QTRAP培训班D2.pdf

02/20/20102010 ASC1基础应用培训培训日程第二天第二天上午上午9:00-下午下午4:009:00-10:30，Analyst软件概揽、定量分析流程简介10:30-10:40，茶歇，茶歇10:40-11:30，如何建立定量方法、定量列表及结果计算，Analyst软件的使用（电脑模拟演示11:30-12:00），总结与问题解答12:00-1:30，工作午餐，工作午餐1:30-4:00，实验操作练习定量方法建立的基本流程Analyst软件介绍02/20/20102010 ASC3基础应用培训Analyst软件使用者界面导航条导航条模块列表模块列表项目目录项目目录系统状态系统状态02/20/20102010 ASC4基础应用培训软件模块 配置配置 设置硬件、安全和报告配置 调谐调谐 手动、自动校准仪器和调谐方法 采集采集 设置采集方法和批文件的建立 浏览浏览 处理数据文件 定量定量 数据定量02/20/20102010 ASC5基础应用培训配置模块 安全02/20/20102010 ASC6基础应用培训配置模块 硬件创建仪器配置的硬件文件加上不同的外围设备和其他应用每个设备独自建立02/20/20102010 ASC7基础应用培训调谐模块可用为可用为:调谐仪器调谐仪器 检测方法检测方法 手动采集手动采集 检测检测 LC流速 和背景流速 和背景 点击“采集采集”将数据保存至选择的位置。点击“开始开始”数据将保存至 API Instrument 文件夹中的Tuning Cache。02/20/20102010 ASC8基础应用培训调谐模块 参数 源/气 参数除了CAD 气外，都不是依赖于化合物的 化合物 参数不依赖于 源和气 分辨率和检测器参数与化合物、源和气 无关02/20/20102010 ASC9基础应用培训调谐模块 质谱参数02/20/20102010 ASC10基础应用培训调谐模块 Advanced MS Profile:默认的 step size是0.1amu Fast Profile:默认的 step size是0.2amu Centroid:默认的 step size是0.3amu Peak Hopping:这个扫描的步长较大(i.e.1amu)不是小步长(i.e.0.1amu).客户可以输入其他数字客户可以输入其他数字 Settling time:在experiments之间停顿的时间。Pause between mass ranges:在扫描一段质量范围前的停顿时间02/20/20102010 ASC11基础应用培训采集模块 批文件编辑器加入样品列表和样品信息选择方法和脚本选择样品位置(LC 和 MALDI)上交给列队02/20/20102010 ASC12基础应用培训D:Analyst DataProjects“Project name”“Subproject name”文件存贮器备份 API Instrument 和默认的项目02/20/20102010 ASC13基础应用培训Analyst软件文件类型 硬件文件?*.hwpf 采集方法?*.dam 数据文件?*.wiff 采集批文件?*.dab 定量结果表文件?*.rdb 定量方法?*.qmf 脚本?*.dll or.aasf02/20/20102010 ASC14基础应用培训打开数据文件*.wiff 文件从项目的数据文件夹中打开在一个数据文件中关联着多个样品或02/20/20102010 ASC15基础应用培训浏览模块 更多细节.浏览选项不仅在菜单中也在工具栏中02/20/20102010 ASC16基础应用培训打印 4个打印选择 打印栏打印栏 打印正选中的栏 打印窗口打印窗口 一张纸上打印包含所有栏的窗口 打印打印Workspace 在每个纸上打印所有的workspace 打印报告打印报告 用报告的格式打印样品栏和样品信息定量分析流程简介定量分析流程简介02/20/20102010 ASC18基础应用培训第一步：Q1 SCAN确定母离子的质荷比根据待测化合物性质，选择分析的极性(/)、离子化方式(ESI/APCI)，根据分子量选择扫描范围和时间 确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。参数设置：扫描方式：Q1 Scan 质量范围：Parameter Range，100MW+30，t=12sec Center Width，MW5Da，t=0.5sec 通过手动调节DP、GS1，使喷雾平稳、有效02/20/20102010 ASC19基础应用培训第二步:Product Ion Scan-确定子离子的质荷比 得到高质量的MS2图，母离子的强度为图谱中基峰强度 的1/3到1/4为宜 平滑后选择子离子质荷比，确定到小数点后一位 参数设置 扫描方式：Product Ion Scan 质量范围：Parameter Range，50MW+10，t=12sec 通过手动调节CE02/20/20102010 ASC20基础应用培训第三步：优化化合物参数 根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对 选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间 用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source 项下CAD参数。各离子对应分别设定。初步建立MRM方法 一般优化两次，以得到比较确切的结果02/20/20102010 ASC21基础应用培训 关掉所有质谱分析界面，将现有质谱体系灭活，激活液相色谱、质谱设备。单击Acquire中Build Acquire Method，打开上面保存过的MRM方法，添加设备：色谱泵、自动进样器等。设置色谱同步。设置色谱参数，分析时间一般为0.61min，流动相组成和流量与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间，与色谱参数一致；设置GS1、GS2、TEM初始值为40、40、400左右，保存方法，例如：LC-MRM.dam。第四步：方法转化：将连续进样方法LC-MS方法02/20/20102010 ASC22基础应用培训第五步：FIA-优化Source参数 将前面用过的样品溶液稀释1001000倍。在Tune项下，双击Compound Optimization，选择FIA分析 根据向导进行自动优化。不接色谱柱进行FIA定量优化 注意：需要优化的各可选值之间用“;”分隔。当对源参数含义及设置比较清楚后，可以省略此步。02/20/20102010 ASC23基础应用培训 接好并平衡色谱柱，用适当浓度标准品考察分离情况 根据色谱分离情况，设定梯度洗脱 MRM方式可以不必所有峰都基线分离，但要注意避开基质离子抑制的干扰 调整色谱流动相组成和流速，并相应调整源参数第六步：色谱条件优化02/20/20102010 ASC24基础应用培训 空白基质添加标准品，稀释成不同浓度 根据LC流动相组成，选择稀释液，配制实际样品 编辑批处理文件，排列进样顺序 平衡MS离子源和色谱柱LC-MS/MS采集数据第七步：标准工作曲线的制备02/20/20102010 ASC25基础应用培训 标准曲线的制做 正确积分色谱图 有内标和无内标的计算方法 最后结果的打印、存贮、复制第八步：数据处理Analyst1.4.2 软件采集和批处理模式浏览02/20/20102010 ASC27基础应用培训调谐方法浏览当没有打开手动调谐的情况下打开方法，方法会以采集的模式打开当没有打开手动调谐的情况下打开方法，方法会以采集的模式打开在打开手动调谐后打开方法，则方法会以手动调谐的模式打开在打开手动调谐后打开方法，则方法会以手动调谐的模式打开02/20/20102010 ASC28基础应用培训从方法中增加删除设备一定要选择合适的硬件1.选中采集方法点击右键，增加或删除设备2.按方法需要选择硬件设备02/20/20102010 ASC29基础应用培训在采集方法的不同部位点击右键允许你加不同的组成给采集方法增加复杂性在这个时间段里保持一样的极性在后面加IDA相关的部分02/20/20102010 ASC30基础应用培训创建采集批文件在建立采集批文件双击02/20/20102010 ASC31基础应用培训213651.增加列表2.命名列表3.增加样品4.命名样品，文件和输入样品号#5.选择方法当方法选中后表格的进样体积会改变6.选择定量或快速定量在批文件编辑器上增加列表和样品402/20/20102010 ASC32基础应用培训在批文件表格中输入信息有种方法输入数据有种方法输入数据1.手动输入数据手动输入数据2.输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加3.你可以将表格出口到Word 或Excel 中操作，并再进口到Analyst02/20/20102010 ASC33基础应用培训在批文件表格中输入信息Right Click and select Fill Down or AutoIncrement有种方法输入数据有种方法输入数据1.手动输入数据手动输入数据2.输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加3.你可以将表格出口到Word 或Excel 中操作，并再进口到Analyst02/20/20102010 ASC34基础应用培训在批文件表格中输入信息有种方法输入数据有种方法输入数据1.手动输入数据2.输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加3.a.输入表格b.在Excel里编辑c.再输入至 Analyst中a2a102/20/20102010 ASC35基础应用培训在批文件表格中输入信息b1.Open.txt fileb2.Edit fileb3.Save as.txt file有种方法输入数据有种方法输入数据1.手动输入数据2.输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加3.a.出口表格b.在在Excel里操作里操作c.再进口至Analyst中02/20/20102010 ASC36基础应用培训在批文件表格中输入信息c.Right click有种方法输入数据有种方法输入数据1.手动输入数据2.输入一个值，选中标题，在黑色区域中点右键选择填充或自动增加3.a.输出表格b.在Excel里操作c.再输入至再输入至Analyst中中02/20/20102010 ASC37基础应用培训在批文件表格中增加的特点你可以通过选中作为模板使用输入每个样品的质量你可以通过选中作为模板使用输入每个样品的质量可运行多个方法可运行多个方法栏目可隐藏或可见可增加不同类型的栏目02/20/20102010 ASC38基础应用培训在批文件表格中增加的特点1.Right click2.你可以通过选中作为模板使用输入每个样品的质量可运行多个方法栏目可隐藏或可见栏目可隐藏或可见可增加不同类型的栏目02/20/20102010 ASC39基础应用培训在批文件表格中增加的特点2.1.Right click你可以通过选中作为模板使用输入每个样品的质量可运行多个方法栏目可隐藏或可见可增加不同类型的栏目可增加不同类型的栏目02/20/20102010 ASC40基础应用培训检查或选择样品位置位置表格是默认样品位置或你可选择样品现在位置 如果选错了样品架你可以在白色区域点击右键该变样品架 欲看小瓶位置，双击白色区域 你可以选择或删除样品位置Right click02/20/20102010 ASC41基础应用培训设置快速定量方法如果定量方法以前建立过，在下拉菜单中选择方法 点击快速定量快速定量键开始定量方法编辑器 你可以在选中的采集方法上通过编辑器创建或编辑定量方法 新的定量方法加入到项目文件夹中02/20/20102010 ASC42基础应用培训在定量表格中 使用增加了浓度的栏目的快速定量 注意定量类型中的下拉菜单 根据样品类型样品需要重新分类 与样品表格一样，你可以使用输出和输入功能02/20/20102010 ASC43基础应用培训提交批文件 Part 11.点击上交键2.a.在察看View下选择样品列队或b.点击察看列队键2a2b102/20/20102010 ASC44基础应用培训提交批文件 Part 2 通常你可以点击开始键则运行开始 有时调谐键是启动的。点击调谐键关掉它，点击Standby键,然后点击准备键 另外，你可以使用平衡键在运行样品前准备系统Analyst软件定量模式介绍02/20/20102010 ASC46基础应用培训选择运算法则 有2个方法选择处理数据运算法则2.在浏览模块中在浏览模块中1.在定量模块中在定量模块中02/20/20102010 ASC47基础应用培训定量指南 选择样品1.快速判断积分运算法则是否激活2.3.4.02/20/20102010 ASC48基础应用培训初始表和查询设置1.输入保存的表的设置或使用默认2.如果需要选择查询3.点击下一步02/20/20102010 ASC49基础应用培训定量方法选择如果是不知道的列表，创建新的方法如果是知道的列表，你可以使用以前创建的方法02/20/20102010 ASC50基础应用培训峰定义设置当用一个离子不能满足你的要求时，将Sum Multiple Ions 选中从下拉菜单中快速选择合适的值02/20/20102010 ASC51基础应用培训定义内标和化合物峰的设定你可以通过下面操作定义峰:1.设定保留时间RT或相关保留窗口2.选择:a.背景b.峰的区域3.使用高级设定2a.1.3.2b.注意注意:这些参数根据激活的处理数据的运算法则不同而不同02/20/20102010 ASC52基础应用培训指定校准选择按需要指定标准曲线类型和权重，然后点击结束结束02/20/20102010 ASC53基础应用培训编辑表格和栏目设置 Part 11.在表格上点击右键02/20/20102010 ASC54基础应用培训编辑表格和栏目设置 Parts 2&33.如果需要，编辑每一个组如果需要，编辑每一个组2.选择栏目02/20/20102010 ASC55基础应用培训保存表格和栏目设置1.2.02/20/20102010 ASC56基础应用培训浏览和修改峰1.选择峰浏览的栏目或窗口2.欲改变浏览选项，在峰栏目中点击右键选择Options 1.2.02/20/20102010 ASC57基础应用培训选择峰浏览选项02/20/20102010 ASC58基础应用培训调节参数发现峰1.点击显示或隐藏参数显示或隐藏参数键一次或俩次2.调节参数参数设置。如果新设置时可以接受的，点击接受键保存这个样品的设置3.欲将新的设置给所有的样品，在总离子图谱TIC上点击右键，选择更新方法更新方法，在下2个弹出的窗口选择是是，确认改变。1.2.3.3.02/20/20102010 ASC59基础应用培训调整回归 Part 1 1.点击校准校准-栏目栏目或校准校准-窗口窗口-打开一个标准曲线2.点击回归回归1.2.02/20/20102010 ASC60基础应用培训调整回归 Part 2.通过调整拟和和比重，曲线拟和度和样品结果能得到很大改善0.2 ng/mL 分析物浓度通过选择线性和1/x权重计算得出的02/20/20102010 ASC61基础应用培训保存定量分析结果 只有良好的数据分析1.点击文件然后保存2.命名定量结果。注意文件是*.rdb02/20/20102010 ASC62基础应用培训保存定量分析方法02/20/20102010 ASC63基础应用培训输出表格2.命名和保存。确定在保存前选择正确的输出选项1.3.02/20/20102010 ASC64基础应用培训拷贝除了数据以外的任何事1.工具项目拷贝数据2.在目录下，选择需要拷贝的文件02/20/20102010 ASC65基础应用培训拷贝数据02/20/20102010 ASC66基础应用培训在MicrosoftWord中输出的图表02/20/20102010 ASC67基础应用培训打印定量报告 Option 1 打开峰浏览窗口/栏 去文件打印报告 选择打印报告中现有的或所有的样品02/20/20102010 ASC68基础应用培训Option 2 Analyst报告软件版本 1.0提供基本的报告功能允许定量数据的输出和在Explore模块中基本的图表打印也允许打印的页面上的标题和脚注格式化使得打印的报告符合常规实验室的标准操02/20/20102010 ASC69基础应用培训Analyst报告软件工作流程02/20/20102010 ASC70基础应用培训Analyst Reporter软件特征 在定量模式下如果你有Analyst 1.4.2 软件，在工具栏上会出现一个新的图标-类似这样的 点击图标打开此特征 此特征也能从工具菜单中打开02/20/20102010 ASC71基础应用培训选择模板和打印选项 这里有一些已有的模板可供选择。在右侧有一个简短描述，你也可以浏览样本。你可以选择每个样品一个报告的报告模板或所有样品一个报告的报告模板 选择打印选项 点击 OK02/20/20102010 ASC72基础应用培训将报告保存至你的项目文件夹中 Analyst Reporter软件自动选择合适的文件路径来保存 给报告一个相关的名字 点击 OK 一个状态窗口会弹出来告诉你报告进程 最后在MicrosoftWord中打开报告02/20/20102010 ASC73基础应用培训在MicrosoftWord中创建报告 从模板中选择相关的信息创建文件 如果在设置中没有用打印选项，打印Microsoft Word 报告 简单操作并且信息可以快速浏览02/20/20102010 ASC74基础应用培训Analyst报告软件版本 1.0 创建你自己的模板 你可以通过以下途径创建你自己的模板：开始键选则项目 Applied Biosystems MDS Sciex 报告模板创建或编辑报告模板 Analyst报告帮助在相同的位置 你可以通过以下途径创建快捷键：在创建或编辑模板上点击右键然后选择发送到桌面（创建快捷键）双击快捷键打开项目02/20/20102010 ASC75基础应用培训创建定制的模板 请务必阅读预防声明请务必阅读预防声明!点击OK 继续 不要不要改变文件路径否则不能用定制的模板02/20/20102010 ASC76基础应用培训插入客户Logos 加入客户自己的logos是很容易的打开标题/脚注浏览器并删除Applied Biosystems|MDS Sciex的Logo粘贴你自己的02/20/20102010 ASC77基础应用培训使用工具栏去创建报告元素 允许你从那些结果表格和数据文件中提出来的大量的数据值中选择 在“可用的标签”的下拉菜单列表中可选择看见所有的值或在你的选项下的列表中一个特定的范畴的值 对于有数字格式的标签，你可以在Microsoft Word模板中编辑数字格式。这个格式使用Microsoft Visual Basicdevelopment 系统完成的。02/20/20102010 ASC78基础应用培训格式特征定义和举例Content Tags“#00.00e#是含有4个有效数字的指数数字格式。02/20/20102010 ASC79基础应用培训Loops&Criteria 键 举例 必须指明第一个loop是“Samples”输入loop的条件是“Sample Type=Standard”打印样品名和面积的列表 使用Content Tags给loop添加合适的文字1.输入输入模板输出模板输出2.输入输入模板输出模板输出02/20/20102010 ASC80基础应用培训Loops&Criteria 键 添加内容标签 必须指明loop中中行为注意FOR,IF,and END的位置 输入SAMPLE NAME=然后选择Content Tags中的Sample Tags 输入 AREA COUNTS=然后选择Content Tags中的AnalyteTags 保存模板输入输入模板输出模板输出02/20/20102010 ASC81基础应用培训前几页幻灯片创建的基本的样品报告 上方是在创建创建/编辑模板编辑模板编程后模板的样子 右方是使用上方基本模板后的结果表中的数据输出02/20/20102010 ASC82基础应用培训Content Group 键允许你从大量的大量的“预先包装”的经常使用的报告中选择，比如数据表格、信息表格、图表和信息盒等等。允许使用一些定制的常规的元素快速构建复杂的报告。除了使用提供的定制的元素外，你可以轻松的创建你自己的定制的元素的合集来供你自己报告的使用。02/20/20102010 ASC83基础应用培训The Graph 键允许你从那些从结果图表和数据文件中提出来的Analyst软件的图表中选择图表标准选择的对话框02/20/20102010 ASC84基础应用培训The Equation 键允许你使用任何可用的数字的Content Tags来创建简单的数学公式。简单的对话框允许你最多选择5个变量来创建一个简单的数学公式，在报告中得到推导的值。比如，你可以创建一个新的值，是另外2个的比值，或在报告中改变的报告结果中的浓度单位。02/20/20102010 ASC85基础应用培训Template Script 键 允许你给你的报告模板附加进行的模板 在数据结果之上创建和保存其他的数据 给数据结果文件添加其他的数据栏使用到报告中。为你的报告模板创建其他的图表 在数据结果之上为以后的分析提交样品 在报告和其他项目之间创建定制的联系02/20/20102010 ASC86基础应用培训The Create Report!键在Analyst软件中使用currently open Results Table可以在Word中创建一个报告在工具栏中按下Create Report!键就会显示Analyst 报告对话框的主页:如果有多个结果表打开，会在那个激活的表格上或在定量模式下显示“最上方”的窗口上创建报告这项功能，与在Analyst中打开一个简单的结果表一起，是一个对报告模板帮助测试和除错的简单方法。02/20/20102010 ASC87基础应用培训Analyst 报告软件帮助 正如以前提起的，与这项功能相联系的帮助文件可通过以下途径关联：按开始键和选则程序Applied Biosystems MDS Sciex Analyst 报告 Analyst 报告帮助,或当报告模板打开时点击Word中的帮助文档 说明步骤创建定制模板使用 这是你学习此功能能做什么的很好的指南结束