一株鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定.doc

一株鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定扬州大学本科生毕业设计（论文）一株鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定畜牧兽医专接本0901：窦莉莎指导老师：陈素娟摘要：鸡白痢沙门氏菌病是危害雏鸡和成年鸡的一种接触感染性疾病。2010年10月，扬州一养鸡户送来数只鸡至扬州大学动物医院就诊，根据流行病学的调查、临床症状、剖检的病例变化以及实验室诊断，确诊为鸡白痢沙门氏菌病；同时还对分离出的鸡白痢沙门氏菌菌株进行药敏试验，并根据药敏试验结果及时调整用药方案，从而使病情迅速得到控制。关键词：鸡白痢沙门氏菌；分离；鉴定 Isolation and identification of Salmonella pullorumUndergraduate: Lisha Dou Advisor: Sujuan ChenAbstract: Pullorum disease is an acute systemic disease in chicken. In October 2010, one chick-farmer sent a few chicken to Yangzhou University animal hospital for diagnosis fromYangzhou. According to the investigation of epidemiology, the symptom of clinic, the change of pathology and the diagnosis of laboratory, they were infected by Salmonella pullorum disease. Meanwhile, We also carried out the drug sensitive test about the Salmonella pullorum isolated. According to the result of the susceptibility test, We adjusted the drug regimen in time and the disease was controlled quickly.Key words: Salmonella pullorum; Isolation; Identification 文献综述鸡白痢沙门氏菌( S. pullorum) 病(简称鸡白痢) 是危害雏鸡和成年鸡的一种接触感染性疾病。该病呈急性或慢性败血症过程，在雏鸡和成年鸡中所表现的症状和病程有显著不同。雏鸡主要表现为白色下痢、急性败血症、气喘、呼吸困难并带肝脏、心肌肺器官出现坏死、结节或坏死灶为主要的临床病理特征，发病率、死亡率较高，是严重危害雏鸡的一种常见疾病。成年鸡多为慢性或隐形感染，成年鸡感染后呈纤维素性腹膜炎、肝肿大、肠道肿胀出血等特征1 - 3 。1.病原1.1细菌学检查鸡白痢的病原是鸡白痢沙门氏菌(S.Pullorum)。其形态为两端稍圆的细长杆菌(0.3 0.5m 12.5m) ，革兰氏染色阴性，不运动，无荚膜，不形成芽孢，兼性厌氧。外界环境中耐寒，不耐热，在沸水中立即死亡，但在蛋内需煮沸5min方可杀死，一般消毒剂在短时间内都能将其杀死。该菌仅感染鸡与火鸡，在病鸡的肝、肺、肠、卵黄囊、心及血液中含菌量最高1。1.2形态观察将纯培养物进行涂片染色镜检, 见有革兰氏阴性较短而细小的杆菌, 无芽胞及荚膜。1.3培养特性将纯培养物分别接种在普通琼脂、鲜血琼脂、麦康凯琼脂平板及普通肉汤中经37培养24h后，在普通琼脂平板上长出圆形、边缘整齐、湿润、稍隆起的光滑菌落；在血琼脂平板上菌落特点与普通琼脂平板上相同，未见有溶血现象；在麦康凯琼脂上生长出透明而稍带黄色的菌落，其大小、形状与鲜血平板相同；在普通肉汤中肉汤轻度混浊，管底有絮状沉淀，无菌膜及菌环。2.流行特点各品种的雏鸡对白痢都有易感性，在3日龄以前发病率和死亡率都很高，病程有时可延续到3日龄以后。鸡白痢的主要传染源是病鸡和带菌鸡，传染途径主要是消化道，既可水平传播又可垂直传播。带菌鸡的卵巢和肠道含有大量病菌，病鸡排出的粪便中含有大量的病菌，它容易污染饲料、垫料、饮水及饲养用具，当雏鸡接触到这些污染物之后则被感染。感染鸡所产的蛋内含有多量的病菌，对有啄蛋或食蛋癖的鸡也可感染。用病鸡所产的带菌种蛋，或使用被病菌污染的孵化机进行孵化，都可传染白痢。因为刚出壳的雏鸡，抗病力很差，摄食到含有病菌的尘埃后，往往很快发病。饲养管理不良，如雏鸡拥挤，饲养密度过大，环境卫生不好，温度过高过低，通风不良，饲料品质差或营养不全，以及有其他疫病感染时，都可成为诱发白痢的因素。此外，通过断喙、性别鉴定及苍蝇、老鼠也能传播白痢2。3.临床症状带菌种蛋孵出的雏鸡出壳后不久可见虚弱昏睡，进而陆续死亡。常在37日龄发病量增加，10日龄达到死亡高峰。出壳后感染的雏鸡，一般在510日龄开始发病，23周龄雏鸡白痢发病和死亡达到高峰。病雏精神萎靡，不喜欢活动，闭目打瞌睡，缩颈低头，两翅下垂，后躯下坠，怕冷，靠近热源，多数病雏呼吸困难而急促，后腹部快速地一收一缩。病雏排粪时常发出“叽叽”的痛苦尖叫声，排出白色、浆糊状粪便，肛门周围的绒毛常被粪便污染并与粪便粘在一起，干结后形成硬块，堵塞肛门。3周龄以后，发病的雏鸡一般很少死亡。成年鸡一般无明显症状，母鸡表现为产蛋量、受精率和孵化率下降，极少数的病鸡精神萎顿，食欲减少，产蛋停止，排白色粪便，有的可因卵黄囊炎引起腹膜炎，使腹膜增厚，腹部下垂2。4.剖检病变4.1雏鸡早期死亡的急性病雏，剖检时无明显病变，可见肝轻度肿大充血，间有出血，胆囊扩张，充有多量胆汁，肺脏充血或出血。病程稍长，病鸡卵黄吸收不全，其内容物呈油脂状或豆腐渣样。病死雏消瘦，嗉囊扩张，脾肿大、充血，砖红色，有很特殊的条纹； 肝、脾、心及肌胃上面有灰白色结节。 盲肠有白色的干酪样堵塞物。泄殖腔有白色恶臭稀便。4.2育成鸡 病鸡一般营养中等或偏下。突出的变化是肝脏肿大，有的肝脏较正常肝脏大数倍； 脾脏肿大；心包增厚，心包扩张，心包膜呈黄色不透明，心肌可见有数量不一的黄色坏死灶，严重的心脏变形、变圆，整个心脏被坏死组织代替；相同的变化还经常在肌胃上见到；肠道呈卡他性炎症。4.3成年鸡母鸡呈慢性经过。 最典型的病变是卵巢上卵泡变形、变色，晦暗无光。 卵内容物呈干酪样，有时卵泡破裂引起卵黄性腹膜炎，或有卵黄堵塞输卵管。公鸡睾丸极度萎缩，睾丸炎，输精管增大，并充满稠密的渗出物，心囊积液。5.诊断鸡白痢沙门氏菌病可根据流行病学特点，临床症状、剖检变化综合分析，做出初步诊断，但其他病原微生物感染也会出现类似的剖检变化，还要考虑有无混合感染的问题，所以确诊还要通过病原分离培养，染色镜检、生化试验、致病性试验等6。6.防制要以预防为重点，从种鸡做起，种鸡场应定期进行检疫，淘汰阳性种鸡，取干净的种蛋入孵，从孵化到育雏的各个环节要严格消毒。6.1预防本病传染源主要为病鸡和带菌鸡，传播途径有水平传播和垂直传播。带菌公鸡可通过精液将病原传给母鸡，因此公鸡的白痢净化尤为重要。对种鸡的鸡白痢净化和对种蛋彻底进行消毒是控制该病发生的重要措施，对预防初生雏鸡白痢尤其重要。出壳雏鸡用敏感药物预防性加药有很好的控制作用；坚持自繁自养，如确需引进，而需对引进鸡场进行鸡白痢检测咨询，确定为无鸡白痢鸡群后，方可引进；对种蛋进行严格的熏蒸消毒。加强育雏期卫生，定期对环境及各种育雏器械进行消毒，以便杀灭环境中的细菌。各种应激因素：如饲养密度大，长途高温或低温运雏，通风不良，舍内温度过高或过低，卫生条件不良，饲养管理不善等，都可诱导鸡的发病。应减少应激因素，改善饲养管理，提高育雏鸡营养水平，加强鸡的抵抗力。雏鸡、产蛋鸡、种鸡不要乱投药，应根据药敏试验的结果选择敏感药物防治鸡白痢病，注意地区耐药菌株的出现，要定期给种鸡投药，加强鸡舍消毒，消除沙门氏菌的带菌污染。若其中有一个种鸡场白痢净化后未进行鸡舍消毒，结果不出一个月必将导致鸡白痢的污染，重测时白痢阳性率增高。在刚出壳时雏鸡进行敏感药物注射或饮水预防雏鸡白痢，有很好的预防效果，一般在15日龄和710日龄时各加药一个疗程。 6.2治疗6.2.1早用药 在雏鸡首次开食和饮水时就添加防治鸡白痢病的药物，不要等到第二天或第三天，甚至出现临诊症状后再加药。6.2.2药量足每千克饮水中加5%氟哌酸3g；每千克饲料中拌0.1%片痢特灵34片， 但应注意将药物和饲料拌均匀。6.2.3按疗程用药治疗鸡白痢药物在没有特别说明的情况下，一般都以连续用药3天为一个疗程。不足3天，由于用药时间短，达不到预防和治疗鸡白痢的目的；超过3天，除容易产生抗药性外，又容易造成药物在体内蓄积而使鸡群中毒。6.2.4交替用药为防止细菌对药物产生抗药性和鸡群因用药时间过长而中毒，抗鸡白痢药物应交替使用。第一个疗程结束后，紧接着从8日龄开始，每10千克饮水中加入恩诺沙星5g，连饮7天；每千克饲料中加入土霉素34g，连喂7天。以后再根据鸡群情况加喂其它抗鸡白痢药物，或重复第一个疗程。6.2.5科学饲养根据上面的防治方案，能够有效地预防和治疗雏鸡白痢病，但要彻底杜绝该病的发生，必须建立一整套科学的饲养管理程序，并贯彻于育雏、育成、种鸡饲养、种蛋的收集、消毒、孵化等整个养鸡的全过程7。正文部分鸡白痢沙门氏菌( S . pullorum) 病(简称鸡白痢) 是危害雏鸡和成年鸡的一种接触感染性疾病。鸡白痢是由鸡白痢沙门菌引起的一种多发性传染病，雏鸡发病表现急性败血症经过，以发热、拉灰白色粥样或黏性液状粪便为特征；成年鸡发病以生殖系统损害为主的慢性或隐性感染为特征。由于我国集约化养鸡业的快速发展，鸡病的种类逐渐的增多；另外由于各类抗生素药物的广泛应用、长期应用、不足量应用、反复应用，使某些菌株产生耐药性，使用药物治疗时疗效不明显。2010年10月，扬州一养鸡户送来数只鸡至扬州大学动物医院就诊，根据病史和流行病学的特点，病理解剖变化，初步诊断为鸡白痢沙门氏菌病，并对其进行细菌进一步分离和鉴定。1.材料1.1病例1.1.1病料来源病料来源于初步诊断为鸡白痢沙门氏菌病的12日龄草鸡3只。1.1.2临床症状发病鸡症状表现为精神委靡，羽毛蓬松杂乱，两翅下垂，食欲不振或废绝，鸡冠苍白皱缩，排黄绿色和白色稀粪，沾污肛门周围羽毛。1.1.3剖检变化病死鸡只剖检可见肝肿大变脆, 充血, 色淡发黄；肠壁变薄, 有出血点。无菌采取肝脏典型病料放于无菌的平皿里，放入4冰箱里冷藏，以备用。1.2培养基1. 2.1LB培养基：称取蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g于蒸馏水中至950ml，溶解完全，用10N的NaOH调PH于7.0后定容至1000ml，分装，按1.5%（m/v）的琼脂粉加入，121 15min高压灭菌，浇板。1.2.2麦康凯培养基：54g麦康凯加5g琼脂粉，加蒸馏水至1000ml，分装，11530min高压浇板。1.3染色液1.3.1草酸铵结晶紫染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1%草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。1.3.2革兰氏碘液：先用少量蒸馏水将2g碘化钾溶解，然后再加入1g已磨碎的碘片，并徐徐加水，待完全溶解后，注入瓶中，并加蒸馏水至全量为300mL即成。可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。1.3.3沙黄水溶液：将沙黄饱和酒精溶液用蒸馏水稀释10倍即成。此液保存期以不超过4个月为宜。1.3.4石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5%石炭酸水溶液90mL混合过滤即成。1.3.5稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。1.3.6 95%乙醇41.4药敏试纸包括强力霉素、头孢噻肟、阿米卡星、羧苄青霉素、四环素、环丙沙星、诺氟沙星、新霉素、头孢氨苄、复方新诺明、头孢曲松、恩诺沙星、林可霉素、卡那霉素、氨苄西林、头孢唑林、青霉素G、庆大霉素。1.5其它常用器材生化反应管(购自杭州天和微生物制剂有限公司，用于纯化菌株的生化试验)沙门氏菌诊断血清（购自中国生物科技集团公司兰州生物研究所），16s rDNA Bacterial Identification PCR Kit（购自TaKaRa公司），无菌超净台，37培养箱，微量移液器，酒精灯、剪刀、酒精棉球、镊子、珀尔环、玻片、培养皿等。2.试验方法2.1染色镜检2.1.1细菌抹片的制备组织脏器材料可先用镊子夹持中部，然后以灭菌或洁净剪刀去一小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上压印（触片）或涂抹成一薄层，自然干燥。将干燥好的抹片，抹片向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖过数次，略作加热（但不能太热，以不烫手为度）进行固定。2.1.2革兰氏染色在已经干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫溶液，经12min，水洗。加革兰氏碘液于抹片上媒染，作用13min，水洗。 加95%酒精于抹片上脱色，约0.51min，水洗。加稀释的石炭酸复红（或沙黄溶液）复染1030s，水洗。吸干或自然干燥，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。2.2细菌的分离培养在超净工作台上取病料分别接种于麦康凯培养基平皿和营养琼脂培养基平皿上，在两平皿上分别画出三个区间并标记。首先用烧灼灭菌的手术刀烧灼肝脏表面，然后用手术刀在烧灼处切开组织，用灭菌的接种环在切开组织内挑取部分组织，划线接种麦康凯培养基平皿第一区间，然后再以同样的方法把其他两个区间划完。待两平皿划线完毕后，在平皿底上作好菌名、日期和接种者等标记，将培养基平皿倒置在37恒温箱培养24h。2.3细菌纯化按上述要求做的细菌分离培养，若在所有接种的平板培养基上均有细菌生长。平板上长出细小、圆形，形似针尖的粘液型菌落，特点是表面光滑、湿润、透明、边缘整齐。 在麦康凯琼脂平板上长出无色的菌落，则为疑似菌落。取初步分离的细菌,按常规作平板划线纯化培养，挑选典型菌落，作进一步培养，供生化及其他鉴定用。2.4生化试验2.4.1糖发酵试验细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、卫茅醇生化反应管内，胶带封口，开口朝下，置容器中，37培养24h后观察结果。2.4.2硫化氢试验取鸡白痢沙门氏菌得出培养物，接种于硫化氢微量发酵管中，37培养24h，观察结果（培养液呈黑色沉淀者为阳性，以“+”表示；无变色者为阴性，以“-”表示）。2.5药敏试验 取鸡白痢沙门氏菌，用灭菌接种环致密划线于普通LB琼脂表面。用无菌镊子将各种抗菌药物圆纸片，分别贴于培养基表面，各片距离要相等，37培养24h观察结果（根据药敏纸片周围有无抑菌圈及其直径大小来判断该菌对各种药物的敏感程度6）。2.6玻板凝集试验 先用接种环挑取分离菌株纯培养物少许与A-F 群多价O混匀，2min后观察结果。如果出现明显的凝集现象为阳性反应。为了对分离菌株进一步分群和定型, 我们采用沙门氏菌属的O9、O1、O12单因子血清和H抗原分别与分离的菌株用平板凝集反应的方法作凝集试验。用生理盐水和大肠杆菌分别作阴性对照比较。2.716s rDNA细菌鉴定PCR试剂盒进行PCR鉴定2.7.1模板DNA的提取挑取单个沙门氏菌菌落于16s-free水，混匀，与100沸水中10min，室温冷却，8000rpm 10min。将上清移入另一个干净的指形管里8。2.7.2PCR反应反应体系为：模板DNA 50-100gPCR Premix 25LForward prime 0.5LReverse Primer 0.5L16s-free H2O up to 50L 反应条件94 5min 94 1min 54 1min 30 Cycles72 1.5min72 5min2.7.3 1%的琼脂糖凝胶电泳2.7.4 PCR产物切胶回收，并用TA克隆，测序3.结果3.1细菌分离和形态特征分离菌在普通营养琼脂上呈圆形、微隆起、光滑、湿润、半透明或灰白色、边缘整齐，直径小于1mm的针尖大小“露珠状”小菌落；在麦康凯琼脂上长出无色透明圆形小菌落。病料直接涂片，革兰氏染色之后，油镜下观察，可发现少量革兰氏阴性小直杆菌；挑取菌落涂片，染色后镜检，可发现大量短小、两端钝圆、多数单个存在的革兰氏阴性小杆菌（见图1）。 图1 鸡白痢沙门氏菌革兰氏染色镜检3.2生化试验 取分离菌进行生化试验，结果能分解葡萄糖、甘露醇，但产酸不产气；不能分解乳糖、麦芽糖、蔗糖、卫茅醇；阿拉伯糖能产酸产气；H2S试验无变色为阴性。符合鸡白痢沙门氏菌的生化特征（见表1）。.表1 生化试验结果葡乳麦甘蔗H2S阿拉伯糖卫茅醇+-+-注：+表示产酸不产气；-表示不分解；产酸产气3.3药敏试验药敏试验结果表明此菌株对卡那霉素、恩诺沙星、环丙沙星等敏感；对头孢噻肟、氨苄西林等中介；对羧苄青霉素、头孢氨苄等耐药（见表2）。表2 药敏试验结果药物种 类药物名称纸片含量（g）判定抑菌圈直径（mm）标准抑菌圈直径（mm）敏感度耐药中介敏感青霉素类青霉素G10U14-1510耐药羧苄青霉素1001314-16 1713耐药氨苄西林101314-161716中介头孢菌素类头孢噻肟30 1415-222321中介头孢氨苄301415-17180耐药头孢曲松1019-2819耐药头孢唑啉301415-171822敏感氨基糖苷类阿米卡星301415-161720敏感新霉素301213-161723敏感庆大霉素12067-91012敏感卡那霉素30 1314-171818敏感四环素类四环素301415-18190耐药强力霉素30 1213-15160耐药喹诺酮类恩诺沙星101213-161720敏感诺氟沙星1012 13-16 17 20 敏感环丙沙星51516-202125敏感3.4血清型鉴定纯培养菌株与沙门氏菌A-F多价血清进行玻片凝集反应，结果均发生凝集反应，为阳性。进一步用单因子血清与之反应结果均与O9和O12因子发生凝集反应，H抗原不凝集。用生理盐水和大肠杆菌分别作对照比较，不出现凝集现象，排除了细菌的自凝和非特异性凝集现象。3.516s DNA细菌鉴定PCR试剂盒进行PCR鉴定3.5.11%的琼脂糖凝胶电泳结果样品经1%琼脂糖凝胶电泳后，在紫外凝胶成像系统下观察，在约526bp处出现一特异性条带，并且与阳性对照的大小相近，500bpM 1 2 3Lane M：100bp ladder；Lane 1：待检样品；Lane 2：阳性对照；Lane 3：阴性对照。 图2 1%的琼脂糖凝胶电泳图片 3.6.216s DNA的序列为：AGGGCGATGGGCCCGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATGGCGGCCGCGGGAATTCGATTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGTAACAGGAAGCAGCTTGCTGCTTTGCTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTGGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGTGTTGTGGTTAATAACCGCAGCAATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCCGCCGCGTAAATTCGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGAATCACTAGTGAATTCGCGGCCGCCTGCAGGTCGACCATATGGGAGAGCTCCCAACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGC通过该序列BLAST搜索比对，结果表明所分离菌株的16s DNA与鸡白痢沙门氏菌高度同源。4.小结与讨论4.1通过临床症状观察、病理剖检初步诊断为鸡白痢沙门氏菌病，继而进行涂片染色镜检、生化试验、血清学试验及16s DNA确诊为鸡白痢沙门氏菌病。4.2药敏试验结果表明在选用药物时应选用卡那霉素、恩诺沙星、环丙沙星等几种对细菌敏感的药物，迅速达到治疗的目的，提高成活率，增加经济效益。测定细菌对抗菌药物的敏感性，不仅可用于禽病传染病的治疗性诊断，而且是为选择具有有效的药物进行治疗提供依据，这对防治禽病减少药物浪费具有重要意义9。在养鸡中应尽量减少药物的使用量，一是可降低饲养成本，二是药物摄入量过多，将破坏肠道的正常菌群使鸡白痢沙门氏菌的耐药性增加，一旦发病更难治愈。所以在正确诊断疾病的基础上合理用药，显得尤为重要9。同一种药物不要长期的使用，不得随意加量或减量，用药一定要用够疗程（一般是37d）不要随意缩短或延长用药时间。有条件的可做药敏试验，选疗效好针对性强的药使用，还可选用一些生物竞争抑制剂（如促菌生）和中药制剂（如生物调理素）进行治疗，疗效好且无抗药性。4.3通过玻板凝集试验确定其血清型为O9、O12，而此血清型的沙门氏菌不仅能水平传播，而且能经卵传给下一代。因此，控制该病既要加强对种鸡的净化、种蛋的消毒，以切断垂直传播途径；又不要忽视免疫接种过程中由于抓捕鸡只和注射可能造成的水平传播。预防和控制鸡白痢沙门氏菌的主要措施是建立无鸡白痢沙门氏菌的种群，并将其种蛋和雏鸡置于不与病鸡直接或间接接触的环境中孵化和育雏。在饲养管理过程中一定要特别注意气候变化，增加鸡群营养水平，保持鸡舍的干燥、卫生以及温度的恒定，要有良好的通风换气，降低鸡舍内氨气等有害气体的产生和积聚，是有效防止本病发生的重要保证。要做好定期的免疫接种和卫生消毒工作，对鸡舍的地面、墙壁、笼具及其他设施，要每星期用火碱或高锰酸钾消毒一次；对食槽、水槽要定期清洗消毒；对鸡群要做到定期带鸡消毒，消毒剂要选用对鸡无害、无残留污染的环保型消毒剂，两种以上消毒剂要交叉使用，防止产生耐药性。另外，还可以在饲料或饮水中添加适量的抗菌药物对本病给予预防10。致 谢本论文是在导师陈素娟老师的悉心指导下完成，谨借本论文此页衷心感谢导师对论文的细心的指导，尤其在修改论文时给予的大力帮助。衷心感谢扬州大学传染病实验室的董洪燕师姐和孙化露师兄在实习期间在实验过程中对我的指导和帮助，在论文的选题、资料查询、开题、撰写及实验过程中的每一个环节给予的悉心指导和帮助。参考文献1 陆承平.兽医微生物学M.中国农业出版社,第三版,107 112.2 蔡宝祥.家畜传染病学M.第四版.北京:中国农业出版社,2001,7.3 焦库华.禽病的临床诊断与防治M.北京:化学工业出版社,2003,8.4 马兴树.禽传染病实验诊断技术M.化学工业出版社,2006.105123.5 王春林,朱德方.禽病诊断与防治手册M.上海科学技术文献出版社,1997.102106.6 祁从春.雏鸡沙门氏菌病的诊断J.中国家禽,2008,30(7):4546.7 刘文强.鸡沙门氏菌分离株的分离鉴定J.中国兽医杂志,2007,43(8):7778.8 徐耀辉.鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-PFLP分子鉴定J.扬州大学学报,2005,26(1):14.9 房海,陈翠珍.畜禽致病性细菌对抗菌类药物体外敏感性测定方法J.河北农业技术师范学院学报, 1988,2(2):7375.10 玉蓉.鸡白痢诊断和综合防治J.养禽和禽病防治,2010,26(6):3839.- 15 -