平白术多糖与氨基酸提取及含量测定研究.docx
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1、平白术多糖与氨基酸提取及含量测定研究【摘要】 目的为开发利用平白术的药用价值提供理论依据,分别提取分离平白术中有效成分多糖和氨基酸,并分别测定平白术多糖和氨基酸的含量。方法采用L9实验因素设计实验,苯酚-硫酸法测定白术多糖的含量。以茚三酮为衍生试剂,采用柱后衍生法测定平白术中氨基酸含量。 结果平白术多糖的含量为% 。平白术中至少含有17种氨基酸,总氨基酸含量为 mgg-1。结论 方法简单、有效、快速、准确、灵敏,适合于分析测定白术中多糖和氨基酸的含量。【关键词】 平白术;多糖;氨基酸Abstract:ObjectiveTo extract polysaccharide and amino ac
2、idand determine their contents in order to offer the basis for using Atractylodes macrocephala Koidz from Pingjiang. MethodsUsing L9orthogonal test,Phenolsulfuric method was used to test polysaccharide content in Atractylodes macrocephala and to assay amino acid using method of Ninhydrin post-column
3、 derivation .ResultsThe analysis of Atractylodes macrocephala Koidz showed that the content of polysaccharide was % and there were at least 17 kinds of amino acids,the total content wasmg established method is quite suitable for identification and quantification of polysaccharide and amino acids in
4、Atractylodes macrocephalais simple,effective,rapid,accurate and sensitive.Key words:Atractylodes macrocephala Koidz ; Polysaccharide; Amino acid 白术是传统中药,中国药典收载的白术为菊科植物Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎,白术具有健脾益气、燥湿利水、止汗安胎之效1。中国药典2005年版第一部记载含白术的处方有91个。近几年以来,中国对白术的需求量大增,居全国大宗常用中药材之首。由于其含有白术多糖、挥发油、氨基酸
5、等多种有效成分而倍受药物研究工作者的关注,使白术的临床应用日趋广泛2,其研究也更为深入、更为多元化。然而,迄今为止,对白术中营养成分氨基酸研究甚少。为了开发利用白术的药用价值,本文对湖南平江产白术平白术进行研究,提取平白术多糖、氨基酸,采用正交实验选择多糖显色条件,用苯酚-硫酸法测定多糖含量。以茚三酮作衍生试剂,采用柱后衍生法测定氨基酸含量。 1 材料仪器UV2150型分光广度计,日立L8800全自动氨基酸自动分析仪试剂无水乙醇、硫酸锌、氢氧化钡、硫酸、苯酚、茚三酮、柠檬酸。三钠、醋酸钠,平江白术、果糖标准品、氨基酸标准品。2 方法与结果显色条件的考察苯酚浓度对显色单因素的影响吸取标准溶液1
6、ml于10 ml具塞试管中,精密加入1 ml不同浓度的苯酚和5 ml浓硫酸,混匀,放置5 min。移入25的水浴中保温20 min。冷却。以蒸馏水1 ml加相应的试剂作空白,测定吸收度。见图1,表1。表1 苯酚浓度的考察 实验结果表明,苯酚浓度在4%7%范围内所得吸收值相近,苯酚浓度为5%时所得吸收值较大,故选择苯酚浓度为5%。 苯酚-硫酸法正交实验设计3实验因素水平表设计:实验选择苯酚用量、浓硫酸用量、水浴温度和水浴中的放置时间4个因素作为考察对象,根据初步实验,每个因素确定3个水平,采用L9正交表进行实验。以吸收度为评价指标。对结果进行统计学处理,得方差分析见表4。表2 实验因素水平表3
7、L9正交实验结果表4 方差分析 经方差分析可知,苯酚用量、浓硫酸用量、水浴温度及水浴放置时间对吸收度影响不显着,但综合比较,本实验选择苯酚-硫酸法最佳显色条件为A3B1C3D2即苯酚 ml,浓硫酸4 ml,水浴温度25,水浴放置时间30 min。 测定波长的选择精密称取一定量多糖样品置小烧杯中,加水溶解,定量转移至100 ml量瓶中,加水至刻度,混匀。吸取该样品2 ml于试管中,加5%苯酚水溶液 ml混匀,迅速加入4 ml浓硫酸,振摇10 min,在25水浴保温放置 30 min,取出冷却,以苯酚-硫酸溶液为空白,于400800 nm范围扫描,选择最大吸收波长 nm为测定波长。标准曲线精密称取
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