浅论多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究.docx
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1、浅论多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究【摘要】 目的 :了解多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法 :自2006年1月至2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌,微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种氨基糖苷类修饰酶基因。结果:20株多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、奈替米星及阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%,其中氨基糖苷类修饰酶aac(3)-基因阳性15株,aac(6)-b基因阳性1株,ant(3”)-基因阳性16株,aph(3)-基因阳性3株,ant(2”)-基因阳性
2、1株。结论:多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是aac(3)-、aac(6)-Ib、ant(3”)-、aph(3)-和ant(2”)-等5种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;从肺炎克雷伯菌中检出aac(6)-Ib-Cr型和aph(3)-均为国内首次。【关键词】 肺炎克雷伯菌;氨基糖苷类修饰酶;多重耐药性Abstract: Objective: To understand the existence of genes encoding aminoglycoside modifying enzyme in multi-resistant Klebsiella pneumoniae. Me
3、thods: Samples of 20 strains of multi-resistant Klebsiella pneumoniae collected from the patients from January 2006 to October 2006 were isolated and screened out. The sensitivity of 20 antibacterial agents by means of broth induction was detected, and genes of aminoglycoside modifying enzyme by way
4、 of polymerase chain reaction were detected. Results: The resistance rates of 20 strains of multi-resistant Klebsiella pneumoniae to aminoglycoside,such as gentamicin,tobramycin,netilmicin and amikacin were 75%,80%,65% and 60%,respectively. Of which, 15 strains of aminoglycoside modifying enzyme aac
5、 (3)- gene positive, 1 strain of aac (6)-Ib,16 ones of ant (3”)-,3 ones of aph (3)- and 1 strain of ant (2”) were found at the same time. Conculsion: The main reasons of multi-resistant Klebsiella pneumoniae resistance to aminoglycoside are the presence of aminoglycoside modifying enzymes called aac
6、 (3)-, aac (6”)-Ib, ant (3”)-, aph (3)- and ant (2”)-genes. Genes of aac (6)-Ib-Cr and aph (3)- in Klebsiella pneumoniae are both first found and reported in China.Key words: Klebsiella pneumoniae;aminoglycoside modifying enzyme;multidrug resistance肺炎克雷伯菌(,KPN)已是医院感染的重要病原菌。近年尽管国内已有KPN菌的氨基糖苷类药物部分耐药相关
7、基因研究报道1-2,但报道所涉及耐药相关基因较少。我们曾报道了一组老年患者KPN菌分离株-内酰胺酶基因分型研究,为进一步了解我院多重耐药KPN菌氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况,我们对20株分离自老年病房产-内酰胺酶的KPN菌进行了15种氨基糖苷类修饰酶基因检测,现报告如下。1 材料和方法菌株来源及鉴定 20株均为分离自2006年1月-2006年10月间我院老年病房患者(年龄6190岁)临床标本,分别为:痰液13份,尿液6份,胆汁1份。全部菌株均使用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。抗菌药物敏感性试验 药敏试验按美国CLSI 2006年版要求。质控菌株:大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌
8、ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心,抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法。细菌处理 挑纯培养菌落置入 mL离心管内(内预置200 ng/mL蛋白酶K溶液200L),56水浴2 h,改95 水浴10 min,离心(15 000 r/min)30 s。上清液即为基因检测的模板液,-20 冰箱保存备用。基因PCR检测 15种氨基糖苷类修饰酶基因检测均为PCR法,靶基因引物序列和目的产物长度见表1。各种靶基因PCR扩增体系均为:每反应体系P1引物1L(mmol/L)、P2引物1L(mmol/L),dNTPs 2L(2 mmol/L),10倍缓冲液2L(KCl 10
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