异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究.docx
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1、异株荨麻茎叶中黄酮类化合物含量测定方法的研究【摘要】 目的研究异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的测定方法。方法分别采用Al3络合分光光度法和HPLC法测定异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的含量,并对测定结果进行比较;同时以黄酮类化合物的含量为指标,优选出了超声波辅助法提取异株荨麻茎叶中黄酮类化合物的最佳条件。结果超声波辅助法的最佳提取条件:体积分数为80%的乙醇溶液、料液比为130,提取温度为60;HPLC法同时测定异株荨麻中芦丁和槲皮素的高效液相色谱条件:色谱柱选用DiamosnilTM钻石C18,柱温25,流动相为甲醇:%磷酸=5545,流速 ml/min,检测波长370 nm。结论Al3络合分光光度
2、法操作方便,简单,快速;HPLC法可以同时准确地测定出样品中不同黄酮类化合物的含量,精确性和灵敏度高。两种方法测定的总黄酮含量相差甚微,应根据不同的测定目的,选择适当的测定方法。【关键词】 异株荨麻 黄酮类化合物 高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTo study on determination methods of the contents of flavonoids in stems and leaves of Urtica dioica L.MethodsThe contents of flavonoids in the extracts from Urical dio
3、ica L. stems and leaves were determined and compared by Al(NO3)3 colorimetry and HPLC. The method with ultrasonic wave was applied to extract flavonoids from the leaves and stems of Urtica dioical L. With the contents of flavonoids as the index, the best extraction conditions were selected out. Resu
4、lts The best extraction conditions were as follows:soaking the raw material with ethanol(80%, v/v)-water solution (130) at 60. HPLC method was established for determination of rutin and quercetin in the sample of Urtica dioica L. Adiamonsil TM C18 (25 mm mm,5 m by volume) containing % phosphoric aci
5、d used as mobile phase at flow rate of 1 mlmin-1 for gradient elution. UV detector was set at 370 nm, and the column temperature was set at 25 . ConclusionThe method of Al(NO3)3 colorimetry is easy and quick. The method of HPLC is accurate and sensitive. It can simultaneously and exactly determine t
6、he contents of different flavonoids. The results show that the contents of total flavonoids in Urtica dioica L. by the two methods are extremely equal. For different study objective, proper method can be chosen.Key words:Urtica dioica L.; Flavonoids; HPLC异株荨麻Urtica dioica L.为荨麻属Urtica linn.的一种多年生草本植
7、物,在我国又叫大荨麻,全草或根均可入药,为一常用的民族药和民间药,广泛用于治疗风湿、尿石症、糖尿病、贫血、哮喘、心绞痛、前列腺炎、前列腺增生等1及一些老年性疾病,疗效显着。现代医学药物研究认为,异株荨麻具有抗风湿、抗过敏、增强人体免疫力、美容及保健等多种作用2。其广泛分布在欧洲、美洲、非洲和亚洲的温带地区,在我国云南、西藏、青海和新疆等地也有野生种分布。对于异株荨麻的研究和开发利用,国外较为成熟,而目前国内的研究还处于起步阶段,一般只在民间应用。现有研究已从大荨麻的醇提物和水提物中分离出约90种化合物,包括甘油硬脂酸酯、三萜酸、香豆素、简单酚、木脂素、神经酰胺及羟基脂肪酸、有机酸、多糖、植物凝
8、集素等3。其活性成分主要有黄酮类、有机酸类、酚类、苯丙素类、甾醇、蛋白质、多糖等。 相关药理和临床实验证实,黄酮类化合物作为药用植物的主要活性成分之一,具有广泛的药理功能,如不少治疗冠心病有效的中草药或活血化瘀类中药中均含有黄酮类化合物,芦丁(rutin)、槲皮素(quercetin)、葛根素(puerarin)、人工合成的立可定(recordin)等均有明显的扩冠作用,并已被用于临床4,5;还有许多黄酮类化合物被证明有抗癌和抗HIV病毒活性6,7。由于该类化合物具有多种多样的生物活性和药理功能,且毒性较低,引起了人们的重视,已经成为当今社会研究和开发利用的热点,是寻找有开发应用前景的先导化合
9、物和生物活性成分的源泉。 目前分析黄酮类化合物的方法主要有: 分光光度法、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、极谱法和色谱-质谱联用等8。本文分别用分光光度法、高效液相色谱法对异株荨麻地上部分的黄酮类化合物进行了测定,并比较分析了两种测定方法的结果,为测定异株荨麻中黄酮类化合物的含量奠定了基础,同时也为异株荨麻的质量控制提供了科学依据。1 仪器与试剂1 仪器Spectrum752型紫外-可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);KQ-500DB型数控超声波清洗器;SENCOR-201型旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司); Anke TDL-5型离心机(飞鸽牌);FW135型中草药粉碎机;Agi
10、lent 1100 型高效液相色谱仪;索氏提取器。2 试剂流动相所用甲醇为色谱醇;水为娃哈哈纯净水,用时均过微孔滤膜(m);样品提取所用乙醇和氯仿均为分析醇(北京化工厂);槲皮素和芦丁对照品均购自中国药品生物制品检定所。3 材料样品采于北京林业大学西山林场,在105杀青15 min后自然晾干,经中草药粉碎机粉碎,过80目筛后,于干燥器中保存、备用。2 方法与结果样品脱脂处理取样品粉末适量,于100 ml具塞三角瓶中,加60 ml氯仿溶液,摇匀,在45下,超声处理30 min,取出趁热进行离心 提取料液比的选择:精确称取脱脂后的样品1 g于100 ml具塞三角瓶中,分别加入80的乙醇溶液20,3
11、0,40 ml和的盐酸10ml,摇匀、称重;在60,100 Hz下,超声处理30 min,取出冷却至室温,称重、补足失重、离心(3 000 r/min,5 min),取上清液于三角瓶中,下层沉淀重新分别加入80的乙醇溶液20,30,40 ml和 N的盐酸10 ml,重复提取3次,合并上清液。在60下浓缩于10 ml容量瓶中,用80的乙醇溶液定容至刻度,用分光光度法测定黄酮含量见表2。结果表明,料液比为130时,提取效率最高。 表 2 料液比对提取效率的影响提取温度的选择: 精确称取脱脂后的样品1 g于100 ml具塞三角瓶中, 加80%的乙醇溶液30 ml和 N的盐酸10 ml,摇匀、称重;分
12、别在40,50,60的温度和100 Hz下,超声处理30 min,取出冷却至室温,称重、补足失重、离心(3 000 r/min,5 min),取上清液于三角瓶中,下层沉淀重新加入80%的乙醇溶液30 ml和的盐酸10 ml,重复提取3次,合并上清液。在60下浓缩于10 ml容量瓶中,用80%的乙醇溶液定容至刻度,测定黄酮含量见表3。结果表明,黄酮提取效率随温度的升高而提高,因为随着温度的升高,分子的运动速度加快,有效成分渗透和溶解速度加快,黄酮类化合物溶出度自然会加大,但当温度过高时会造成黄酮类化合物的化学结构变化,因此当温度超过70时,黄酮提取效率有下降趋势,同时杂质的溶出量也大量增加,给后
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