化验设备操作规程文件版.doc

化验设备操作规程文件版

147
2020年5月29日
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生物技术有限公司
管理性文件
文件编号:JC/C001-
标题:
化验设备的操作规程
生效日期: -11-08
页 号:第1页 共 68 页
目的: 建立仪器操作规程,方便检测工作的进行,确保及时准确的对样品进行分析,对仪器的合理操作能够有效延长一起的使用寿命,保证生产的连续进行。
目录:
1、 PCR仪………………………………………………………2
2、 超净工作台………………………………………………….3
3、 尘埃粒子计数器…………………………………………….4
4、 氮吹仪……………………………………………………….14
5、 分光光度计………………………………………………….14
6、 高效液相色谱仪…………………………………………….15
7、 高压灭菌锅………………………………………………….17
8、 恒温干燥箱………………………………………………….22
9、 恒温水浴…………………………………………………….25
10、 离心机…………………………………………………25
11、 培养箱…………………………………………………26
12、 天平…………………………………………………....27
13、 细胞粉碎机……………………………………………29
14、 显微镜…………………………………………………33
15、 血小板聚集仪…………………………………………34
16、 移液器…………………………………………………45
17、 马弗炉…………………………………………………45
18、 恒温振荡器……………………………………………47
19、 摇床……………………………………………………48
20、 微波萃取、消解仪……………………………………48
21、 酶标仪…………………………………………………48
22、 层析实验冷柜…………………………………………51
23、 三用紫外分析仪………………………………………52
24、 PH计………………………………………………….52
25、 离子计…………………………………………………54
26、 电导率仪………………………………………………54
27、 水分测定仪……………………………………………54
28、 超声波清洗器…………………………………………55
29、 电泳槽…………………………………………………59
30、 低温冷却循环泵………………………………………62
31、 凝胶成像仪……………………………………………63
32、 真空泵…………………………………………………64
33、 液态罐…………………………………………………65
34、 低温恒温反应浴槽……………………………………66
35、 数字旋光仪……………………………………………67

1☆PCR仪
PCR仪使用说明:
1、开机:打开开关,视窗上显示”SELF TEST”,显示10秒中后,显示RUN-ENTER菜单:”-RUN ENTER PROGRAM  PROGRAM ”准备执行程序。

2、放入样本管,关紧盖子。

3、如果要运行已经编好的程序,则直接按<Proceed>,用箭头键选择已储存的程序,按<Proceed>,则屏幕显示:”-ENABLE      DISABLE  HEATED LID” 按<Proceed>选择ENABLE,则开始执行程序。

4、如果要输入新的程序,则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按<Proceed>,屏幕显示  ” -NEW LIST EDIT DELET”,按<Proceed>,1)选择NEW,命名新的程序,最多8个字母,输入后按<Proceed>确认。

2)输入程序步骤:名字输入后,显示” STEP1  _TEMP GOTO   OPITON  END”,按<Proceed>则能够输入温度(0～100℃),按<Proceed>确认后,则能够输入孵育时间,用<Select>键移动光标,输入数字,完成后按<Proceed>确认,跳到下一步,输入方式同上。

3)选择GOTO,输入循环步骤时链接到第几步(循环数最多可达9999次)(为实际循环数-1)。

4) 选择option,显示”STEP EXTENDI NCREMENT SLOPE ”再选择increment,按<Proceed>确认,输入初始的温度,确认后输入时间,按<Proceed>确认,然后输入每个循环增加或减少的温度,增加用正值,减少用负值(-0.1℃～6℃),按<Proceed>确认。选择extend,按<Proceed>确认,输入每个循环增加或减少的时间(-60～60秒),按<Proceed>确认。

选择slop(指温度上升或下降的速率),输入温度的改变值(-0.1～1.5℃)按<Proceed>确认,然后输入加热或致冷的速度,按<Proceed>确认。

4)选择End,输入结束步骤。

5、输入完成的程序后,到RUN-ENTER菜单,选择新程序,开始运行。

6、其它:用<pause>能够暂停一个运行的程序,再按一次继续程序。用<stop>或<Cancel>可停止运行的程序。

编辑程序:

1、能够用<Cancel>键删除输错的值,输入新的值后按<Proceed>确认。

2、对于未输完的程序,要先输入END,按<Proceed>将程序储存后才能删除。

3、删除已经储存的程序:从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM,按<Proceed>,显示主菜单,选择DELET,用<Select>选择删除。

4、查看程序的步骤:在主菜单上选择LIST,按<Proceed>,用<Select>将选择名称,再按<Proceed>,显示程序的第一步,用<Select>键向前、向后翻页查看,此时不能改变程序的值。

编辑已有的程序:

1、从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM,按<Proceed>,显示主菜单,选择EDIT,按<Proceed>确认,用<Select>键选择要编辑的程序,按<Proceed>显示程序的第一步。

2、用<Select>键将光标移到要改变的温度或循环的值上,键入新值,按<Proceed>确认,按<Cancel>删除键入的值,出现空格,键入新值后确认。

注:一旦值被改变或删除,原来的值不能恢复,必须重新键入。

3、编辑时间值:必须重新键入小时、分钟、秒,按<Proceed>。

如何设置一个PCR体系:

一般分为8步:

1、预变性:可用94～95℃,2～10min,一般用5min。

2、变性:一般用94℃,30s～2min,一般45s～1min。

3、退火:温度自定,30s～2min。

4、延伸:70～75℃,一般72℃,对于＜2kb,＜1min;＞2kb,每增加1kb加1min。

5、循环数:一般25～35个循环。

6、最终延伸:72℃,5～15min。

7、保存:10℃,时间设为0。

8、END。

2☆超净工作台
超净工作台使用方法及注意事项
使用方法
使用工作台时,应提前50分钟开机,同时开启紫外杀菌灯,处理操作区内表面积累的微生物,30分钟后关闭杀菌灯(此时日光灯即开启),启动风机。
对新安装的或长期未使用的工作台,使用前必须对工作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作,再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
操作区内不允许存放不必要的物品,保持工作区的洁净气流流型不受干扰。
操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。
操作区的使用温度不能够超过60℃。
超净工作台根据环境的洁净程度,可定期(一般2～3个月)将粗滤布(涤纶无纺布)拆下清洗或给予更换。
定期(一般为一周)对环境周围进行灭菌工作,同时经常见纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀菌灯表面擦干净,保持表面清洁,否则会影响杀菌效果。
当加大风机电压已不能使风速达到0.32m/s时必须更换高效空气过滤器。
更换过滤器时,可打开顶盖,更换时应注意过滤器上的箭头标志,箭头指向即为层流气流向。
更换高效过滤器后,应用尘埃粒子计数器四周边框密封是否良好,调节风机电压,使操作区平均风速保持在0.32-0.48m/s范围内,再用尘埃粒子计数器检查洁净度。
超净工作台注意事项
超净工作台接通超净工作台的电源
旋开风机开关,使风机开始正常运转,这时应检查高效过滤器出风面是否有风送出。
检查照明及紫外设备能否正常运行,如不能正常运行则通知工程部检修。
工作前必须对工作台周围环境及空气进行超净处理,认真进行清洁工作,并采用紫外线灭菌法进行灭菌处理。
净化工作区内严禁存放不必要的物品,以保持洁净气流流动不受干扰。

3☆尘埃粒子计数器
一、用途
   Y09-301型激光尘埃粒子计数器(以下简称仪器)用于测量洁净环境中单位体积空气内的尘埃粒子大小及数目,可直接检测洁净度等级为三十万级至十级的洁净环境。
本仪器采用半导体激光光源,液晶屏显示,其体积小、重量轻、检测精度高、功能操作简单明了,电脑控制,可贮存、打印采样结果,测试洁净环境十分便利。广泛应用于电子、光学、化学、食品、化妆品、医药卫生、生物制品、航空航天等部门。
二、主要技术参数
１．外形尺寸　  　　  280×236×126mm3(宽×深×高)
２．质量　 　  　　   4.5kg
３．最大功耗　 　　   10 W
４．供电电源　  　　  直流电源16.8V
５．粒径通道　  　　  0.3、0.5、1、3、5、10(µm)
６．采样流量　        2.83L/min
７．使用环境条件　    温度:10℃——30℃
    　　　　　　　　  湿度:20%——75%
                      大气压力:86kPa——106kPa
８．允许最大采样浓度　35000颗/L(尘埃颗粒粒径不大于0.5µm),采样空气中不得含有酸碱等腐蚀性气体
9 ．自净时间　  　　　≤20min
三、工作原理
本仪器采用光散射原理,当空气中悬浮粒子经过光敏区时,散射出与其粒径成一定比例的光通量,经光电转换、放大及处理后得到被采集粒子当量直径和数量。
四．功能
■前面板
含有液晶屏及九个功能键:”复位”、”清零”、”采样”、”打印”、”退出”、”增”、”减”、”确认”、”循环”。液晶屏显示内容由电脑控制,其程序如下:
1:开机画面
开机画面见图 (一)

Y09-301型
激 光 尘 埃 粒 子 计 数 器 

图(一)
2:设置画面
按”确认”键进入设置画面
●    数据测量
日期: 09月06日
时间:08时05分
周期T:01分    报警级:0
置信度状态:0  测点数:0点
测量位置:000
清除数据:0
数据查询
设置画面见图(二)
图(二)
每按一次”减”键,●光标依次下移,每按一次”增”键,●光标依次上移,并伴有”吡”声。当●光标移至日期,按”确认”键进入调整日期界面, 09月06日,表示调整位,按”增”键依次增加(0-9),每按一次 ”减”键,光标依次向后移并循环。按”确认”键保存当前设置并退出。其它功能设置同上操作相同。
注:周期T:代表采样周期,可在１－10分钟之间选择。
报警级为0-3,0代表无报警功能,1代表百级报警,2代表千级报警,3代表万级报警。环境超过设置级别,采样周期结束时发出”嘟”报警声。
置信度状态:”0”表示置信度状态关,置信度状态:”1”表示置信度状态开。
测点数为要测量的地点数,可在２－９之间设定(计算ＵＣＬ时用)。
测量位置:000-999任意可调,000表示不关心位置,其余可自己设定。
清除数据:为清除内存数据,０不清除内存,若要清除内存则将０调到５后按”确认”键数字变为９表示内存全部清除(轻易不可置５)。
参数设置完毕,须将”●”光标移至数据测量,按确认键进入测量界面。
3:查询画面
”●” 光标移至数据查询,按确认键进入查询界面图(三) 
查询 
●    日期: 09月06日
开始查询                    

图(三)                            
每按一次”减”键,●光标依次下移,每按一次”增”键,●光标依次上移,并伴有”吡”声。当●光标移至日期,按确认键进入调整日期界面, 09月06日,表示调整位,按增键依次增加(0-9),每按一次减键,光标依次向后移并循环。按确认键退出当前设置并保存当前设置。●光标移至开始查询,按确认键开始查询,过2-3秒后屏幕显示要查询的数据。如查找无数据,则显示没有数据。按退出键,返回设置画面。●光标移至数据测量,按确认键进入测量界面。
4:测量界面
测量画面见图(四)
UCL:OFF                  F:0.00L/min 
0.3μm                 5
   0.5μm                 3
    1.0μm                 0  
   3.0μm                 0    
    5.0μm                 0
10.0μm                 0
L:000    T:060      05/09/05   10:34
W:OFF   P:OFF   S:OFF  R:0086/1000

图(四)
屏左上角UCL:OFF表示置信度计算功能关闭。屏右上角F:0.00L/min表示采样泵关闭。0.3、0.5、1、3、5、10(µm)表示采样粒子颗粒的粒径,后面的数值表示颗粒数。L:000 表示地址号为0,T:060表示采样周期为60秒,05/09/05表示最后一次采样保存的日期,10:34表示最后一次采样保存的时间。W:OFF表示观察功能关闭。 P:OFF表示打印功能关闭,按”打印”键打开(ON)。S:OFF表示存储功能关闭,按”确认”键打开(ON)。R:0086/1000表示最多存储1000条数据中存储了86条数据。在不采样的情况下,按”循环”键,屏幕显示的粒子数在每个周期内的粒子数(颗/采样周期的采样量)见图4及浓度(颗/立方米)见图(五)之间切换。按”增”或”减”键可观看存储的测量数据。
按”采样”键后,屏幕中F:0.00L/min变为F:2.83L/min(采样流量)。T:060变为T:001/060(001-060递增变化),此时按”循环”键能打开W:ON,表示观察功能开启,屏上实时显示当前周期内采样粒子数目的变化见图六, ”循环”键的功能在三种显示方式之间切换,即图(四)的周期内总粒子数,图(五)的粒子浓度及图六的实时显示。
UCL:OFF                  F:2.83L/min
0.3μm                 1765/m3
   0.5μm                 1059/m3
    1.0μm                    0/m3          
   3.0μm                    0/m3 
    5.0μm                    0/m3
10.0μm                    0/m3
L:000    T:060      05/09/05   10:34
W:OFF   P:OFF   S:OFF  R:0086/1000
图(五) 
图(五)为仪器所显示粒子浓度。
UCL:OFF                  F:2.83L/min 
0.3μm                10
   0.5μm                 3
    1.0μm                 0  
   3.0μm                 0    
    5.0μm                 0
10.0μm                 0
L:000    T:005/060    06/03/20   10:34
W:OFF   P:OFF   S:OFF  R:0086/1000
图(六)
注意:进入数据测量后的第一状态为上次关机时最后一次保存的数据。
4:置信度(测点数２－９)的使用
在图(２)下,将置信度状态设位１,测点数２－９之间任定(根据房间面积及洁净度等级),测量位置自己编号,现举例说明,一号房间测３点:
首先:调整参数为以下状态,
●    数据测量
日期: 09月06日
时间:08时05分
周期T:1分    报警级:0
置信度状态:1 测点数:3点
测量位置:101
清除数据:0
数据查询

第二:按”确认”进入
UCL:ＯＮ  Ａ＝１／３   Ｎ＝１    F:0.00L/min
   0.5μm                 0
    5.0μm                 0
L:101     T:060       05/09/05   10:34
W:ON   P:OFF    S:OFF  R:0086/1000

第三:按”采样”键打开采样泵,进行第一点测量,此时画面为
UCL:ＯＮ  Ａ＝１／３   Ｎ＝１    F:2.83L/min
   0.5μm                 3
    5.0μm                 0
L:101     T:005/060    05/09/05   10:34
W:ON   P:OFF    S:OFF  R:0086/1000

若采样数据理想,则按”确认”键保存(屏下方Ｓ:ＯＮ),此时屏上方(Ｎ＝)随着采样次数而变,一般情况(N=4)即可按”采样”键停止采样。Ｎ值必须大于1,即最少采样一个周期,测量才有效。

UCL:ＯＮ  Ａ＝１／３   Ｎ＝3    F:2.83L/min
   0.5μm                 3
    5.0μm                 0
L:101     T:009/060    05/09/05   10:34
W:ON   P:OFF    S:ON  R:0088/1000

●    数据测量
日期: 09月06日
时间:08时10分
周期T:1分    报警级:0级
置信度状态:1 测点数:3点
测量位置:102
清除数据:0
数据查询
 换另一地点采样,若没关机,直接按”退出”键将图(２)设定为  
若关机,也必须将图(２)设定为上述状态。
重复上述第二、第三步骤。
●    数据测量
日期: 09月06日
时间:08时15分
周期T:1分    报警级:0级
置信度状态:1 测点数:3点
测量位置:103
清除数据:0
数据查询 
换第三地点,将图(２)设定为
重复上述第二、第三步骤。
此时三点测量已全部完毕,画面显示为
测量结果 。。０５－０９－０６　０８:２０   １０３
Max:PCM
0.5μm:               353
      5.0μm:                70  
UCL:PCM
　　  0.5μm:               461 
5.0μm                92   
CLASS:1000

注意:在最后一点采样关闭前,按”打印”键,令P:ON,则结束时打印置信度值。在采样过程中若打开”打印”键打印的则是当前周期内的粒子数或浓度值(视显示方式)。
若不关心测量位置,可不退回参数设置画面,在测量界面直接”采样”打开关闭,即为完成一地址点测量。
在置信度采样过程中,若要中断采样重新开始,则退到图2设置画面,将置信度设置状态设为”0”按”确认”键,然后重新将置信度状态置”1”按”确认”键,再进入测量界面即可。
5:各功能键介绍
”复位”:仪器进入图(１)状态。
”确认”:仪器进入图(２)状态,当●在数据测量时,按此键进入图(３)状态,当●在图(２)其余情况下,此键为参数设定开始及结束键。在图(３)状态时,此键为采样数据存储开关键,令Ｓ:ＯＮ或者ＯＦＦ。
”退出”:仪器由测量界面退回到参数设置界面。由查询状态退回到参数设置界面。
”清零”:重新开始一个周期的采样。
”采样”:采样泵开或关,画面显示Ｆ:2.83L/min或者0.00L/min.
”打印”:打印状态的开或关,画面显示P: OFF或ON。当测量数据显示方式为浓度时打印浓度,其它情况下,打印对应周期内的粒子数。
”循环”:在测量界面下,若采样泵打开,此键实行三种显示状态之间的转换,▲观察状态,W:ON,粒子数不断累加,直至采样周期结束,重新开始新的周期。▲W:OFF,显示上一周期内总采样粒子数。▲W:OFF,显示上一周期内的采样粒子浓度(颗/米3)。若采样泵不打开,此键只能实行两种显示状态间的转换,即观察状态关闭。
”增”:  在参数设置画面,令●上移,另一功能是改变需要修改的参数值。在测量界面,”增”键向上翻看存储的历史数据。
”减”    在参数设置画面,令●下移,另一功能是移动下划线至需要修改的参数处。在测量界面,”减”键向下翻看存储的历史数据。
■后面板
开关:电源开关
电源插座:连接电源适配器(220V交流输入,16.8V直流输出)
RS232:连接计算机
采样口:接采样管
自净口:采样口与此连接,仪器处于自净状态。
五、操作说明
１．准备操作
⑴．打开后面板上电源开关,按”确认”键将屏幕调至图(四)测量界面,观看电池符号,若电池电量不足,则将电源适配器插入”电源插座”,给电池充电,同时仪器也可正常操作使用。
⑵．开机预热10分钟左右。
⑶．过滤器自净口与采样口相连,按”确认”两次进入测量界面,打开”采样”,使仪器自净清零。 
２．操作步骤
将采样管接在”采样口”处。
在参数设置界面下按 ”增””减”及”确认”键,设定所需工作参数。若数据库清零,将光标移至数据清零处,按”增”令数字由”0”改成”5”然后按”确认”键,数字变成”9”即可。若不修改工作参数,直接按”确认”键进入测量界面。
按”确认”键进入测量界面后,按”采样”键,打开泵源进行采样测试,采集数据。若采样结果理想,则按”确认”键,令液晶屏下方”Rec”为ON,存贮采样数据,否则就按”确认”键,令”Rec”为OFF。按”循环”键,转换显示方式。按”增””减”键,在第一、第三状态可翻动观察以前某周期采样记录。再按”采样”键,则为关。
在测试界面时,若需改变工作参数,按”退出”键退回到参数设置状态进行。
打印:①采样泵开启时,在测量界面浓度显示方式下,按”打印”键,令”Prt”为ON,即每个周期结束时打印数据为测量浓度(颗/米3),不需打印时再按”打印”键令”Prt”OFF。在其它显示方式下则每周期结束时打印对应周期内的粒子数。置信度设定状态下,最终打印置信度值及洁净级别。
②采样泵关闭时,按”增””减”键调至需打印的起始页,按”打印”键即从这一页开始打印,直至不需打印时再按”打印”键,打印结束。不受屏幕下方”Prt”ON或OFF的影响。
③查询数据打印:在非置信度情况下,将查询数据调到需打印的地方,按”打印”键即开始打印,不需打印时再按”打印”键停止打印,打印内容为对应周期内的粒子数。在置信度情况下,将查询数据调到需打印的地方,按”打印”键即开始打印,不需打印时再按”打印”键停止打印,打印内容为置信度结果。
为保证仪器测量精度,关机前重复准备操作第三步,用短管将采样口与进气口相连,打开”采样”,使仪器自净2—3min,计数趋近于0,然后关机。

注意:为延长泵的寿命,不采样时随时关泵。
 假如仪器受干扰功能不正常,请按”复位”键。

六、 打印机注意事项
(1)．安装纸卷:仪器出厂时已安装了大约可打印200组数据的纸卷。用户可直接使用。纸卷用完后,可按如下过程进行装纸:向上拨开打印机上盖按扭,将纸卷放入打印机纸兜内,打印面朝上,轻轻拉出部分打印纸,再盖上打印机盖板即可。(注意热敏纸正反面,可用手指划线判断,有黑色线条的为打印面)。
(2)．装好纸后,不可用力拽纸。
(3)．热敏打印机打印的数据,不宜长期保存,如需长期保存,请复制数据。

4☆氮吹仪
氮吹仪的使用方法
氮吹仪的使用方法:
氮吹仪安装好后,底盘支撑在恒温水浴内,打开水浴电源,设定水浴温度,水浴开始加热。
提升氮吹仪,将需要蒸发浓缩的样品分别安放在样品定位架上,并由托盘托起,其中托盘和定位架高低可根据实验样品试管的大小调整。
打开流量计针阀,氮气经流量计和输气管到达配气盘,配气后送往各样品位上方的针阀管。
然后,经过调节针阀管针阀,氮气经针阀管和针头吹向液体样品试管,可经过调整锁紧螺母能够上下滑动针阀管,调整针头高度,以样品表面吹起波纹,样品又不溅起为好。
最后,将氮吹仪放于水浴中,直到蒸发浓缩完成。

5☆分光光度计
1．调整
(1) 在接通电源前,应对仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固,接地线通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再接通电源。
(2) 将灵敏度旋钮调至”1”档(放大倍率最小)。调波长调节器至所需波长。
(3) 开启电源开关,指示灯亮,选择开关置于”T”,调节透光率[100%T]旋钮使数字显示[100.0]左右,预热20min .
根据溶液浓度大小,选择液层厚度合适的吸收池。
2．校正
!)打开吸收池暗室盖(光门自动关闭),调节[0% T]旋钮,使数字显示为”00.0”,盖上吸收池盖,将参比溶液置于光路,使光电管受光,调节透光率[100% T] 旋钮,使数学显示为”100.0”。
(2)如果显示不到”100”,则可适当增加电流放大器灵敏度档数,但应尽可能使用低档数,这样仪器将有更高的稳定性。当改变灵敏度 后必须重新校正”0”和”100”。
(3)按(1)连续几次调整”00.0”和”100.0”后,如将选择开关置于”A”,调节吸光度调零旋钮,使数字显示为”.000”,即可进行下面吸光度A的测量;如将选择开关置于”C”,将标准溶液推入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示值为已知标准溶液浓度数值,即可进行下面浓度c的测量。
3．测定
(１) 吸光度Ａ的测量。将要测Ａ的试样溶液推入光路,显示值即为待测样品的吸光度值Ａ。
(２) 浓度c的测量。将要测c试样溶液推入光路,即可读出待测样品的浓度值c。
4．结束
测量完毕,关闭电源,将各调节旋钮恢复至初始位置。取出吸收池洗净,晾干,存于专用盒内。
注意事项:
(１) 使用前,使用者应该首先了解本仪器的结构和原理,以及各个旋钮之功能。
(２) 仪器接地要良好,否则显示数字不稳定。
(３) 如果大幅度改变测试波长时,在调整”00.0”和”100”后稍等片刻(因光能量变化急剧,光电管受光后响应缓慢,需一段光响应平衡时间),当稳定后,重新调整”00.0”和”100”即可工作。
(４) 仪器左侧下角有一只干燥剂筒,应保持其干燥,发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。
(５) 当仪器停止工作时,关掉电源,电源开关需同时切断,并罩好仪器

6☆高效液相色谱仪
高效液相色谱法(HPLC)是当前应用广泛的分离、分析、纯化有机化合物(包括能经过化学反应转变为有机化合物的无机物)的有效方法之一。 在已知的有机化合物中,约有80%能用高效液相色谱法分离、分析,而且由于此法条件温和,不破坏样品,因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部位。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、与柱或保护住、柱温控制器等,现代HPLC仪还有微机控制系统,进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。
当前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters 公司、Agilent 公司(原HP公司)、岛津公司等,国内有上海伍丰科学仪器有限公司,上海禾工科学仪器有限公司,大连依利特公司、北京创新通恒、北京温分等。
一、输液泵
1.泵的构造和性能
输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个质量和分析结果的可靠性。输液泵应具备如下性能:①流量稳定,其RSD应小于0.5%,这关系到定性定量的准确性;②流量范围宽,分析型应在0.1~10ml/min范围内连续调,制备型应能达到100ml/min;③输出压力高,一般应能达到150~300KG/CM2:④液缸容积小;⑤密封性能好,耐腐蚀。
泵的种类很多,按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔往复泵。恒压泵受柱阴影响,流量不稳定;螺旋泵缸体太大,这两种泵己被淘汰当前应用最多的是柱塞往复泵。
柱塞往复泵的液缸容积小,可至0.1ml,因此易于清洗和更换流动相,特别适合于再循环和梯度洗脱;改变电机转速能方便地调节流量,流量不受柱压影响;泵压可达400KG/CM2。ADW主要缺点是输出的脉冲性较大,现多彩采用双泵系统来克服。双泵按连接方式可分为并联式和串联式,一般说来并联泵的流量重现性较好(RSD为0.1%左右,串联泵为0.2~0.3%),但出现故障的机会较多(因多了单向阀),价格也较贵。
二、进样器
一般HPLC分析常见六通进样阀(以美国RHEODYNE公司的7725和7725I型最常见),其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。耐高压(35~40MPA),进样量准确,重复性好(0.5%),操作方便。六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。①用部分装液法进样时,进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%),并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度,而且易产生由进样引起的峰展宽。②用完全装液法进样时,进样量应不小于定量环体积的5~10倍9最少3倍,这样才能完全置换定量环内和流动相,消除管壁效应,确保进样的准确度及重复性。
三、色谱柱
色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10UM等,柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析,只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子,因此一般10~30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到最佳效率,除柱外死体积要小外,不要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使最好的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍料径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
四、检测器
HPLC的检测器分为两类:通用型检测器和专用型检测器。
1.通用型检测器可连续测量色谱柱的流出物的全部特性变化,一般采用差分测量法,这类检测器包括示差折光检测器、介电常数检测器、电导检测器等,通用检测器适用范围广,但由于对流动相有响应,因此易受温度变化、流动相和组分的变化的影响,噪声和漂移都比较大,灵敏度较低,不能用梯度洗脱。
2.专用型检测器用以测量被分离样品组分某种特性的变化。这类检测器对样品中组分的某种物理或化学性质敏感,而这一性质是流动相所不具备的,或至少在操作条件下不显示。这类检测器包括紫外检测器、荧光检测器、放射性检测器等。

实验内容和原理:
储备器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)中;由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过重复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分配成单个祖坟依次从柱内流出,经过哦检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
在适宜的条件下,高效液相色谱可分离溶液中不同的组分,样品进高效液相色谱仪,经反相C\18液相色谱分离后,以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度成线性关系进行定量。本实验采用内标法,用β-胡萝卜素标准品分析未知浓度的类胡萝卜素产物的相关含量。
实验步骤:
1、 样品和标准品溶解和过滤:用丙酮作溶剂,溶解β-胡萝卜素标准品和类胡萝卜素样品。用滤膜(0.45um)过滤,备用。
2、 开机,依次经过各分离单元、检测器、计算机电源。
3、 流动相脱气,确认所有溶剂管路都充满溶剂。
4、 启动溶剂管理系统,冲洗自动进样器和进样针,装入样品和转盘,编辑分析方法及执行样品分析表。
5、 样品测定:色谱条件,色谱柱(C18,4.6mm*250mm,5um);流动相,甲酸;乙腈;异丙醇=5:4:1(v/v);流速 1ml/min;检测波长,480nm。
单位内标法定量:取混合使用液20ul注入高效液相色谱仪进行分离。记录各个峰的峰面积。按下式计算相对含量。
q样品=(q标准品*A样品)/A标准品
6、 关机,使用完毕后,按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫,关闭电源开关。数据采集完毕后,关闭紫外检测器电源开关。处理数据后,关闭计算机电源开关,并做使用登记。

7☆高压灭菌锅
高压灭菌器使用方法
高压灭菌器使用方法以博迅YXQ-LS-50SII为例
一、适用范围
本灭菌器是利用加压的饱和蒸汽对医疗器械、敷料、器皿、药液等进行灭菌的设备,适用于医疗卫生单位使用。
二、结构特点
★外形为方形立式结构。外壳(除后封板处)、灭菌器外桶、灭菌网篮选用不锈钢材料制成。
★装有安全阀,桶内压力达到0.23Mpa时,安全阀能自动起跳,释放过高的压力,性能可靠。
★压力表具有压力、温度对应指示,观察清晰。
    ★装有关门连锁装置,确保安全使用。
★本容器具有自动保护功能,当容器内缺水干烧时,将自动切断加热器电路,并停止灭菌器工作,有效保护设备使用,同时蜂鸣器响,提醒用户及时补充水量。
★温度、时间采用单片机技术的新型智能数显调节仪。用户可根据不同要求,经过操作控制面板的触摸键对温度及时间进行设定、调节达到灭菌目的。
三、技术参数
a.灭菌器容积:50L、75L;       
b. 控温范围:109℃~135℃;
c.电源电压:交流220V±10%,50HZ±1%;
d.加热器功率:3200VA;3500VA;
e.工作最高压力:0.212MPa;温度:135℃;
f. 环境温度:5℃-40℃;相对湿度≤80%RH。
四、安装要求
使用前详细阅读本说明书,并严格按说明书要求操作。
警告语”汽未放尽,不得开启