德国拜发-R-Biopharm莱克多巴胺瘦肉精检测试剂盒说明书.pdf

RIDASCREEN Ractopamin 酶联免疫法定量检测莱克多巴胺 订货号：R9901 体外检测试剂 储存温度 2-8 C 德国拜发 华南地区总代理广州测迪生物科技有限公司电话号码 [phone] 杨经理手机号码 1 3 6 1 0 1 7 4 8 8 7德国拜发 R-B i o p h a r m2 RIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 地址：拜发分析系统销售（北京）有限公司 北京市朝阳区霄云路 26 号 鹏润大厦 B2908 邮编：100016 www.r- 欢迎随时联系德国拜发中国区：电话：客服中心：[phone] 传真/邮箱：RIDA 和 RIDASCREEN 均为 R-Biopharm 德国拜发公司的注册品牌标志 制造商：R-Biopharm AG,Darmstadt,德国 R-Biopharm AG 拥有 ISO 9001 认证。RIDA and RIDASCREEN are registered trademarks of R-Biopharm AG Manufacturer:R-Biopharm AG,Darmstadt,Germany R-Biopharm AG is ISO 9001 certified.+86 20 8438 6071德国拜发 R-B i o p h a r mRIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 3 产品简介产品简介 RIDASCREEN Ractopamin（订货号：R9901）莱克多巴胺检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫反应，用于定量检测尿液、肉和肝脏中的莱克多巴胺。试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂，包括标准品。试剂盒足够进行 96 次检测（包括标准测定）。定量分析需要使用微孔板酶标仪。样品处理：尿液：不用进行样品处理直接检测 尿液（含水解物）：水解、提取、离心和蒸干 肉、肝脏：均质、提取、离心、蒸干和再离心 检测时间：样品制备（以 10 个样品为例）尿液（可能进行离心或过滤）.约 10 分钟 尿液（含水解物）.约 3 小时 肉、肝脏.约 1.5 小时 检测过程.1 小时 15 分钟 检测限：尿液.约 600 ppt 尿液（水解）.约 700 ppt 肉 .约 200 ppt 肝脏 .约 300 ppt 回收率：尿液.约 98%尿液（水解）.约 89%肉 .约 92%肝脏 .约 73%特异性：RIDASCREEN Ractopamin 莱克多巴胺检测试剂盒的特异性根据与相应物质的交叉反应确定。莱克多巴胺 .100%多巴酚丁胺.约 4.7%马布特罗.约 4.4%利托君.约 1.4%克伦丙罗,西马特罗.0.1%塞布特罗.0.01%克仑潘特 .0.01%马喷特罗 .0.01%特普他林.0.01%溴代克仑特罗.0.01%沙丁胺醇.0.01%德国拜发 R-B i o p h a r m4 RIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 克伦特罗.0.01%溴布特罗.0.01%卡布特罗.0.01%1.用途用途 RIDASCREEN Ractopamin 莱克多巴胺检测试剂盒，采用竞争性酶联免疫反应，用于定量检测尿液、肉和肝脏中的莱克多巴胺。2.概要概要 莱克多巴胺是-兴奋剂的一种。-兴奋剂曾作为生长改良剂被用于家禽/畜，以改变其肥/瘦肉比例或加速其生长（提高 FCR=feed conversion ratio）。然而至今为止，这类物质仍未被欧盟批准作为正式肥育辅药使用。此外，因其可分解脂肪、同化蛋白等功能，莱克多巴胺可令平滑肌放松，故其可在临床上作为平喘药。所以在违禁使用莱克多巴胺后，其残留量可能给消费者带来危害。因此在营养食品中禁止加入莱克多巴胺。3.检测原理检测原理 检测的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对莱克多巴胺抗体的捕获抗体。加入莱克多巴胺抗体后，会与捕获抗体连接。经过孵育及洗板步骤后，加入标准品、样品溶液及莱克多巴胺酶标记物（酶连接物），游离的莱克多巴胺与莱克多巴胺酶标记物竞争莱克多巴胺抗体（竞争酶标免疫分析法），没有连接的莱克多巴胺酶标记物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝转变为黄色。在 450 nm 处测量，吸收光强度与样品中的莱克多巴胺浓度成反比。4.试剂盒组份试剂盒组份 每一个盒中的试剂足够进行 96 个试验（包括标准测定），盒中的组份如下：1 x 96 孔微孔板（12 条每条 8 孔）包被有针对莱克多巴胺抗体的抗体 6 x 莱克多巴胺标准品（每瓶 1.3 ml）0 ppt（零标准品），100 ppt，300 ppt，900 ppt，2700 ppt，8100 ppt 莱克多巴胺水溶液，即用型 1 x 酶连接物（12 ml）.红色瓶盖 过氧化物酶标记的莱克多巴胺 即用型 德国拜发 R-B i o p h a r mRIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 5 1 x 莱克多巴胺抗体（12 ml）.黑色瓶盖 即用型 1 x 红色发色剂（每瓶 10 ml）.棕色瓶盖 （底物/发色剂溶液），红色 含四甲基对二氨基联苯 1 x 反应终止液（14 ml）.黄色瓶盖 含 1 N 的硫酸 1 x 缓冲液（110 ml）.白色瓶盖 样品稀释缓冲液 1 x 洗涤缓冲液（盐）用于制备 10 mM 磷酸缓冲液，pH 7.4 含 0.05%Tween 20 5.另需的试剂和设备另需的试剂和设备 5.1.设备：微孔板酶标仪（450 nm）搅拌器 振荡器 离心机和离心管（50 ml）刻度移液管 旋转式汽化器（蒸发器）可调式 20 l-200 l 和 200-1000 l 微量移液器 5.2.试剂：乙腈 乙酸乙酯 正己烷（或正庚烷）来自于大肠杆菌的 -葡萄糖醛酸酶（Sigma-Aldrich 公司，订货号：G7646），详细情况见附带的说明书（08-08-19）75 mM 磷酸钾缓冲液，pH 6.8：缓冲液 A：10.2 g KH2PO4加入蒸馏水至 1000 ml 和 缓冲液 B：13.06 g K2HPO4 加入蒸馏水至 1000 ml 通过混合缓冲液 A 和 B（按比例 1:1），调节 pH 值至 6.8 25 mM 硼酸盐缓冲，pH 9.0：9.5 g 10 水硼酸 2 钠（Na2B4O7 x 10 H2O）加入蒸馏水至 1000 ml 1 N NaOH 德国拜发 R-B i o p h a r m6 RIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 6.操作者应该注意之事项操作者应该注意之事项 反应终止液含 1 N 的硫酸（R36/38，S2-26）。7.储存条件储存条件 保存试剂盒于 2-8 C，不要冷冻。将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于 2-8C条件下。红色底物/发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。对过了有效期（见试剂盒标签）的试剂盒不再提供任何质量保证。不能交叉使用不同批号的盒中试剂。8.试剂变质的迹象试剂变质的迹象 红色底物/发色剂在使用前发现颜色变蓝 零标准品的吸光度值小于 0.6（E450 nm 0.6）9.样品处理样品处理 样品冷藏避光保存 9.1.尿液 9.1.1 尿液检测不需要进行处理 20 l 尿液样品直接进行检测（如果尿液混浊，建议试验前先进行离心或是过滤）9.1.2 尿液水解处理后进行检测 取 0.5 ml 尿液于螺纹离心管中，加入 3 ml 75 mM 磷酸钾缓冲液，pH 6.8（参见5.2.）稀释 加入 10 l 来自于大肠杆菌的 -葡萄糖醛酸酶（参见 5.2.）在 37 C 条件下水解 2 小时（或者在室温下过夜）加入 2 ml 25 mM 硼酸盐缓冲液，pH 9.0（参见 5.2.）检查样品 pH 值，如有可能用 1 N NaOH 调节 pH 至 8-9 分别用 3 ml 乙酸乙酯两次振荡，也就是约 30 秒漩涡振荡 离心：10 min/4000 g/20-25 C 取上清液（约 6 ml）于新离心管中，60 C 蒸干 德国拜发 R-B i o p h a r mRIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 7 干燥残留物溶于 0.5 ml 样品缓冲液（参见 4.）每孔取 20 l 进行检测 9.2.肉和肝脏 去除油脂后用搅拌器或电动搅拌棒将样品均质 取 3 g 均质后样品于螺纹离心管中，加入 8 ml 乙腈和 1 ml 乙酸乙酯 漩涡混合器充分混合 振荡 30 分钟（回旋振荡）离心：10 min/4000 g/20-25 C 取 4 ml 上清液（相当于 1 g 样品）于新离心管中，在 60 C 条件下蒸干 残留物溶于 2 ml 正己烷（或正庚烷）加入 1 ml 样品缓冲液，漩涡混合器混合 30 秒 离心：10 min/4000 g/20-25 C 小心收集下层液相 每孔取 20 l 下层液体进行检测 10.检测步骤检测步骤 10.1.检测前的准备 使用之前将所有试剂回温至室温（20-25 C）。洗涤缓冲液洗涤缓冲液是 PBS-Tween 缓冲液，为此试剂盒中提供了一袋洗涤缓冲液盐（参见4.）。使用 1 l 蒸馏水溶解一袋洗涤缓冲液盐制得缓冲液。制备好的缓冲液可在 2-8 C 下保存大约 4-6 周时间。或者：用100 ml 蒸馏水溶解袋中的洗涤缓冲液盐，得到10 倍的洗涤缓冲液盐浓缩液，此溶液能在室温（20-25 C）下储存8-12 周。使用时，用9 份蒸馏水溶解1 份此浓缩液得到洗涤缓冲液。10.2.检测操作 仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。1.将足够标准品和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准品和样品做两个平行实验，记录下标准品和样品的位置。2.加入 100 l 抗体溶液到每个微孔，小心混合后在室温（20-25 C）下孵育15 分钟。3.倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打 3 次）以保证完全除去孔中的液体。每次用 250 l 洗涤缓冲液（参见 10.1.）洗涤微孔，重复操作两次。德国拜发 R-B i o p h a r m8 RIDASCREEN Ractopamin 09-02-06 4.加入 20 l 的标准品或处理好的样品到各自的微孔中。标准品和样品做两个平行实验。然后加入 100 l 酶连接物到微孔，小心地充分混合。室温（20-25 C）下孵育 60 分钟。5.倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打 3 次）以保证完全除去孔中的液体。每次用 250 l 洗涤缓冲液（参见 10.1.）洗涤微孔，重复操作两次。6.加入 100 l 底物/发色试剂（棕色瓶盖）到微孔中，小心充分混合并在室温（20-25 C）下暗处孵育 15 分钟。7.加入 100 l 反应终止液到微孔中。混合好在 450 nm 处测量吸光度值。充分混合后 30 分钟内于 450 nm 处测量吸光度值。11.结果评估结果评估 请使用 R-Biopharm 德国拜发公司专门为 RIDASCREEN 系列产品设计的应用软件RIDA SOFT Win（订货号：Z9999）来进行结果分析。关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。以下是没有使用软件的计算方法：标准品的吸光度值（或样品）-x 100 =%吸光度比值 零标准品的吸光度值 吸光度值以百分比表示，因此零标准品等同于 100%。计算标准品相应的比值，并绘成一个与莱克多巴胺 ng/kg 相关的半对数坐标系统的曲线图。为了真实反映莱克多巴胺的浓度 ng/kg（ppt），从校正曲线上读出的浓度值必须乘以相对应样品的稀释倍数。按照说明书中给出的方法进行操作，可得到以下样品稀释倍数：尿液.1 尿液（水解后）.1 肉.1 肝脏.1 以上信息是基于我们现有知识的基础上对我们的产品及其相关应用的说明。而并非对产品的任何特定性能或特定使用目的进行担保。R-Biopharm 德国拜发公司不承担除试剂基本品质之外的任何责任。除因产品使用而造成的直接或间接损坏及损失外，其它有缺陷的试剂盒可退换。德国拜发 R-B i o p h a r m