲和层析条件的选择:封闭活性基团:用无关蛋白质或三乙醇胺封闭活性基团:用无关蛋白质或三乙醇胺过柱;过柱;除去未结合和结合不牢的蛋白:先用除去未结合和结合不牢的蛋白:先用NaHCONaHCO3 3洗脱,再用解脱剂处理;洗脱,再用解脱剂处理;解脱剂:解脱剂:3mol/L 3mol/L 硫氰酸钾(或钠)、硫氰酸钾(或钠)、0.1mol/L 0.1mol/L pH2.4
8、pH2.4甘氨酸缓冲液甘氨酸缓冲液电泳法:电泳法:利用分子量和电荷量不同进行分离利用分子量和电荷量不同进行分离(三)纯化抗原的鉴定(三)纯化抗原的鉴定蛋白含量测定:蛋白含量测定:紫外吸收法、双缩脲法、酚试剂法紫外吸收法、双缩脲法、酚试剂法分子量测定:分子量测定:SDS-PAGESDS-PAGE、凝胶过滤、凝胶过滤纯度鉴定:纯度鉴定:醋酸纤维膜电泳、醋酸纤维膜电泳、SDS-PAGESDS-PAGE、毛细管电泳、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析等电聚焦、高效液相层析免疫活性鉴定:免疫活性鉴定:双向免疫扩散、免疫电泳、双向免疫扩散、免疫电泳、ELISAELISA第二节第二节 免疫佐剂免疫佐剂免疫佐
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫原 血清 制备
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【丰****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【丰****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。