多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常.docx
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1、多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常【摘要】 本研究建立多色荧光原位杂交技术平台,探讨其在检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常中的应用。联合应用常规细胞遗传学方法和M-FISH技术分析了5例伴有复杂核型异常的ALL患者。结果表明:M-FISH 证实了原有的异常t(9;22)、t(1;19)和 t(y;1),同时还发现了新的异常der(1)(137)、der(6) t(6;9)(q?;p13)、der(1)t(1;11)、der(12)t(1;12)、der(3)t(3;5)、der(2)t(2;16)、der(9)(9187)和der(7)(9187),并且纠正了原有的错误分析
2、,其中der(9)(9187)及der(7)(9187)为世界上首例报道。结论:M-FISH在检测ALL复杂核型中的应用前景广阔,是进行精确染色体核型分析所不可缺少的先进手段。【关键词】 多色荧光原位杂交Detection of the Complex Chromosomal Aberrations in Acute Lymphoblastic Leukemia by Means of Multiplex Fluorescence in situ HybridizationAbstract This study was aimed to establish the technique of m
3、ultiplex fluorescence in situ hybridization (M-FISH) and to explore its usefulness in detection of complex chromosomal aberrations (CCAs) in acute lymphoblastic leukemia (ALL). Five ALL patients with CCAs were analyzed by combining the techniques of conventional cytogenetics (CC) and M-FISH. The res
4、ults demonstrated that M-FISH confirmed the aberrations previously detected by CC,such as t(9;22),t(1;19) and t(y;1),and revealed new abnormalities as der(1)(137),der(6)t(6;9)(q?;p13),der(1)t(1;11), der(12)t(1;12),der(3)t(3;5),der(2)t(2;16),der(9)(9187) and der(7)(9187),and also corrected the wrong
5、results in CC. Among these abnormalities,der(9)(9187) and der(7)(9187) were reported for the first time. In conclusion,M-FISH has proved to be useful in characterization of the CCAs in ALL,and it is an essential method to refine the karyotype analysis.Key words multiplex fluorescence in situ hybridi
6、zation;acute lymphoblastic leukemia;complex chromosomalaberration伴随血液系统疾病WHO分型的提出,细胞遗传学已被提升到了更重要的地位。但是常规细胞遗传学方法对微小染色体重排或复杂核型分析效果较差,而荧光原位杂交技术又只能用1-2种探针来检测证实已知的异常。这两种方法都难以识别复杂的染色体结构改变和标记染色体的来源。多色荧光原位杂交 技术1则可以有效的解决上述难题。M-FISH技术在国外开展应用相对较多,但国内仅有赵萌等2应用 M-FISH 技术检测了2例急性白血病患者的核型异常。我们应用M-FISH技术对5例伴有复杂核型异常的急
7、性淋巴细胞白血病病例进行了检测,以探讨该技术在检测ALL复杂核型异常中的应用。材料和方法研究对象5例ALL患者,男4例,女1例,诊断和分型根据细胞形态学、细胞化学染色、多参数流式细胞术免疫分型和染色体核型分析确定,出现的染色体异常累计2个以上染色体和3个以上断裂位点。例正常男性作为对照。细胞遗传学分析采用骨髓短期培养法,按常规制备染色体。应用R显带技术进行核型分析,核型异常按人类细胞遗传学国际命名体制1995加以描述。M-FISH分析M-FISH 探针为 Vysis 公司提供,以联合标记的方式共标记SpectrumAquaTM、SpectrumGreenTM、SpectrumGoldTM、Sp
8、ectrumRedTM、 SpectrumFRedTM 5种荧光素,用SpectraVysion 分析系统分析可得出24种不同的色彩分别标记于每一条染色体上。M-FISH的具体步骤 取出储存于-20的染色体标本,气干法滴片,自然干燥后放入37 2SSC中老化30分钟; 分别用RNA酶、胃蛋白酶及甲醛消化处理玻片,具体时间随玻片上细胞多少及胞浆多少而定,用相差显微镜观察确定; 72、70%甲酰胺/2SSC变性玻片2分钟,室温乙醇梯度脱水待干; 取出10 微升/1张玻片量的探针,72水浴5分钟;加探针10 l于玻片上,上盖22 mm22 mm盖玻片,四周封胶,放入湿盒中37杂交12-18小时;第2
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